1、ICS 65.020.30 B 44 DB12 天津市地方标准 DB12/T 8622019 水产微生态制剂 乳酸菌生产技术规程 Aquatic probiotics-Technical regulation for production of lactic acid bacteria 2019-01-14 发布 2019-02-15 实施 天津市市场监督管理委员会 发 布 DB12/T 8622019 I 前 言 本标准依据GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写的要求起草。本标准由天津市农业科学院提出并归口。本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心。本标准主要起
2、草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。DB12/T 8622019 1 水产微生态制剂 乳酸菌生产技术规程 1 范围 本标准规定了乳酸菌生产中所涉及的术语和定义、生产环境和设备要求、生产技术流程、质量检测和储运。本标准适用于水产微生态制剂乳酸菌的生产。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 3095 环境空气质量标准 GB 3838 地表水环境质量标准 GB 20287 农用微生物菌剂 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。3
3、.1 乳酸菌 lactic acid bacteria 能利用碳水化合物产生乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，在水产养殖中可作为饲料添加剂和水质净化剂。注：本标准中涉及的乳酸菌主要包括植物乳杆菌(lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌(lactobacillus acidophilus)、戊糖乳杆菌(lactobacillus pentosus)、德氏乳杆菌(lactobacillus leichmannii)和粪肠球菌(enterococcus faecalis)。3.2 原菌种 the original strain 由单菌落分离纯化，并在试管上穿刺繁殖保存
4、的菌种。3.3 一级菌种 first class strain 原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至玻璃瓶中，并厌氧培养的菌种。3.4 二级菌种 second class strain 玻璃瓶中的菌种接种至种子罐中，在种子罐中厌氧放大培养的菌种。4 生产环境和设备要求 4.1 生产环境 DB12/T 8622019 2 4.1.1 厂区空气质量应符合大气环境质量标准 GB 3095 中类要求。4.1.2 发酵用水应符合地表水环境质量标准 GB 3838 中类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准中类水质要求。4.1.3 生产车间配备消毒灭菌设施，菌种储藏室和无菌操作间与生产车间分开。4.2 生
5、产设备 生产设备需为不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。5 生产技术流程 5.1 生产流程 见附录A。5.2 菌种质量 5.2.1 用于发酵的菌种应有菌种鉴定报告或菌株来源相关信息。5.2.2 发酵前应先检测菌种的纯度和性能，如不纯或退化，应先进行提纯复壮。5.2.3 菌种在上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿级以上，发酵菌液 pH4.0。5.3 培养基 5.3.1 原菌种和一级菌种的培养基应保证菌种生长的延滞期短，生长旺盛，碳、氮源营养丰富。5.3.2 二级菌种培养基原则上为发酵培养基或接近发酵培养基。5.3.3 发酵培养基在保证菌体生长旺盛的前提下，
6、尽量利用来源充足、价格低廉的原料。5.4 灭菌 5.4.1 液体发酵，发酵罐的装液量 60%70%，液体培养基、发酵设备、管道、补料罐等采用高压蒸汽灭菌，灭菌条件为 115 121，0.1 MPa0.15 MPa，灭菌 20 min30 min。5.4.2 固体物料含水率为 50%5%，灭菌条件为 115 121，0.1 MPa0.15 MPa，灭菌 1.0 h1.5 h。5.4.3 灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，染色，镜检，无微生物说明灭菌彻底，若有，需重复 5.3 的工作。5.5 接种 一级种子到二级种子接种量为3%5%，二级种子到发酵罐接种量为5%7%。接种时需要无菌操作，调节进
7、、排气阀（通入的气体为氮气或其它惰性气体），使接种口有气体排出。5.6 发酵 5.6.1 乳酸菌的发酵温度控制在 25 35。5.6.2 发酵过程中不通气，或通入氮气，搅拌转数 50 r/min100 r/min。5.6.3 当有效活菌数达到每毫升十亿级，并 pH 降低到 4.0 以下，结束发酵。5.6.4 发酵周期为 24 h48 h。5.7 发酵后处理 DB12/T 8622019 3 发酵后的液体菌剂、固体菌剂密封包装，包装容器经过灭菌处理。6 质量检测 6.1 检测指标 每个批次的产品抽样检测包括感官、水分、pH、有效活菌数和杂菌率等指标，检验合格方可出厂。6.2 感官检测 6.2.1
8、 取菌液 250 mL（或固体菌剂 250 g）于无色玻璃杯中，采用目测、鼻嗅的方法进行检验。6.2.2 菌液为浅棕至深棕色的悬浊液，有特殊的酸香味。固体菌剂因培养基原料不同呈现不同颜色，有特殊的酸香味。6.3 pH 测定 按GB 20287执行。6.4 有效活菌数检测 乳酸菌有效活菌数的测定按GB 20287规定检测。6.5 杂菌率的测定（好氧或兼性厌氧杂菌）从用来测定有效活菌数且已经过10倍系列稀释的样品中，选取3个稀释度（10-5、10-6、10-7）进行杂菌率测定。平板计数法，按GB 20287操作。6.6 固体菌剂水分含量测定 按GB 20287执行。7 储运 7.1 应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及腐蚀性化学物品，远离热源。7.2 长途运输时，防止日晒、雨淋，避免长期受压和机械损伤，产品不应和易燃、易爆、易腐蚀的物品同车（或其他运输工具）装运。DB12/T 8622019 4 A A 附 录 A（规范性附录）乳酸菌生产技术流程图 图A.1 乳酸菌生产技术流程图 _ 原菌种 一级菌种 二级菌种 配置培养基 接种 发酵 合格 灭菌 质量检测 合格 不合格 按规定处理 出厂 发酵物检测 不合格 按规定处理 发酵后处理 纯度和性能检查