1、T/GZTPA贵 州 省 绿 茶 品 牌 发 展 促 进 会 团 体 标 准T/GZTPA 0010-2021贵州茶叶可溶性糖的检测气相色谱氢火焰离子化法Determination of soluble sugar in Guizhou teaGas chromatographic hydrogen flame ionization method2021-11-25 发布2021-11-26 实施贵州省绿茶品牌发展促进会贵州省绿茶品牌发展促进会发布发布全国团体标准信息平台T/GZTPA0010-2021I前言本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构
2、和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）提出。本文件由贵州省绿茶品牌发展促进会提出并归口。本文件起草单位：广东省科学院测试分析研究所（中国广州分析测试中心）、贵州省农产品质量安全监督检验测试中心、贵州省绿茶品牌发展促进会。本文件主要起草人：向章敏、李俊、肖雪、蔡滔、陈啸天、方舒婷、刘舒芹、侯雅君、杨运云、刘宁、姚智凯。全国团体标准信息平台T/GZTPA0010-20211贵州茶叶可溶性糖的检测 气相色谱氢火焰检测法1 1范围本文件规定了贵州茶叶5种可溶性糖检测成分的气相色谱分析法(
3、见附录A)。本文件适用于气相色谱氢火焰光度检测器对贵州茶叶中果糖、葡萄糖、山梨糖醇、肌糖和蔗糖的气相色谱分析。2 2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 5009.3食品安全国家标准 食品中水分的测定GB/T 6379.2测量方法与结果的准确度（正确度与精密度）第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T 2102茶叶抽样技术规范3 3术语与定义本文件没有需要界定的术语和
4、定义。4 4原理采用乙腈和水混合溶剂振荡提取，通过甲氧胺盐酸盐和N,O-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺两种衍生试剂进行衍生化处理，然后直接采用气相色谱氢火焰检测器进行检测，以苯基-D-吡喃葡萄糖苷为内标，采用内标标准曲线法进行定量分析。5 5试验方法5.15.1样品制备茶叶样品按照 NY/T 2102 进行扞样和取样，取样品约 200 g，经粉碎机粉碎，过 60 目筛，制成茶叶粉末，一式两份。茶叶中水分按 GB 5009.3 测定。5.25.2定性方法在相同的色谱操作条件下，试样溶液色谱峰的保留时间与标准溶液色谱峰的保留时间一致，其相对差值应在1.5%以内。5.35.3含量测定5.3.15.3.1
5、试剂或材料除非另有规定,仅使用分析纯试剂。a)水，GB/T 6682，一级；b)乙腈：分析纯，经气相色谱分析无干扰物；c)吡啶：分析纯，需经过重蒸后使用；全国团体标准信息平台T/GZTPA0010-20212d)N,O-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺：已知含量，99.0%；e)甲氧胺盐酸盐：已知含量，98.5%；f)苯基-D-吡喃葡萄糖苷：已知含量，99.0%；g)果糖：已知含量，99.0%；h)葡萄糖：已知含量，99.0%；i)山梨糖醇：已知含量，99.0%；j)肌糖：已知含量，99.0%；k)蔗糖：已知含量，99.0%。5.3.25.3.2仪器和设备a)气相色谱：具有氢火焰离子化检测器（FID
6、）；b)分析天平：感量 0.1 mg；c)振荡器；d)氮吹仪；e)水浴锅；f)离心机。5.3.35.3.3气相色谱条件a)色谱柱：(5%苯基)-甲基聚硅氧烷（HP-5）柱，60m250 m,0.25 m 石英毛细管柱或相当；b)进样口温度：280；c)检测器温度：280；d)色谱柱程序升温：80 保持 2 min，然后以 5/min 程序升温至 240，保持 5 min，再以10/min 的速度上升至 300，保持 15 min;e)载气：氮气，纯度99.999%，流速：20 mL/min；f)燃气：氢气，纯度99.999%，流速：40 mL/min；g)助燃气：空气，纯度99.999%，流速
7、：400 mL/min；h)进样量：1.0 L；i)分流比：20:1，3.0 min 后打开分流阀和隔垫吹扫阀。5.3.45.3.4测定步骤5.3.4.15.3.4.1标样溶液的制备标准储备溶液：分别准确称取五种水溶性标准物质（精确至0.0002 g），用1:1（V:V）的乙腈：水溶液配置一系列可溶性糖标准溶液（果糖10 mg/mL；葡萄糖20 mg/mL；山梨糖醇4 mg/mL；肌糖4 mg/mL；蔗糖40 mg/mL），避光冷藏保存04保存，有效期1年。混合标准溶液：吸取一定量的可溶性糖标准储备溶液于25mL容量瓶中，用丙酮定容至刻度，稀释成5个不同浓度（果糖51000 mg/L；葡萄糖1
8、02000 mg/L；山梨糖醇2400 mg/L；肌糖2400 mg/L；蔗糖204000 mg/L）的混合标准品。混合标准溶液避光04保存，有效期3个月。内标溶液：准确量取苯基-D-吡喃葡萄糖苷（精确至0.0002 g）用1:1（V:V）的乙腈：水溶液10 mg/mL，避光冷藏保存04保存，有效期1年。5.3.4.25.3.4.2试样溶液的制备称量0.2000 g 样品于10 mL 玻璃离心管中，加入苯基-D-吡喃葡萄糖苷内标溶液和10 mL 的1:1（V:V）的乙腈：水溶液，震荡提取30 min，4000 r/min下离心10 min，取0.5 mL上清液转移到新的1.5mL离心管中，用氮
9、气吹干。加入350 L甲氧胺盐酸盐溶液，80 水浴30 min，放置室温冷却，然后再加入150 L 的N,O-双（三甲基硅基）三氟乙酰胺，80 水浴60 min，室温静置1 h，再次离心后取上清液上机分析，每个样品平行实验3次。5.3.4.35.3.4.3可溶性糖标准曲线的制作分别吸取0.5 mL可溶性糖系列标准工作液(5.3.4.1)于一组1.5 mL离心管中，各加入苯基-D-吡喃葡萄糖苷内标溶液内标溶液混匀。按（5.3.4.1）中条件，进行衍生化处理，离心后取上清液上机分析。全国团体标准信息平台T/GZTPA0010-20213以标准物质峰面积与内标物峰面积的比值为纵坐标（Y），以标准物质
10、的量与内标量的比值为横坐标（X）进行线性回归分析，得到线性回归方程及相关参数。5.3.4.45.3.4.4测定按照色谱分析条件（5.3.3）测定样品（5.3.4.2）、标准溶液（5.3.4.3）中水溶性糖的含量。根据保留时间定性，同时，根据样品色谱图中化合物峰面积和内标峰面积计算得出样品溶液中可溶性糖的浓度（mg/L）。5.3.55.3.5结果表述5.3.5.15.3.5.1定性分析在相同的色谱操作条件下，试样溶液色谱峰的保留时间与标准溶液色谱峰的保留时间一致，其相对差值应在 1.5%以内，混合标准溶液和样品溶液色谱图参见附录 A。5.3.5.25.3.5.2定量结果计算样品中可溶性糖的含量w
11、，按照式（1）计算：)1(1013wmAvcw（1）式中：w样品中各种可溶性糖的含量，单位为微克每克（mg/g）；c样品溶液中各种可溶性糖的浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V萃取溶液的体积，单位为毫升（mL）；A稀释倍数；m样品质量，单位为克（g）；w1样品水分的质量分数。如果符合（5.3.6），取两次测量的算数平均值作为结果，结果保留3位有效数字。5.3.65.3.6允许差在重复条件下同一样品获得的测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。全国团体标准信息平台T/GZTPA0010-20214A A附录 A（资料性）茶叶中可溶性糖气相色谱图A.1 茶叶中可溶性糖气相色谱图见图 A.1
12、图 1 实际茶叶样品与可溶性糖标准品的气相色谱图（图中 A 为标准品色谱图，B 为实际样品色谱图，1,1为果糖，2,2为葡萄糖，3 为山梨糖醇，4 为肌糖，5 为蔗糖，IS 为内标苯基-D-吡喃葡萄糖苷）图 A.1 茶叶中可溶性糖气相色谱图全国团体标准信息平台T/GZTPA0010-20215附录 B（资料性）方法的回收率、精密度、线性及检测限B.1 方法的回收率、精密度、线性及检测限见表 B.1表 B.1 方法的回收率、精密度、线性及检测限见表名称加标水平（mg）平均回收率（%）相对标准偏差（RSD,n=5，%）线性范围（g/mL）线性方程相 关 系数（R2）最低检出限（LOQ,ng/mL）
13、果糖0.4099.467.7210100Y=1.7559X-0.0009190.99999.80.7583.982.041.5090.237.18葡萄糖0.7088.098.54202000Y=1.6207X-0.007180.99989.51.3099.129.492.6095.626.48山梨糖醇0.2091.935.934400Y=1.4655X-0.001790.999810.40.3087.586.240.60100.557.22肌糖0.2081.743.024400Y=1.2304X-0.0002170.999912.20.3089.614.150.6087.713.31蔗糖1.2088.244.16404000Y=0.9121X-0.008640.999510.63.5092.626.525.00100.322.94全国团体标准信息平台