1、ICS 67.100X1 6河北省地D B 1 3方标准DB 13/T 1106-2009液 体 乳 中 青 霉 噻 唑 酸 钾 的 测 定 高效液相色谱法Determ ination of Penicilloic acid-potassium in m ilk HPLC m ethod2009-05-27发布2009-06-11实施河北省质量技术监督局发布食品伙伴网http:/DB13/T 1106-2009月 l i 吕 本 标 准 中 的 附 录 A 为 资 料 性 附 录。本 标 准 由 河 北 省 质 量 技 术 监 督 局 提 出 并 归 口。本 标 准 起 草 单 位：河 北 省
2、 食 品 安 全 重 点 实 验 室、河 北 师 范 大 学 生 命 科 学 学 院、河 北 医 科 大 学 基 础 医学 院、河 北 省 食 品 质 量 监 督 检 验 研 究 院。本 标 准 主 要 起 草 人：张 岩、李 挥、刘 辰 魁、李 丛 芬、张 敬 轩、王 丽 霞、吕 品、范 斌、康 素 芬、庞 坤。食品伙伴网http:/DB 13/T 1106-2008液 体 乳 中 青 霉 噻 唑 酸 钾 的 测 定 高效液相色谱法范围本 标 准 规 定 了 液 体 乳 中 青 霉 噻 唑 酸 钾 的 高 效 液 相 色 谱 测 定 方 法。本 标 准 适 用 于 液 体 乳 中 青 霉 噻
3、 唑 酸 钾 的 测 定。本 标 准 的 方 法 检 出 限：10.0 g/kg.规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为 本 标 准 的 条 款。凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件，其 随 后 所 有 的修 改 单（不 包 括 勘 误 的 内 容）或 修 订 版 均 不 适 用 于 本 标 准，然 而，鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究是 否 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件，其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准。GB/T 6682分析实验
4、室用水规格和试验方法原理 试 样 中 的 青 霉 噻 唑 酸 钾 在 去 除 蛋 白、脂 肪 处 理 后，经 高 效 液 相 色 谱 分 离，紫 外 检 测 器 检 测，外 标 法定 性 定 量。4试剂和材料 除 另 有 说 明 外，所 用 试 剂 均 为 分 析 纯，水 为 G B/T 6 6 8 2 规 定 的 一 级 水。4.1甲 醇：色 谱 纯。4.2磷酸二氢钠。4.3磷 酸 二 氢 钠 溶 液（pH 二 4.5):4.4无 水 乙 醇。4.5青霉素V钾标准品：纯度）99%04.6青 霉 噻 唑 酸 钾 标 准 储 备 液（(1 m g/m L)：准 确 称 取 0.100 0 g青
5、霉 素 V 钾 置 于 100 m L 容 量 瓶 中，加 入 1 m L青 霉 素 酶，室 温 放 置 2h后 用 水 定 容，摇 匀 备 用。4.7 青 霉 素 噻 唑 酸 钾 标 准 工 作 溶 液：根 据 需 要 吸 取 适 量 青 霉 噻 唑 酸 钾 标 准 储 备 液，用 空 白 样 品 稀 释 成适 当 浓 度 的 基 质 混 合 标 准 工 作 溶 液。5仪器5.1高 效 液 相 色 谱 仪：配 有 紫 外 检 测 器（UV)05.2分 析 天 平：感 量 0.1 m g和 0.01g各 一 台。5.3低温 高 速 离 心 机。5.4水 相 微 孔 滤 膜：0.45m 06测定
6、步骤6.1试样溶液的制备 准 确 称 取 25 g（精 确 到 0.01g）牛 乳 于 50 mL离 心 管 中，400 0 r/min低 温(4 C）离 心 10 min；去除 上 层 脂 肪 层；再 加 入 2 5 m L 无 水 乙 醇,20 000 r力 m in低 温(4 C)离 心 10 m in，取 上 清 液 定 容 至 50 m L,经 0.45 m 微 孔 滤 膜 过 滤，待 高 效 液 相 色 谱 分 析。6.2液相色谱条件食品伙伴网http:/ DB 13/T 1106-2008 检测波长：230 nm 0 色 谱 柱：O D S C 18 5 m,250 m m X
7、2.1 m m 或 相 当 者。流动 相：磷 酸 二 氢钠 溶 液：甲 醇 二 50:500 流速：1 m L/m in0 柱 温：30 C 0 进样量：20匹。6.3测定 用 青 霉 噻 唑 酸 钾 标 准 储 备 溶 液 配 成 的 基 质 标 准 溶 液 分 别 进 样，以 标 准 工 作 溶 液 浓 度 为 横 坐 标，以 峰面 积 为 纵 坐 标，绘 制 标 准 工 作 曲 线。用 标 准 工 作 曲 线 对 样 品 进 行 定 量，样 品 溶 液 中 青 霉 噻 唑 酸 钾 的 响 应值 均 应 在 仪 器 测 定 的 线 性 范 围 内。结 果 计 算从 标 准 工 作 曲 线
8、上 得 到 试 样 中 相 应 的 青 霉 噻 唑 酸 钾 浓 度 后，结 果 按 公 式（1)计 算：X c x V x 1000=-(1)mxFx1000式 中：h 一 一 试 样 中 被 测 组 分 残 留 量，单 位 为 微 克 每 千 克（拼 g/kg)c 从 标 准 工 作 曲 线 得 到 的 试 样 溶 液 中 被 测 组 分 的 浓 度，单 位 为 纳 克 每 毫 升（ng/m L)不 一 试 样 溶 液 定 容 体 积，单 位 为 毫 升（m L)0m试样质量，单位为克（g)0尸 一 稀 释 倍 数。精 密 度在 重 复 性 条 件 下 获 得 的 两 次 独 立 测 定 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 算 术 平 均 值 的 10%0食品伙伴网http:/DB 13/T 1106-2008 附录A （资 料 性 附 录）青 霉 噻 唑 酸 钾 标 准 物 质 色 谱 图MI A,A 14233rm;。一 标“确，八、；、图 A.1青 霉 噻 唑 酸 钾 标 准 物 质 色 谱 图食品伙伴网http:/食品伙伴网http:/