1、ICS 65.020.30 B 43 备案号：43105-2014 DB50 重庆市地方标准 DB50/T 5522014 牛程序化输精技术规程 Regulation of bovine programmed insemination 2014-06-25 发布 2014-08-01 实施 重庆市质量技术监督局 发 布 DB50/T 5522014 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由重庆市农业委员会提出并归口。本标准起草单位：西南大学、重庆市畜牧科学院。本标准主要起草人：付树滨、左福元、王玲、龙翔、周沛、黄德均。DB50/T 5522014 1 牛程序
2、化输精技术规程 1 范围 本规程规定了牛程序化输精的术语和定义、程序化处理、发情鉴定、输精准备、输精、妊娠检查和记录。本规程适用于经产牛程序化输精技术。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 4143-2008 牛冷冻精液 GB/T 5458 液氮生物容器 NY/T 1335-2007 牛人工授精技术规程 3 术语和定义 NY/T 1335-2007界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了NY/T 1335-2007中的某些术
3、语和定义。3.1 经产牛 multipara cow 第一胎妊娠、产犊后的母牛。3.2 程序化输精 programmed insemination 通过药物集中处理，在短时间内对被处理母牛进行人工输精的技术。3.3 发情周期 estrous cycle 母牛的本次发情开始至下次发情开始、或本次发情结束至下次发情结束所间隔的时期，一般为17 d25 d，平均21 d。3.4 发情鉴定 estrus detection 通过外部观察或其他方式确定母牛发情程度的方法。DB50/T 5522014 2 NY/T 1335-2007，定义3.4 3.5 人工输精 artificial inseminat
4、ion 在人工条件下利用器械将精液输送到发情母牛生殖道内，使母牛受孕的配种方法。3.6 情期受胎率 conception rate of same insemination 同期受胎母牛数占同期输精情期数的百分比。NY/T 1335-2007，定义3.5 3.7 受胎率 conception rate 同期受胎母牛数占同期参加输精母牛数的百分比。NY/T 1335-2007，定义3.6 3.8 繁殖率 reproductive rate 同期分娩母牛数占同期应繁殖母牛数的百分比。NY/T 1335-2007，定义3.7 4 程序化处理 4.1 牛基本条件 产后第 50 d 及 50 d 以上的
5、健康、繁殖机能正常的未妊娠普通母牛。4.2 处理时间 在母牛发情周期的第 5 d9 d 进行处理。4.3 处理药物 促性腺激素释放激素（GnRH）和氯前列醇钠（PG-Cl）。4.4 处理方法 具体处理方法见表1。DB50/T 5522014 3 表1 程序化输精处理方法 序号 时间 d 方法 1 0 肌肉注射 100 g 的 GnRH 2 7 肌肉注射 0.6 mg 的 PG-Cl 3 9.5 肌肉注射 100 g 的 GnRH 4 10 人工输精操作 注：在第 0 d 注射 GnRH 后到第 9.5 d 注射 GnRH 前，若母牛发情，应按照本标准第 7章进行人工输精，完成输精后无需进行后面
6、的处理；在第 9.5 d 注射 GnRH 以后，不论母牛表现或者未表现发情，均应在第 10 d 进行人工输精。5 发情鉴定 5.1 外部观察法 通过母牛的外部表现症状和生殖器官的变化判断母牛是否发情和发情程度（见附录A）。5.2 “涂蜡笔”涂蜡笔时应从坐骨结节后 5 cm 开始至尾根部，宽度约为 2 cm，每头牛每天应标记一次。5.3 计步器法 计步器能够识别牛号，监测活动量，从而自动列出发情牛，同时也能够监测流产、肢蹄病和繁殖疾病。6 输精准备 6.1 器具的清洗和消毒 凡是接触精液和母牛生殖道的输精用器具的清洗和消毒应符合 NY/T 1335-2007 中附录 A 的规定，具体内容见附录
7、B。6.2 冷冻精液的保存 冷冻精液应浸在液氮生物容器中保存，液氮生物容器应符合 GB/T 5458 的规定。取放样品时在空中暴露时间5 s。6.3 精液品质 精液品质应符合 GB 4143-2008 中的第 4 章的要求，具体内容见附录 C。6.4 精液的准备 从液氮生物容器中取精液细管时，装有精液细管的提桶上缘不能超过液氮生物容器的结霜线，并且夹取冻精细管的操作时间5 s，在 5 s 内不能成功夹取的应迅速将提桶放入液氮容器中，停留 20 sDB50/T 5522014 4 后再重新进行夹取。精液细管取出后，应立即放入 35水中解冻，解冻时间为 45 s，45 s 后，取出冻精细管并擦干上
8、面的水珠，输精器推杆后退，细管装至管内，冻精封口端在前，棉塞端朝里，再用剪刀剪掉细管封口端 1 cm 左右，最后将塑料外套管套在输精管上并固定好。6.5 输精员的准备 输精员应将指甲剪短、磨光，然后再套上一次性长臂手套，并在一次性塑料长臂手套表面涂抹液体石蜡进行润滑。6.6 母牛的准备 输精前，将母牛保定好，用手排出直肠内宿便后，再用清水清洗母牛外阴部并擦拭干净。7 输精 推荐应用直肠把握输精法。具体操作方法应符合 NY/T 1335-2007 中的第 7 章的规定，具体内容见附录 D。8 妊娠检查 8.1 直肠检查 人工输精后 40 d 左右未发情的母牛可以通过直肠检查法检查妊娠情况，先摸子
9、宫颈，将中指向前滑动，向前向下向后寻找角间沟，找到角间沟后握住子宫角，然后后拉，翻起整个子宫，再对两侧宫角进行触诊，孕角与非孕角有明显差异，表现为有胎的一侧充满液体感，子宫壁薄轻、轻触摸会感知有玻璃球样的物体从两指间滑过，无胎的一侧感觉有弹性且弯曲明显。8.2 超声波检查 人工输精后 28 d 左右未发情的母牛可以通过超声波检查法检查妊娠情况，先将母牛直肠内的宿粪清理干净，清理宿粪的同时找到子宫角在盆腔内的位置，以便探头可以快速找到子宫角进行扫描，最后手握探头进入直肠，将探头放置于两侧子宫角上分别扫描，通过图像进行判断。8.3 血液检测 人工输精后 28 d 左右可以通过检测未发情的母牛血液中
10、 PAGs（Pregnancy Associated Glycoprotein，妊娠相关蛋白）确认妊娠牛只，找出空怀母牛。9 记录 9.1 记录内容 DB50/T 5522014 5 包括母牛号、母牛的品种、胎次、药物的注射时间、输精时间、冷冻精液信息、输精操作人员。9.2 情期受胎率、受胎率和繁殖率。情期受胎率、受胎率和繁殖率的计算方法见附录E。DB50/T 5522014 6 附 录 A（资料性附录）发情外部表现症状和生殖器官的变化 A.1 母牛发情外部表现症状和生殖器官的变化 母牛发情外部表现症状和生殖器官的变化见表A.1。表A.1 发情外部表现症状和生殖器官的变化 期别 发情初期 发情
11、中期 发情后期 外部表现 兴奋不安，嚎叫，食欲减退，反刍减少，常弓腰举尾，频频排尿，试图爬跨其它牛但不接受其它牛的爬跨。频繁爬跨其它牛，同时静立接受其它牛的爬跨。母牛变得安静，拒绝其它牛的爬跨。生殖器官变化 阴户肿胀、松弛、充血，子宫颈充血肿胀微张，有稀薄透明黏液流出。阴户皱襞展开、潮红、湿润，阴道黏膜充血，流出黏液量增加，透明、牵缕性强。流出的黏液量减少，黏性差、呈乳白色且浓稠，常黏在阴唇下部或臀部周围。DB50/T 5522014 7 附 录 B（规范性附录）输精器具的清洗和消毒 B.1 玻璃器皿 使用前用水浸泡和洗涤，有污物的宜用加洗涤剂的温热水或重铬酸钾洗液浸泡数小时后，用水洗净晾干备
12、用。玻璃输精管放置在电热干燥箱160保持0.5 h，自然冷却后备用。B.2 金属器械 金属输精器类洗净后，置电热干燥箱120保持1 h，自然冷却备用。B.3 橡胶塑料制品 玻璃输精器上橡胶头用蒸汽或体积分数75%酒精浸泡消毒，待酒精挥发尽后方能使用；塑料制品灭菌，可放置在紫外灯下60 cm处照射0.5 h以上。DB50/T 5522014 8 附 录 C（规范性附录）精液品质的要求 C.1 种公牛 应具有种用价值，外貌评价为特等或一等，体质健康，无遗传病，不允许有已发布的动物防疫法中所明确的二类疾病中的任何一种病。C.2 新鲜精液 色泽乳白色或淡黄色。精子活力65%，精子密度6108 个/mL
13、，精子畸形率15%。C.3 冻精外观 细管无裂痕，两端封口严密。C.4 剂型剂量 细管冻精：微型0.18 mL；中型0.4 mL。C.5 每剂量冻精解冻后 C.5.1 精子活力 35。C.5.2 前进运动精子数 800 万个。C.5.3 精子畸形率 18%。C.5.4 细菌数 800 个。DB50/T 5522014 9 附 录 D（规范性附录）输精 D.1 输精时间确定 D.1.1 触摸卵泡法 在卵泡壁薄、满而软、有弹性和波动感明显接近成熟排卵时输精一次；6 h10 h卵泡仍未破裂，再输精一次。D.1.2 外部观察法 母牛接受爬垮后6 h10 h是适宜输精时间。如采用两次输精，第二次输精时间
14、为母牛接受爬跨后12 h20 h。青年母牛的输精时间宜适当提前。D.2 直肠把握输精法 输精人员一手五指并握，呈圆锥形从肛门伸进直肠，动作要轻柔，在直肠内触摸并把握住子宫颈，使子宫颈把握在手掌之中，另一手将输精器从阴道下口斜上方约45角向里轻轻插入，双手配合，输精器头对准子宫颈口，轻轻旋转插进，过子宫颈口螺旋状皱壁1 cm2 cm到达输精部位。一头母牛应使用一支输精器或者一支消毒塑料外套管。直肠把握输精使用器械及其操作分为：a)用球式玻璃输精器的，注入精液前后退约0.5 cm，手捏橡胶头注入精液，输精管抽出前不得松开橡胶头，以免回吸精液。b)用金属输精器的，注入精液前后退约0.5 cm，把输精
15、器推杆缓缓向前推，通过细管中棉塞向前注入精液。D.3 输精部位 应到子宫角间沟分岔部的子宫体部，不宜深达子宫角部位。DB50/T 5522014 10 附 录 E（规范性附录）情期受胎率、受胎率和繁殖率的计算 E.1 情期受胎率 情期受胎率按式（1）计算。式（1）：%100=ICECR (1)式中：ECR情期受胎率，%C同期受胎母牛数，头 I同期输精情期数，头次 E.2 受胎率 受胎率按式（2）计算。式（2）：%100=ICCR （2）式中：CR受胎率，%C同期受胎母牛数，头 I同期输精母牛数，头 E.3 繁殖率 繁殖率按式（3）计算。式（3）：%100=ICRR （3）式中：RR繁殖率，%C同期产犊母牛数，头 I同期应繁殖母牛数，头 _