1、ICS 65.120B 46 备案号：59144-2018 DB22 吉林省地方标准 DB22/T 27802017青贮饲料发酵品质分级技术规程 Grading technical regulation for silage fermentation quali 2017-12-11 发布2018-04-01 实施吉林省质量技术监督局发 布DB22/T 27802017I 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由吉林省畜牧业管理局提出并归口。本标准起草单位：吉林大学。本标准主要起草人：王鹏、唐鸿宇、丁雪梅、张嘉保、陈承祯、房恒通、赵云、史旭东、沈景林。DB22/T
2、 278020171 青贮饲料发酵品质分级技术规程 1 范围 本标准规定了青贮饲料发酵品质评定的术语和定义、取样、样本处理、检测方法、发酵品质分级和发酵品质分级判定。本标准适用于以牧草、饲料作物以及农作物副产品等为原料调制的青贮饲料发酵品质分级。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6432-1994 饲料中粗蛋白测定方法 GB/T 6435-2014 饲料中水分的测定 NY/T 2129-2012 饲草产品抽样技术规程 3 术语和定义 下列术语
3、和定义适用于本文件。3.1 青贮饲料 silage 以新鲜或半干的牧草、饲料作物及农作物副产品等为原料，在厌氧条件下利用发酵原料表面附着的乳酸菌发酵，或者在外源添加剂的作用下促进或抑制微生物发酵，调制出的具有特殊芳香气味的饲料。3.2 挥发性脂肪酸 volatile fatty acid 青贮饲料中由微生物发酵产生的乙酸、丙酸、丁酸及其它六碳以下的短链脂肪酸。3.3 氨态氮 ammonia nitrogen 青贮原料的蛋白质在发酵过程中分解产生的具有挥发性质的以氨形式存在的小分子含氮物质。3.4 总氮 total nitrogen 青贮饲料的总含氮量。4 取样 取样方法按照 NY/T 2129
4、-2012 规定执行。5 样本处理 DB22/T 278020172 5.1 青贮浸提液制备 取新鲜青贮饲料样品 20 g，加入 180 mL 蒸馏水，打碎匀浆。浆液经 4 层纱布过滤后，再经滤纸过滤，滤出液置于 4 冷藏 24 h 后即为青贮浸提液。5.2 风干样本制备 取新鲜青贮饲料样品 100 g，60 条件下连续烘干 72 h，回潮 24 h。6 检测方法 6.1 含水量 含水量按照 GB/T 6435-2014 规定执行。6.2 总氮量 总氮量按照 GB/T 6432-1994 规定执行。6.3 氨态氮含量 氨态氮含量的测定方法按照附录 A。6.4 挥发性脂肪酸含量 挥发性脂肪酸含量
5、的测定方法按照附录 B。7 发酵品质分级 发酵品质综合分值按公式（1）计算。CBAX.(1)式中：X发酵品质综合分值；A、B、C按表1取值。表1 青贮饲料发酵品质评定指标和分级 挥发性脂肪酸含量（鲜重%）氨态氮占总氮比例（%）乙酸+丙酸含量丁酸及六碳以下脂肪酸含量（%）分数（A）（%）分数（A）（%）分数（B）（%）分数（C）（%）分数（C）0.05.0 50 14.014.2 24 0.000.2010 0.0000.012 40 0.3250.337 14 5.15.5 49 14.314.4 23 0.210.399 0.0130.024 39 0.3380.349 13 5.66.0
6、48 14.514.7 22 0.400.528 0.0250.037 38 0.3500.362 12 6.16.5 47 14.814.9 21 0.530.657 0.0380.049 37 0.3630.374 11 6.67.0 46 15.015.2 20 0.660.786 0.0500.062 36 0.3750.387 10 7.17.5 45 15.315.4 19 0.790.915 0.0630.074 35 0.3880.399 9 7.68.0 44 15.515.7 18 0.921.044 0.0750.087 34 0.4000.412 8 DB22/T 27
7、8020173 表 1（续）挥发性脂肪酸含量（鲜重%）氨态氮占总氮比例（%）乙酸+丙酸含量丁酸及六碳以下脂肪酸含量（%）分数（A）（%）分数（A）（%）分数（B）（%）分数（C）（%）分数（C）8.18.5 43 15.815.9 17 1.051.173 0.0880.099 33 0.4130.4247 8.69.0 42 16.016.2 16 1.181.302 0.1000.112 32 0.4250.4376 9.19.5 41 16.316.4 15 1.311.491 0.1130.124 31 0.4380.4495 9.610.0 40 16.316.7 14 1.500
8、0.1250.137 30 0.4500.4624 10.110.4 39 16.816.9 13 0.1380.149 29 0.4630.4743 10.510.7 38 17.017.2 12 0.1500.162 28 0.4750.4872 10.810.9 37 17.317.4 11 0.1630.174 27 0.4880.4991 11.011.2 36 17.517.7 10 0.1750.187 26 0.5000 11.311.4 35 17.817.9 9 0.1880.199 25 11.511.7 34 18.018.2 8 0.2000.212 24 11.81
9、1.9 33 18.318.4 7 0.2130.224 23 12.012.2 32 18.518.7 6 0.2250.237 22 12.312.4 31 18.818.9 5 0.2380.249 21 12.512.7 30 19.019.2 4 0.2500.262 20 12.812.9 29 19.319.4 3 0.2630.274 19 13.013.2 28 19.519.7 2 0.2750.287 18 13.313.4 27 19.819.9 1 0.2880.299 17 13.513.7 26 20.0 0 0.3000.312 16 13.813.9 25 0
10、.3130.324 15 8 发酵品质分级判定 青贮饲料发酵品质按表2分级。表2 青贮饲料发酵品质分级标准 发酵品质 分值 优质 80分X100分 中等 60分X80分 劣质 0分X60分 DB22/T 278020174 A A 附 录 A（规范性附录）氨态氮含量的测定方法 A.1 试剂A.1.1 硼酸缓冲液（pH9.5）0.2 mol/L 的硼酸钠溶液和 0.1 mol/L的氢氧化钠溶液按体积 4:1 比例混合后，并将pH值调节至9.5。A.1.2 2%硼酸乙醇溶液将 20 g硼酸（分析纯）溶于 800 mL 无水乙醇（分析纯）后，用蒸馏水定容至 1 L。A.1.3 0.01 mol/L盐
11、酸溶液配制 0.01 mol/L 盐酸溶液，并用 0.01 mol/L 标准氢氧化钠溶液对其标定。A.1.4 甲基红溴甲酚绿混合指示剂A.2 测定步骤取青贮浸提液 2 mL和硼酸缓冲液 10 mL加入凯氏定氮蒸馏装置。向三角瓶内加入 2%硼酸乙醇溶液5 mL和 3 滴4 滴甲基红溴甲酚绿混合指示剂后，将三角瓶接入凯氏定氮装置的冷却管处，要求冷却管前端进入三角瓶液面下。蒸馏 7 min后，将冷却管离开液面，再蒸馏 2 min（若蒸馏液不满 50 mL时，应使蒸馏液达到 50 mL为止）。蒸馏结束后，用 0.01 mol/L 标准盐酸溶液对蒸馏液进行滴定。A.3 计算方法氨态氮含量按公式A.1进行
12、计算。10001001001802114.0%AWABFV.(A.1)式中：V氨态氮含量，单位为鲜样的质量百分比（%）；F用0.01 mol/L氢氧化钠标准溶液滴定0.01 mol/L盐酸滴定液的滴定系数；B滴定值，单位为毫升（mL）；A青贮饲料样品质量，A=20，单位为克（g）；W青贮饲料的水分含量，单位为百分比（%）。B DB22/T 278020175 附 录 B（规范性附录）挥发性脂肪酸含量的测定方法 B.1 试剂B.1.1 高氯酸，色谱纯。B.1.2 超纯水。B.2 高效液相色谱（HPLC）条件设定B.2.1 色谱柱Shodex Rspak KC-811 S-DVB gel Colu
13、mn 30 mm 8 mm。B.2.2 检测器紫外检测器，检测波长 210 nm。B.2.3 流动相3 mmol 高氯酸。B.2.4 检测条件流速为 1 mL/min。柱温为 50。检测波长为 210 nm。进样量为 5 L。B.3 测定步骤B.3.1 样品制备将青贮浸提液 4500 r/min 离心 15 min，将离心后上清液经 0.22 m 微孔滤膜过滤，制成待测样品。B.3.2 建立挥发性脂肪酸标准曲线分别配制浓度为0.5 mg/mL、1 mg/mL、2 mg/mL、4 mg/mL、6 mg/mL、8 mg/mL和10 mg/mL的乙酸、丙酸、丁酸和戊酸混合标准溶液，根据色谱图峰面积和浓度的正比关系建挥发性脂肪酸标准曲线。B.4 样品检测将制备的待测样品注入HPLC进样器后进行检测。B.5 计算方法挥发性脂肪酸含量按公式 B.1 进行计算。DB22/T 278020176 102010020180MX.(B.1)式中：X挥发性脂肪酸含量，单位为鲜样的质量百分比（%）；样液浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；M样品的水分含量，单位为百分比（%）。_