1、:S i地D B 1 3方标准卜.月月河省D B 1 3/T 4 9 8-2 0 0 4商品肉鸡大肠杆菌病防治技术规程2 0 0 4-0 3-1 0 发布2 0 0 4-0 3-1 0 实施河 d 匕 省 质 量 技 术 监 督 局发布D B1 3/4 9 9-2 0 0 4前言本标准附录A,附录B 为规范性附录。本标准由河北省畜牧局提出。本标准起草单位:河北省畜牧兽医 研究所.本标准主要起草人:张继东、李椒芳、杨国 恩、王玉清、杨淑亚、薛宗丽.DH 1 3/4 9 9-2 0 0 4商品肉鸡大肠杆菌病防治技术规程1 范围 本标准规定了商品肉鸡大肠杆菌病的 诊断和防治.本标准适用于肉 鸡饲养场
2、和动物诊疗单位对肉 鸡大肠杆菌病的防治。2 规范性引用文件 下列文件通过本规范的引用而成为本规范的条款。凡是注日 期的引用文件.其随后所有的修改单 (不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据木标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版木.凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准.N Y 5 0 3 5 无公害食品 肉 鸡饲养兽药使用准则 N Y 5 0 3 fi 无公害食品 肉鸡饲养兽医防疫准则 N Y/T 5 0 3 8 无公害食品 肉鸡饲养管理准则 中 华人民 共和国动物防疫法(第八届全国人大常委会1 9 9 7 年7 月3日 颁布)中华人民共和国兽药典(2
3、0 0 0 版)3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准.商品肉鸡大肠杆菌病 山 致病性大肠杆菌引起的商品肉 鸡的原发性或继发性的细菌性传染病.该疾病主要危害肉雏鸡.其特征表现为败血型、脐炎型、肠炎型、气囊炎型、关节炎型、眼炎型、肉 芽肿型和脑炎型等多种病型.是目 前危害商品肉 鸡业的一种重要的细菌性疾病之一4 诊断4.1 诊断原则 通过流行病学调查、临床表现、病理变化等作出的临床诊断可作为处理疫情的依据.经病原分离鉴定。排除其他病原感染.则可诊断为原发性大肠杆菌病。继发性大肠杆菌病的诊断，必须在其他原发性疾病荃础上分离出大肠杆菌.4.2 流行特点4.2.1 发病日 龄 各年龄商.钻 肉 鸡
4、均易感.2 0 4 5日 龄的 商品肉鸡发病流行最普遍。脐炎型发病较早.出生后即可能发生。其他病型4-1 0日 龄即可能发生，通常3 0 日 龄前后的肉仔鸡发病较多.4.2.2 发病率和病死率 发病率和病死率与大肠杆菌血清型及菌株的毒力、有无继发和并发感染、饲养管理水平、环境卫生条件、防治措施是否及时有效而差异较大。一般发病率为1 1%-6 9 9 6,病死率3.8 96 7 2.9%,4.2.3 发病季节 大肠杆菌病一年四季均可发生.但以 冬末春初较为多见.4.2.4 传染途径4.2.4.1 消化道 饲料及饮水被大肠杆菌污染，肉仔鸡采食或饮用后通过消化道而感染.DH1 3/4 9 9-2 0
5、 0 44.2.4.2 呼吸遁 带有大肠杆一的尘埃被吸入，进入呼吸道后侵入血液引起感染。4.2.4.3 蛋壳穿透 蛋壳表面污染的 大肠杆菌很容易穿透蛋壳进入蛋内。这种种蛋常于孵化后期引 起死胚，或刚孵出的小鸡即 可发病。4.2.4.4 垂直传播 患有大肠杆菌性输卵管炎的 母鸡，在蛋的形成过程中大肠杆菌即 可进入蛋内，造成垂直传播。4.a 临床症状 致病性大肠杆菌所致疾病的临床表现与鸡只的发病日 龄、病程长短、受侵害组织器官与部位、有无继发或并发感染有很大关系.根据商品肉鸡发病的临床表现主要分为以下类型:a)败血型:表现为离群呆立或挤堆，羽毛松乱。食欲减退或废绝。排黄白 色稀粪.打喷嚏，呼 吸困
6、 难，咳嗽.头部皮.卜 水肿等症状，多在发病2 d-4 d 内死亡。部分病鸡不表现任何临床 症状或症状不明显而突然死亡。b)脐炎型:主要发生于孵化后期的 胚胎及出壳后的 雏鸡。病死率为3 9 6-1 0%，有时高达4 0 9 6,主要表现为卵黄吸收 及脐带收缩不良，脐带发炎、湿润、发红、肿胀，脐孔闭 合不良 或不闭 合.周围 皮肤星紫褐色，采食最减少或不食，精神沉郁，下痢.患有该型大肠杆菌病的肉 鸡 多在出壳后2 d -3 d 内 死亡。不死的病鸡生长 也较缓慢。c)肠炎型:主要表现腹泻，粪便呈黄绿色水样，消瘦，脱水，最后衰竭死亡。d)气囊炎型:多由败血型转变而来，发生气囊炎与肺炎，3 周龄以
7、上肉 仔鸡多发.表现为 精神 沉郁，呼吸困难，咳嗽，有湿性罗音，食欲减退或废绝，伴有腹泻、腹腔积液.后腹部软而 大。e)眼炎型:表现为眼睑肿胀，流泪.结 膜潮红，角膜浑浊，有脓性分泌物，瞳孔缩小，眼球萎 缩、凹陷.失明(多数为单侧失明).f)关节炎型:多由 败血型或肠炎型等转变而来.表现为关节肿大，跋行.e)脑炎型:发病鸡以嗜睡为主要特征。h)肉芽肿型:病鸡排黄自 色稀便，生民 发育受阻.4.4 病理剖检变化4.4.1 败血型 纤维素性心包炎，心包肥厚、浑蚀，呈乳白 色，甚至有多量纤维素性渗出 物.或与心肌粘连.常伴发肝脏肿大，肝周围纤维素性渗出。甚至整个肝脏被一层纤维素性薄膜所包裹.腹腔内
8、有数量不等的腹水，棍有纤维素性渗出 物。或纤维素性渗出 物充斥于腹腔器官，造成腹腔各器官的纤维素性粘连。有时伴发气囊炎，气囊增厚、浑浊。4.4.2 脐炎型 卵黄吸收不良.卵黄膜菲薄.卵黄液化.呈黄褐色或黄绿色水样。混有干酪样颗粒物，恶矣。常伴有腹膜炎和心包炎.脐部肿大。皮下水肿，脐孔闭 合不全。4.4.3 肠炎型 小肠钻膜充血、出 血、溃疡，肠内 有大量液体，直肠内 有多量绿色稀粪.腺胃默膜充血或出血。胆襄肿大。充满胆汁。4.4.4 气班炎型 胸腹部气囊高度浑浊.增厚.有时早黄褐色.囊腔内 有数量不等的干酪样物。胸腹腔均有大量混浊渗出 物。肺部发炎、充血、出 血、坏死，气管内 有大量戮液，气管
9、戮膜充血、增厚、鼻腔有大量戮液。4.4.5 关节炎型 DH 1 3/4 9 9-2 0 0 4 病变关节(以 跄关节多见)肿胀，滑液增多、棍浊，关节班内有干酪样物，有时出 现关节粘连.4.4.6 肉芽肿型 在肝、盲肠、十二指肠和肠系膜形成肉 芽肿.4.5 病原学诊断4.5.1 病料的采集 当鸡群发病后，最好将典型病例活体或整个尸体送检。尸体送检应在病鸡死亡后，立即送检。送检病料应取自 未经抗菌药物治疗的病鸡。急性死亡病例，其肝、脾、心血、卵黄囊和脑等均可作为特检病料.4.5.2 病原检验程序 病原检验程序应按图1 所示进行。待检病料直接涂片鉴别培养增菌培养革兰氏 染色，葬 球.之 康 豁伊 红
10、 跳 挂 平 板镜检可疑菌落纯 培 养鉴定动 物 试 验血清学试验，落.征、汾片革兰氏处色位挂。生化试脸 图7 大肠杆菌分离培养与鉴定程序框图4.5.3 病原分离培养 无菌操作，在待检病料表面切一小口，用灭菌铂金耳从中雨取组织或血液，接种到鉴别琼脂平板培养基上或增菌肉 汤中.3 7 C 培养2 4 h 0 用抗菌药物治疗过的病鸡，在初步分离细菌时.应先进行增菌培养，然后进行鉴别培养。送检尸体剖开后应先进行接种培养，然后观察各内脏器官的病理变化.4.5.4 病原体形态学观察4.5.4.1 菌落特征 大肠杆菌在营养琼脂平板培养基上形成的菌落边缘整齐、表面光滑、湿润、低而微隆凸、中等大小、无色半透明
11、、露珠样菌落;在麦康凯琼脂培养基上菌落呈粉红色:在伊红 一美兰琼脂平板上菌落呈紫红色、隆起、表面湿润、带有蓝绿色的 金属光泽。4.5.4.2 细菌形态 将病料及培养物涂片或抹片.经革兰氏染色后镜检.革兰氏 染色时，大肠杆菌为革兰氏阴性、无芽胞的短小杆菌.多单在或成双而不形成长链，多数有鞭毛，能运动.4.5.5 生化试验鉴定 在进行肠杆菌科的属、种鉴定时，生化特性是重耍的指标，但生化试验不能鉴别菌株有无致病性.DB 1 3/4 9 9-2 0 0 4主要的鉴定试验为糖发酵试验。维一拉止氏 试验及柠檬酸盐利用试验阴性，靛墓质及甲 基红试验阳性.生化试验方法按附录人的规定进行。4.5.8 致病性试验
12、4.5.8.1 显角 膜结膜试验 用铂金耳钩取菌落涂入豚鼠眼结膜内.如有产肠毒素型大肠杆菌存在，则引起角膜结膜炎.4.5.8.2 小鼠接种试验 取分离物2 9 h 肉 汤培养物腹腔接种1 8 2 2 g 小鼠。每只小鼠 接种0.2 m 1，接种后7 2 h 死亡，即 证明该分离 物具有致病力。4.5.B.3 易感雏鸡接种试验 取分离物2 4 h 肉汤培养物0.3 m 1-0.5 m 1 腹腔接种2 周龄内易感雏鸡，多在1 d-7 d 内死亡.表现与自然病例相同的症状和病理变化。4.5.7 血清学检测 用已 知大肠杆菌的单因子血清，对经细菌学确定为致病性大肠杆菌的分离菌株进行鉴定.在禽病中常见致
13、病性大肠杆菌的血消型有儿十种。占优势的血清型有O i,O s,O n,O is,O a s,w s,O m。不同地区致病性大肠杆菌的血清型差别较大。5 防治5.1 养殖环婉卫生5.1.1 每批鸡出栏后应对鸡舍、用具进行清洗、消毒，消毒剂的选择应符合 中华人民 共和国兽药典，的规定.清理完毕到一 次进鸡前空舍至少2 周.6.1.2 应实行全进全出 制饲养，同一养殖场不能饲养其他禽类.1.口 应及时清除潮湿的垫料和粪便，在固定地点高温堆肥处理.5.1.4 应保持育雏舍温度稳定，不能忽高忽低，饲养密度要合理，舍内 通风应良 好。5.2 饲养方式 可采用地面散养或网上平养方式。地面散养时垫料要干燥、无
14、霉变且不应有病原菌群落。有条件的商品肉 鸡养殖场应封闭 饲养。从肉 仔鸡育雏到出栏整个饲养过程中将养殖人员同时封闭在肉鸡养殖允许的空间内。使整个养殖空间与外界环境相对隔离.5.3 饮水曹理 应采用自由 饮水的 方式，确保饮水器不翻水，防止垫料和饲料霉变.饮水器要每日 清洗、消毒，消毒剂应符合 中华人民共和国兽药典的规定.5.4 眼料管理 自由 采食或定期饲喂。不应饲喂发霖变质的饲料。上市前 7 V，饲料中应不含任何药物或药物饲料添加剂.侮次添料量应根据需要确定，保持饲料新鲜，及时清除敞落的饲料.5.5 防疫 应有效地控制商品肉 鸡多发、常见的病毒性疾病.减少慢性呼吸道病的发生.最大限 度地减少
15、大肠杆菌病的发生机会。免疫接种应符合 中华人民共和国动物防疫法的 要求，选择适宜的疫苗、免疫程序和免疫方法.5.8 药物防治5.6.1 饮水或拌料方式添加兽药应符合N Y 5 0 3 5的要求。5.8.2 抗菌药物的使用应科学规范。对选用药物的剂量和应用时间及休药期应严格掌握.5.8.3 进行药物的敏感性铡定，以 选择高敏药物应用，确保治疗效果。大肠杆菌对抗菌药物的敏感性测定方法按附 录B 的规定 进行.5.8.4 可使用国家兽药管理部门批准的针对本病的 微生态制剂.5.8.5 可使用国家兽药管理部门批准的针对本病的中草药制剂。:建立井保存治疗记录.包括发病时间 及症状，治疗用药的商品名称和有
16、效成分，生产厂家及生产日期，治疗时间、剂址、疗程、疗效及停药时间。记录应在清群后继续保存2 年。DH 1 3/4 9 9-2 0 0 4 附录 (规范性附录)大肠杆，生化试验方法A.1 糖发酵试验A.1.1 试验原理 大肠杆菌能分解多种搪、醇，使其产酸或产酸产气，并在与肠杆菌科的 其他属、种及其他细菌的鉴别上具有一定的意义，是进行大肠杆菌鉴定的常用试验。A.1.2 培养基 蛋自 陈l O g，牛肉浸膏3 g,抓化钠5 g,1.6%澳甲 酚紫酒精溶液0.l m l 作指示剂，蒸馏水1 0 0 0 m 1,调至 p H 7.4-7.6.分装于事先装有小倒管的小试管内，于1 2 1 高 压灭菌1 5 m i n,供发酵试验常用的糖有葡萄塘、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖等.各种糖的加量一般为0.5 9 6 -1%，但以1%为好.除萄萄糖、甘露醇在培养基高压灭菌前加入外，乳糖、蔗糖和麦芽搪则需先配制成 1 0%2 0%水溶液，过滤除菌或 1 1 5 加热 1 5 m i n灭菌后，以无菌操作加入培养基中。A.1.3 试验方法 以 无菌操作.用接种环取少量供试大肠杆菌纯培养物接种于糖发酵培养基中，3