1、1CS:67.120.01B41备案号：16742-2005D月上海市地方标准DB31/T337-20052灯nb猪尿中沙丁胺醇的测定(酶联免疫吸附分析法和液相色谱-质谱法)Determination of salbutamol in swine urine(ELISA LC-MS)DB2005-02-07发布2005-03-01实施上海市质量技术监督局发布DB31/T.337-20056试样制备猪尿样品经4000r/min离心5min后取上清液或经滤膜过滤后直接用于分析。7操作方法7.试剂盒和待检样品检测前在1925下平衡2h。7.2去除酶标板孔内的液体，用缓冲液清洗酶标板3次（每次2mi)
2、,吸干酶标板孔内的水分。7.3加样顺序依次在酶标板孔内加入对照溶液系列、样品溶液各50L,再在酶标板孔内加入酶标记沙丁胺醇100L。7.4反应酶标板用振荡仪振荡混合30s后，加膜封盖后在2530孵育30min。7.5清洗用缓冲液清洗酶标板3次（每次2mi),吸干酶标板孔内的水分。7.6显色每孔加50L反应底物和50L显色剂，振荡混合15s,加膜封盖后置2530下暗处反应15min。7.7终止每孔加50L终止液。7.8测定用酶标测定仪于450nm波长处测定。8结果计算和判定8.1实验成立条件，如果0标准的吸光值小于0.8，本次实验失败。8.2根据标准曲线计算样品中沙丁胺醇的含量，当样品中沙丁胺醇
3、的含量大于1.0g/L时，判定为阳性。8.3灵敏度本方法的检测限为1.0g/儿。液相色谱-质谱法(LC-MS)9方法提要样品经固相萃取小柱净化，洗脱液浓缩后用0.1mo1/L的盐酸溶液溶解，供液相色谱一质谱仪进行检测。10试剂除方法另有规定外，试剂均为分析纯，实验室用水符合GB/T6682中二级水的规定。10.1固相萃取C18小柱：200mg,2mL。10.2甲酸。10.3甲醇：色谱纯。3DB31/T337-200510.4乙腈：色谱纯。10.5盐酸。10.6氢氧化钠。10.7沙丁胺醇对照品：纯度98%。10.8沙丁胺醇贮备液：精密称取沙丁胺醇对照品，用水配成约100g/mL对照品贮备液，在冰
4、箱中冷藏保存，有效期六个月。10.9沙丁胺醇对照品工作液：将贮备液用0.1mo1/L盐酸溶液依次稀释成浓度为0.01、0.05、0.1、0.2、0.5、1g/mL的对照品工作液，在冰箱中冷藏保存，有效期一个月。10.100.1mo1/L盐酸溶液：取盐酸0.9mL,加水稀释至100mL。10.111mmo1/L氢氧化钠溶液：取氢氧化钠0.4g,加水稀释至100mL配制成0.1mo1/L氢氧化钠溶液；取0.1mo1/L氢氧化钠溶液1.0mL加水稀释至100mL。10.125%甲醇溶液：取甲醇5mL,加水稀释至100mL。10.130.2%甲酸溶液：取甲酸1mL,加水稀释至500mL。10.14氮气
5、：纯度大于99.99%。11仪器11,1液相色谱-质谱仪：配有电喷雾电离源。11.2旋转蒸发仪。11.3离心机：转速4000r/min。11.4滤膜：0.2m。12操作方法12.1样品处理猪尿样品经4000r/min离心5min后取上清液或经滤膜过滤后直接用于分析。12.2净化固相萃取小柱先用5.0mL甲醇和5.0mL水活化，用2.0mL1mmo1/L氢氧化钠溶液平衡，再加入5.0mL上述样品液，用5%甲醇溶液2.0mL淋洗，用5.0mL甲醇洗脱待测成分，收集洗脱液，50旋转蒸发至干，用0.1mo1/L的盐酸溶液0.5mL溶解残留物，过0.2m滤膜后进样测定。12.3色谱条件12.3.1色谱柱：C1g150mm2.1mm,3m。12.3.2流动相：0.2%甲酸溶液：乙腈(94：6)。12.3.3流速：0.2mL/min。12.3.4进样量：20L。12.3.5柱温：30。12.4质谱条件12.4.1电喷雾电离源(ESI)。12.4.2离子源温度：150。12.4.3脱溶剂温度：250。12.4.4毛细管电压：3.50kV。12.4.5锥孔电压：20V。12.4.6氮气流速：300L/h。