1、ICS 11.220 B 41 DB37 山东省地方标准 DB37/T 40512020 中兽药散剂中添加喹乙醇、乙酰甲喹的测定 超高效液相色谱-串联质谱法 Determination addition of olaquindox and mequindox in traditional chinese veterinary drughigh performance liqud chromatography-tandem mass spectrometry 2020-07-09 发布 2020-08-09 实施 山东省市场监督管理局 发 布 DB37/T 40512020 I 目 次 前言.I
2、I 1 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 原理.1 4 试剂或材料.1 5 仪器设备.2 6 测定步骤.2 6.1 提取.2 6.2 标准曲线的制备.2 6.3 仪器参考条件.2 6.4 测定.3 7 数据处理.3 8 检测方法的精密度.4 附录 A（资料性附录）喹乙醇、乙酰甲喹特征离子质量色谱图.5 DB37/T 40512020 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由山东省畜牧兽医局提出并组织实施。本标准由山东省畜牧业专业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：山东省兽药质量检验所。本标准主要起草人：章安源、牛华星、张传津、李有志、陈玲、刘霄飞、陆庆泉、
3、陈志强、魏秀丽、张志民、杨修镇。DB37/T 40512020 1 中兽药散剂中添加喹乙醇、乙酰甲喹的测定 超高效液相色谱-串联质谱法 1 范围 本标准规定了中兽药散剂中喹乙醇、乙酰甲喹的超高液相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于中兽药散剂中喹乙醇、乙酰甲喹的测定。本方法喹乙醇、乙酰甲喹检出限均为50 mg/kg，定量限均为100 mg/kg。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3 原理 中兽药散剂中的
4、喹乙醇、乙酰甲喹用乙腈溶液提取，经超高效液相色谱仪分离后，串联质谱检测，保留时间和离子丰度比对照定性，外标法定量。4 试剂或材料 除非另有规定，所用试剂均为色谱纯。4.1 水：符合 GB/T 6682 一级水的规定。4.2 乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.4 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.5 流动相（0.1%甲酸水溶液）：量取甲酸（4.3）1 mL，溶于水，移入 1 000 mL 容量瓶中，稀释至刻度，过 0.22 m 微孔滤膜备用。4.6 初始流动相（5%乙腈溶液）：量取乙腈（4.2）10 mL 与水（4.1)190 mL，混匀后备用。4.7 60%乙腈
5、溶液：量取乙腈（4.2）60 mL 与 0.1%甲酸水溶液（4.5）40 mL，混匀后备用。4.8 标准物质：喹乙醇，纯度99.5%，乙酰甲喹，纯度99.6%。4.9 标准储备液：准确称取喹乙醇、乙酰甲喹标准物质（4.8）各 10 mg（准确至 0.000 01 g），加甲醇溶液分别转移置 10 mL 棕色容量瓶中，加甲醇（4.4）溶解并稀释至刻度，摇匀，得标准物质储备液。4.10 10 g/mL 的混合标准溶液：准确吸取喹乙醇、乙酰甲喹标准储备液（4.9）各 1.0 mL，置 100 mL棕色容量瓶中，加甲醇（4.4）溶解并稀释至刻度，摇匀。得 10 g/mL 的混合标准溶液。现配现用。4.
6、11 离心管。4.12 有机微孔滤膜：0.22 m。DB37/T 40512020 2 5 仪器设备 5.1 超高效液相色谱串联质谱仪：电喷雾离子源（ESI）。5.2 分析天平：感量 0.000 01 g，感量 0.000 1 g，感量 0.01 g。5.3 超声波清洗器。6 测定步骤 6.1 提取 准确称取待测样品0.2 g（精确到0.001 g）于250 mL三角烧瓶中，加入50 mL 60%乙腈溶液（4.7）超声提取15 min，转移置100 mL容量瓶中，加流动相（4.5）稀释至刻度。用滤纸过滤，收集续滤液。准确吸取续滤液1.0 mL，置10 mL容量瓶中，用流动相（4.5）稀释至刻度
7、，摇匀，滤膜过滤，过滤液待测。同时按上述步骤做样品空白试验。6.2 标准曲线的制备 准确吸取10 g/mL的标准溶液（4.10）5.0 mL，置100 mL容量瓶中，用空白试样溶液稀释至刻度，摇匀，得500 ng/mL的标准溶液。分别吸取500 ng/mL的标准溶液适量，用空白试样溶液倍比稀释，得5 ng/mL、10 ng/mL、25 ng/mL、50 ng/mL、100 ng/mL、125 ng/mL、250 ng/mL的标准物质系列工作液。6.3 仪器参考条件 6.3.1 高效液相色谱参考条件 色谱柱：C18，100 mm2.1 mm，粒径1.7 m，或性能相当者。流动相A：乙腈。流动相B
8、：0.1%甲酸水溶液。流速：0.4 mL/min。进样量：5 L。柱温：35。液相色谱梯度洗脱条件见表1。表1 液相色谱梯度洗脱条件 时间 min A%B%0.00 5 95 2.00 5 95 3.50 50 50 5.00 88 12 6 5 95 7 5 95 6.3.2 质谱参考条件 扫描模式：电喷雾正离子（ESI+）。DB37/T 40512020 3 离子喷雾电压：5 500 V。离子源温度：500。气帘气：20 psi。雾化气：50 psi。加热气：50 psi。检测方式：多反应监测（MRM）。喹乙醇、乙酰甲喹的定性、定量离子对和碰撞能量见表2。表2 定性离子对、定量离子对、去簇
9、电压和碰撞能量 品名 定量离子对 定性离子对 去簇电压 V 碰撞能量 eV 保留时间 min 喹乙醇 263.9143 263.9143 263.9212 97 41 1.09 乙酰甲喹 219143 219143 219185 82 30 3.35 6.4 测定 6.4.1 定性测定 通过样品溶液色谱图的保留时间、各色谱峰特征离子与相应标准溶液的保留时间、各色谱峰的特征离子相对照定性。样品溶液与标准溶液保留时间相对偏差应在2.5%之内；样品溶液特征离子相对离子丰度与标准溶液的相对离子相对偏差不超过表3的规定，则可判断样品中存在乙酰甲喹、喹乙醇。表3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对
10、离子丰度，%50 20 至 50 10 至 20 10 允许的相对偏差，%20 25 30 50 6.4.2 定量测定 取样品溶液和标准溶液各5 L注入液相色谱串联质谱仪，在上述色谱-质谱条件下进行测定，记录特征离子质量色谱图，外标法定量。标准溶液中乙酰甲喹、喹乙醇特征离子的质量色谱图参见附录A。7 数据处理 试样中喹乙醇、乙酰甲喹的含量按式（1）计算：.(1)式中：X 试样中喹乙醇、乙酰甲喹的含量，单位为微克每千克（g/kg）；Cs 喹乙醇、乙酰甲喹标液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；A 试样中喹乙醇、乙酰甲喹峰面积；As 标准品喹乙醇、乙酰甲喹峰面积；DB37/T 40512020
11、4 V1 试样提取溶液总体积（100），单位为毫升（mL）；V2 分取提取液体积（1），单位为毫升（mL）；V3 定容体积（10），单位为毫升（mL）；m 试样的取样量，单位为克（g）。每个试样取两份进行平行测定，以两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，结果保留三位有效数字。8 检测方法的精密度 在重复性条件下两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的20%。DB37/T 40512020 5 A A 附 录 A（资料性附录）喹乙醇、乙酰甲喹特征离子质量色谱图 标准溶液中喹乙醇离子定量质量色谱图见图A.1。XIC of+MRM(7 pairs):263.900/143.000 Da ID
12、:kyc4 from Sample 24(80)of kycyxj.Max.1.8e4 cps.1.02.03.04.05.06.0Time,min0.02000.04000.06000.08000.01.0e41.2e41.4e41.6e41.8e4In te n s ity,c p s1.09 图A.1 标准溶液中喹乙醇离子定量质量色谱图 标准溶液中喹乙醇离子定性质量色谱图见图A.2。XIC of+MRM(7 pairs):263.900/212.000 Da ID:kyc1 from Sample 24(80)of kycyxj.Max.1.0e4 cps.1.02.03.04.05.0
13、6.0Time,min0.001000.002000.003000.004000.005000.006000.007000.008000.009000.001.00e4In te n s ity,c p s1.10 图A.2 标准溶液中喹乙醇离子定性质量色谱图 DB37/T 40512020 6 标准溶液中乙酰甲喹离子定量质量色谱图见图A.3。XIC of+MRM(7 pairs):219.000/143.000 Da ID:yxjk3 from Sample 24(80)of kycyx.Max.1.1e5 cps.1.02.03.04.05.06.0Time,min0.001.00e42.
14、00e43.00e44.00e45.00e46.00e47.00e48.00e49.00e41.00e51.10e5In te n s ity,c p s3.35 图A.3 标准溶液中乙酰甲喹离子定量质量色谱图 标准溶液中乙酰甲喹离子定性质量色谱图见图A.4。XIC of+MRM(7 pairs):219.000/185.000 Da ID:yxjk1 from Sample 24(80)of kycyx.Max.2.9e4 cps.1.02.03.04.05.06.0Time,min0.05000.01.0e41.5e42.0e42.5e42.9e4In te n s ity,c p s3.36 图A.4 标准溶液中乙酰甲喹离子定性质量色谱图 _