1、ICSICS 65.020.3065.020.30B B 4343团团 体体 标标 准准T/SDAAT/SDAA 02502520212021饲料中主要病原微生物快速检测方饲料中主要病原微生物快速检测方法法-微生物快速检测系统微生物快速检测系统(MBS)Rapid detection method of main pathogenic microorganisms infeed-Micro Biology Survey（MBS）2021202106062 22 2 发布发布2021202107072 23 3 实施实施山东省畜牧协会发布发布全国团体标准信息平台2T/SDAAT/SDAA 0 0
2、2525-202-2021 1全国团体标准信息平台3T/SDAAT/SDAA 0 02525-202-2021 1前前 言言本标准按照 GB/T1.1-2020 给出的规则起草。本标准由山东省畜牧协会提出并归口。本文件起草单位：青岛农业大学、山东农业大学、山东省农业科学院家禽研究所、山东畜牧兽医职业学院、山东省畜牧产品质量安全中心、临沂大学、新希望六和股份有限公司、RoyalBiotech。本文件主要起草人：朱风华、朱连勤、陈甫、尹燕博、刘水涛、宋志刚、宋敏训、王述柏、孙京新、李舫、孟凡生、冯鑫磊、郭吉原，宋新磊、徐妍。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台4T/SDAAT/SDAA 0 02
3、525-202-2021 1全国团体标准信息平台5T/SDAAT/SDAA 0 02525-202-2021 1饲料中主要病原微生物快速检测方法饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统（微生物快速检测系统（MBS）1.饲料中主要病原微生物快速检测方法饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统（微生物快速检测系统（MBS）1.1 中文名称中文名称饲料中主要病原微生物快速检测方法-微生物快速检测系统1.2 英文名称英文名称Rapid detection method of main pathogenic microorganisms in feed-Micro Biology
4、 Survey（MBS）2.范围范围本标准规定了饲料中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、单核增生李斯特菌微生物快速检测系统（MBS）检测方法。本标准适用于配合饲料（蛋鸡配合饲料、肉鸡配合饲料、猪配合饲料、肉鸭配合饲料）、动物源性饲料（血粉、肉骨粉、鱼粉、羽毛粉、乳清粉）、植物源性饲料（玉米、麸皮、豆粕、花生粕、棉籽粕）中细菌总数、沙门氏菌、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、单核增生李斯特菌含量的快速检测。3.规范性引用文件规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引
5、用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19489 实验室 生物安全通用要求4 原理原理MBS 方法通过氧化还原指示剂测量微生物主要代谢途径中氧化还原酶的催化活动。氧化还原指示剂会根据介质的氧化状态改变指示剂颜色。颜色变化耗时与微生物污染程度的Log 值呈负相关关系，从而可获得观察到的酶活性与检测样本中活细胞的数量之间存在的确定相关性。微生物快速检测试剂瓶内的营养物，维持目标细菌的生长；选择性药剂，抑制非目标细菌的生长；而其中的还原剂，作为递氢体，能在细胞色素 C 后把电子转移到细菌呼吸链，而又全国团体标准信息平台6T/SDAAT/SDAA 0 02525-202-2021
6、1不被氧分子氧化。如果目标细菌存在，那么检测瓶中的氧化还原反应色素会根据媒质的氧化还原状态改变颜色。MBS 主机通过三光波探测颜色变化，最后根据整合颜色变化的时间确定细菌的含量。5试剂和材料试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。5.120%无菌甘油：水：甘油=5:1。5.2微生物快速检测试剂瓶。6仪器和设备仪器和设备6.1微生物快速检测系统（MBS）：MBS-MR 主机、笔记本电脑、MBS 中文操作软件和微生物快速检测试剂瓶。6.2冰箱：2-5或-20。6.3涡旋振荡器。6.4电子分析天平：感量 0.01g。7 检验检验7.1饲料中细菌总数的检验饲料中细菌总数的检验7.1.1将 MB
7、S-MR 主机、笔记本电脑接通电源，并用数据线将两者连接，在电脑上启动MBS 中文操作软件，点击“参数”录入相关信息（包括：操作员姓名、操作员职务、检测样本所属客户等信息）；在软件操作界面的样品设置选项中对样品进行基本信息设置，在分析设置选项中设置细菌总数，并选择定量分析。7.1.2将配套 20%无菌甘油加入到细菌总数试剂瓶中，溶解试剂。7.1.3带好无菌手套，用消毒后的药匙或无菌镊子取待测饲料样品，并准确称取 1g（精确到 0.01g），加入到细菌总数试剂瓶中。7.1.4摇动试剂瓶（手摇 1-2 分钟或涡旋振荡器振荡 20-30 秒），直到饲料样品溶解完全或与试剂充分混合。7.1.5设置相应
8、的参数后，将处理好的试剂瓶放入 MBS-MR 主机中，进行孵育，MBS-MR主机会自动控温，然后开始进行分析。7.1.6分析完成后，按下试剂瓶顶部，瓶盖内部的消毒灭菌物质会释放至试剂瓶内，5-10分钟即可充分灭菌，将灭菌后的试剂瓶丢弃到生物垃圾箱中集中处理。7.1.7检测结束后，系统可以输出检验报告，报告的内容包括用户设定的全部信息、检测结果，如变色时间、样本中微生物的浓度和检测中的所有参数。7.2饲料中沙门氏菌的检验饲料中沙门氏菌的检验全国团体标准信息平台7T/SDAAT/SDAA 0 02525-202-2021 17.2.1在7.1.1中的分析设置选项中设置沙门氏菌，并选择定量分析，其他
9、步骤同7.1.17.1.7。7.3饲料中大肠菌群的检验饲料中大肠菌群的检验7.3.1在7.1.1中的分析设置选项中设置大肠菌群，并选择定量分析，其他步骤同7.1.17.1.7。7.4 饲料中金黄色葡萄球菌的检验饲料中金黄色葡萄球菌的检验7.4.1在 7.1.1 中的分析设置选项中设置金黄色葡萄球菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.17.1.7。7.5 饲料中大肠埃希菌的检验饲料中大肠埃希菌的检验7.5.1在 7.1.1 中的分析设置选项中设置大肠埃希菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.17.1.7。7.6 饲料中单核增生李斯特菌的检验饲料中单核增生李斯特菌的检验7.6.1在 7.1.1 中
10、的分析设置选项中设置单核增生李斯特菌，并选择定量分析，其他步骤同7.1.17.1.7。8 结果记录结果记录微生物快速检测系统（MBS）自动给出定量分析检测报告，读取数据，记录结果。9 质量控制质量控制本方法在 1-108cfu/ml（g）添加浓度水平上的回收率为 87.19%-97.66%(n10)，变异系数为 7.18%-10.28%（n10）。全国团体标准信息平台8附录 A微生物快速检测（MBS）孵育温度/检测时间快查表噬温噬温菌总菌总数数2222菌落菌落总数总数大肠大肠菌群菌群大肠大肠杆菌杆菌大肠大肠埃希埃希氏菌氏菌金金黄黄色色葡葡萄萄球球菌菌铜绿铜绿假单假单胞菌胞菌沙沙门门氏氏菌菌李李
11、斯斯特特菌菌肠肠球球菌菌产气产气荚膜荚膜梭菌梭菌乳乳酸酸杆杆菌菌真菌真菌(曲霉菌)酵母酵母菌菌酵母酵母属属检测瓶代检测瓶代号号CBT-A01CBT-A01CO-A02CO-A02EB-A03SP-A04PAO-A05SL-A06LY-A07EF-A09CP-A17LB-AAS-A10SC-A112020下保下保质期质期(月月)12126646666333335 5下保下保质期质期(月月)2424121281212121266666孵育孵育温度温度()2230374437373737373744373030阴性色阴性色BLUEBLUEREDREDREDREDBLUEREDBLUEYELLOWYE
12、LLOWREDBLUEBLUE阳性色阳性色YELLOWYELLOWYELLOWYELLOWYELLOWYELLOWYELLOWYELLOWYELLOWBLACKBLACKYELLOWYELLOWYELLOW样样本本中中的的细细菌菌浓浓度度CFU/mlorCFU/g变色时间（小时）变色时间（小时）11077.30 3.004.002.304.307.304.304.007.304.307.30196.006.0011067.33.0042.34.37.34.34.007.34.37.329.3661105125.306.35.37.3117.34.3127.312401313110416.38.009.39.31020108.3161016.35120.320.3110320.311.0012.3131329.31313.320.31320.36127.327.31022514.001618163616182516257235351029.316.00192219431923291929834242133.318.0022262246222833.32233945050034.0020.0024.0030.0024.0048.0024.0032.0036.0024.0036.0096.0060.0060.00全国团体标准信息平台9全国团体标准信息平台