1、北省地方标准 D B 1 3 厂3 8 5 一1 9 9 84户.口0-门曰，食品中总黄酮(芦丁)的测定1 9 9 8 一 1 2 一 1 4 发布1 9 9 8 一1 2 一1 4实施河 北 省 技 术 监 督 局 1 1 1iD B 1 3/T 3 8 5-1 9 9 8前言 本标准参照中 华人民 共和国药典中 芦丁的 测定原理 结合食品的特点而制定。本标准由 衡水市技术监督局提出。本标准起草单位:衡水市卫生防疫站、河北大学生物技术研究中心。本标准主要起草人:张 永顺、裴世弟、张瑞英、陈彦青、田 志梅、葛俊国、陈 桂茹、张娟、惠艳静。河北省地方标准食品中总黄酮(芦丁)的测定D B 1 3/
2、T 3 8 5-1 9 9 81 范围 本标准规定了 铝盐鳌合显色 法测定食品中总黄酮(芦丁)的方法。本标准适用于食品中总黄酮(芦丁)的测定，最低检出 量为0.l in g o2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为 本标准的条文。本标准出 版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。G B/T 6 6 8 2-1 9 9 2 分析 实验室 用 水 规 格和 试验方 法3 方法提要 在申性或弱碱性 及亚硝酸钠存在的条件下，黄酮类化合物与铝盐生成鳌合物，加氢氧化钠溶液后显红色，用 分光光度计测定吸光度，与芸香贰(芦丁)标准
3、系列比 较定量。4 试剂 本试验方法中，所用试剂除特殊注明 外，均为分析纯，所用水均应符合 G B/T 6 6 8 2-1 9 9 2 中 三级水的 规格。4.1 乙醇溶液:体积分数为 6 0%o4.2 氢氧化钠溶液:4 g/L，称取4.O g 氢氧化钠，用水溶解后定容至1 L o4.3 亚硝酸钠溶液:5 0 g/L，称取 5.O g 亚硝酸钠，用水溶解后定容至l 0 0 m l o4.4 硝酸铝溶液:1 0 0 g/L，称取1 0.鲍硝酸铝，用水溶解后定容至l 0 0 m l o4.5 氢氧化钠溶液:2 0 0 g/L，称取 2 0.O g 氢氧化钠，用水溶解后定容至l 0 0 m l o4
4、.6 芦丁标准品:已 知质量分数 大于:19 9.0%05 仪器与设备5.1 分光光度计6.2 具塞比色管:2 5 m l6 分析步骤6.1 标准溶液的制备 称取 0.2 0 0 g(精确至。.0 0 0 2 g)经1 2 0 减压干燥至恒重的芦丁标准品，置于l o o m l 容量瓶中，用乙 醇溶液(4.1)溶 解并定容至刻度，摇匀。此为贮备液。吸取1 0.O O m l 芦丁标准贮备溶液于1 0 0 m 1 容量瓶中，用水定容至刻度。临用现配。6.2 样品溶液的制备6.2.1 液体样品:称取(1 0.0 0 -2 0.0 0)g(精确至0.0 2 g)混合均匀的 样品到l o o m l
5、烧 杯中，河北省技术监督局1 9 9 8-1 2-1 4 批准1 9 9 8-1 2-1 4 实施 D B 1 3/T 3 8 5-1 9 9 8以氢氧化钠溶液(4.2)调至申性，再多加2 滴，移人l 0 0 m l 容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，备用。6.2.2 固体样品:称取均匀的样品(1.0 0 -2.0 0)g(精确至0.0 2 g)置于l 0 0 m l 具塞三角瓶中，加乙 醇溶液(4.1)5 0 m l,沸水浴2 0 m i n 后，滤入l 0 0 m l 容量瓶中。再于 三角瓶中加乙 醇溶液(4.1)4 0 m l，沸水浴2 0 m i n 后，滤入l 0 0 m l 容量瓶中
6、，然后用热乙 醇溶液(4.1)约 l o m l洗涤，滤掖并人容量瓶中，冷至室温，加乙 醇溶液(4.1)至刻度，摇匀，备用。6.3 标准曲线的绘制 吸取。.0 0,1.0 0,2.0 0,3.0 0,4.0 0,5.O O m l芦丁标准溶液，相当于0.0 0,0.2 0,0.4 0,0.6 0,0.8 0,1.O O m g 无水芦丁，分别置和5 m l 具塞比 色管中，补水至约l o m l，加1.0m l 亚硝酸钠溶液(4.3)，混匀，放置6 m i n，加1.O m l 硝酸铝溶液(4.4)，混匀，放置6 m i n,加 4.O m l 氢氧化钠溶液(4.5)，再加水至刻度，摇匀，放置
7、1 5 m i n。用l c m 比色皿，以 试剂空白调节零点，在波长5 1 0 n m 处测定吸光度。以 吸光度为纵坐标，芦丁的质 量为横坐标，绘制标准曲 线或计算回归方程。6.4 测定 吸取2.O O m l 样品溶液(6.2)两等份，分别置和 5 m l 具塞比色管中，补水至约1 0 m l，以下步骤按(6.3)操作，其中一份不加硝酸铝溶液，做样品空白。显色后用滤纸过滤，弃去初滤液，收集滤液备测。以 试剂空白溶液调整 零点，在波长5 1 0 n。处测样品 和样品空白的吸光度。测得样品吸光度减去样品空白吸光度，从标准曲线上查出或用回归 方程计算出样品 溶液中 总黄酮的质量(m l)o7 结果的表示与计算 样品中 总黄酮(以 芦丁计)的含量X(%)，按式(1)计算 m,X 1 0 0 X=一 一-一 一-一 X 1 0 0 一-一 一 一-一 一-一 一-一-一 一(1)mX2 X 1 0 0 0式中:m、一一 样品溶液中 总黄酮的质量，m g;m 一一样品的质量，g o 计算结果应表示至二位小数。8 允许差 两次平行测定之相对偏差不得大于5%0