1、 2016-11-28 发布 2017-01-01 实施DBS13河北省地方标准DBS13/0052016食品安全地方标准 动物源性食品中多溴联苯醚的测定 河北省卫生和计划生育委员会河北省卫生和计划生育委员会 发布 发布 DBS13/0052016 2 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009规定的格式编写。本标准附录A为规范性附录。本标准由河北省卫生和计划生育委员会归口。本标准于2016年11月28日首次发布。DBS13/0052016 1食品安全地方标准 动物源性食品中多溴联苯醚的测定 1 范围 本标准规定了畜禽肉、生鲜乳及水产品等动物源性食品中（蛋类及其制品除外）多溴联苯醚类化合物的
2、检测方法。本标准适用于畜禽肉、生鲜乳及水产品等动物源性食品中（蛋类及其制品除外）多溴联苯醚类化合物（BDE28、BDE47、BDE99、BDE100、BDE153、BDE154、BDE183和BDE209）的测定。2 原理 冻干后的试样加入内标溶液（十溴联苯醚 BDE209 的测定使用13C 标记的同位素内标，其他多溴联苯醚类化合物使用 BDE77 做内标），经加速溶剂提取，酸化硅胶除脂、硅胶氧化铝复合层析柱净化后，使用气相色谱-质谱联用仪（负化学电离源）测定，内标法定量。3 培养基和试剂 注：注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T
3、 6682规定的一级水。规定的一级水。整个分析过程应避免塑料类容器的使用，如枪头，塑料离心管等。整个分析过程应避免塑料类容器的使用，如枪头，塑料离心管等。3.1 试剂 3.1.1 正己烷（C6H14）：色谱纯。3.1.2 二氯甲烷（CH2Cl2）：色谱纯。3.1.3 壬烷（C9H20）：色谱纯。3.1.4 硫酸（H2SO4）：含量 95%98%，优级纯。3.1.5 色谱用硅胶（0.0630.100 mm 粒径）：将市售硅胶装入玻璃色谱柱中，依次用正己烷和二氯甲烷淋洗两次，每次使用的溶剂体积约为硅胶体积的两倍。淋洗后，将硅胶转移到烧瓶中，以铝箔盖住瓶口置于马弗炉中 600 烘烤 6 小时，冷却后
4、装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.6 无水硫酸钠（Na2SO4）：农残纯。3.1.7 酸性氧化铝：色谱层析用碱性氧化铝，660 烘烤 6 h 后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.1.8 44%酸化硅胶：称取活化好的硅胶 100 g，逐滴加入 78.6 g 硫酸，振摇至无块状物后，装入磨口试剂瓶中，干燥器中保存。3.2 标准品 3.2.1 PBDEs 混合标准溶液：M-1614-CSM，见附录 A 中表 1。DBS13/0052016 2 3.2.2 定量内标（IS）标准溶液，见附录 A 中表 1。3.2.3 校正系列标准溶液，见附录 A 中表 2。4 仪器 4.1 气相色谱-负化学电
5、离/质谱联用仪（GC-NCI/MS）。4.2 色谱柱：VF-5ms（7 m0.25 mm0.1 m），或等效毛细管色谱柱。4.3 分析天平：感量为0.01 g 和0.1 mg。4.4 真空冷冻干燥机（冷凝器的最低温度-50）。4.5 加速溶剂提取仪。4.6 氮气浓缩器。4.7 旋转蒸发仪。4.8 玻璃层析柱（柱长30 cm，柱内径1.8 cm）。4.9 涡漩混合器。4.10 玻璃仪器的准备：所有需重复使用的玻璃器皿应在使用后尽快认真清洗，清洗过程如下：a）用含碱性洗涤剂的清水清洗；b）依次用清水和去离子水冲洗；c）依次用丙酮、正己烷和二氯甲烷洗涤。5 分析步骤 5.1 试样制备 取代表性可食部
6、位的样品，其中均匀样品直接混合（如奶类），非均匀样品用组织匀浆机充分搅拌均匀（如鱼、肉类），取液态乳样品 20 mL（鱼类、肉类 2g）经冷冻干燥 24h 后，放入干燥器中保存。5.2 试样提取 将冻干后的预处理试样0.5 g与10 g硅藻土混匀，加入定量内标溶液13C-BDE209（500 g/L，2 L）和BDE77（50 g/L，2 L）后，将样品和硅藻土的混合物装入萃取池中，萃取池顶部用适量硅藻土填满。提取溶剂为正己烷-二氯甲烷（1+1）100 mL。提取条件为：压力为10 Mpa(1500 psi)；温度为120；加热时间5 min；稳定时间8 min；清洗体积占萃取池体积的60；吹
7、扫时间为120 s；静态循环次数为2次。提取完成后，将提取液转移到茄形瓶中，旋转蒸发浓缩至近干。如分析结果以脂肪计则需要测定试样的脂肪含量。脂肪含量的测定：浓缩前准确称重茄形瓶，将溶剂浓缩至干后准确称重茄形瓶，两次称重结果的差值为试样的脂肪量。测定脂肪量后，加入少量正己烷溶解瓶中残渣。5.3 试样净化 5.3.1 酸化硅胶净化 DBS13/0052016 3将提取液转移至旋转蒸发瓶中，加入10 g酸化硅胶，于60 水浴加热振摇10 min，缓慢倾出上层溶液，浓缩至大约1 mL。5.3.2 复合硅胶柱净化 净化柱装填：玻璃柱底端用玻璃棉封堵后从底端到顶端依次填入2 g无水硫酸钠、6 g酸性氧化铝
8、、5 g酸化硅胶、2 g活化硅胶、2 g无水硫酸钠。然后用50 mL正己烷预淋洗。将经过5.3.1净化后浓缩洗脱液全部转移至柱上，用约5 mL正己烷冲洗茄形瓶3次4次，洗液转移至柱上。待液面降至无水硫酸钠层时加入100 mL二氯甲烷-正己烷（1+1）洗脱，洗脱液浓缩至约1 mL。5.3.3 试样溶液浓缩 将净化后的试样溶液转移至进样小管中，在氮气流下浓缩，用少量正己烷洗涤茄形瓶 3 次4 次，洗涤液也转移至进样内插管中，氮气浓缩至约 50 L，然后封盖待上机分析。5.4 仪器测定 5.4.1 气相色谱条件 色谱柱：VF-5 ms（7 m0.25 mm0.1 m）。进样口温度：275。色谱柱升温
9、程序：120 保持 2 min，以 26/min 速度升至 310，并保持 3 min。载气：高纯氦气（纯度99.999%），柱流量：3 mL/min。进样器模式：230 kPa 高压脉冲进样。进样量：不分流进样 1 L。5.4.2 质谱条件 离子化方式：负化学电离（NCI），甲烷为反应气。传输线温度：280。离子源温度：220。溶剂延迟时间：3 min。离子监测方式：选择离子监测（SIM），BDE-209 的监测碎片为 m/z 486，488，13C-BDE-209 的监测碎片为 m/z 492，494，其他多溴联苯醚的监测碎片为 m/z 79，81。5.4.3 标准曲线的测定 分别将试样和
10、系列标准注入气相色谱-质谱系统，记录 PBDEs 和内标的峰面积。计算 PBDEs（m/z 79）和 BDE77 内标(m/z 79)的峰面积比，并计算 BDE209(m/z 486)和13C-BDE209 内标(m/z 494)的峰面积比，以各系列标准溶液的进样量（ng）与对应的 PBDEs（m/z 79）和 BDE77 内标(m/z 79)的峰面积比，以及 BDE209(m/z 486)和13C-BDE209 内标(m/z 494)的峰面积比分别绘制线性曲线。5.5 结果计算 5.5.1 定性 以相对保留时间和 PBDEs 相应监测离子的丰度比进行定性分析。要求所检测的 PBDEs 色谱峰
11、信噪比(S/N)大于 3，PBDEs 相应监测离子的丰度比偏差不超过标准溶液中相应离子丰度比的 20%。5.5.2 定量 DBS13/0052016 4 采用内标法，以相对响应因子（RRF）进行定量计算。系列标准溶液进样，各个浓度连续进样 3针，按公式（1）计算 RRF 值：RRF=（1）式中：RRF目标化合物对内标的相对响应因子；An 目标化合物的峰面积；Cn 目标化合物的量(ng)；As内标的峰面积；Cs内标的量(ng)。在系列标准溶液中，各目标化合物的 RRF 值相对标准偏差（RSD）应小于 20%。按公式（2）计算样品中 PBDEs 的含量：Xn=（2）式中：Xn目标化合物的含量（ng
12、/g或ng/mL）；Ms样品中加入内标的量（ng）；An目标化合物的峰面积；As定量内标的峰面积；m 取样量（g 或 mL）。计算结果保留三位有效数字。CnAsCsAnmssnRRFAMADBS13/0052016 5附录 A（规范性附录）混合标准溶液及色谱图和方法检出限 表 1 多溴联苯醚及其定量内标标准溶液 化合物 CAS#溴原子数 浓度（mg/L）纯度%（GC/MS）BDE28 41318-75-6 3 20 99.2 BDE47 5436-43-1 4 20 98.0 BDE99 60348-60-9 5 20 98.3 BDE100 189084-64-8 5 20 100.0 BD
13、E153 68631-49-2 6 20 100.0 BDE154 207122-15-4 6 20 97.0 BDE183 207122-16-5 7 20 98.8 BDE209 1163-19-5 10 200 98.3 BDE77（IS）93703-48-1 4 50 99.1 13C-BDE209（IS）1163-19-5 10 25 98 表 2 多溴联苯醚校正系列标准溶液 化合物 浓度 g/L CS1 CS2 CS3 CS4 CS5 BDE28 0.5 1.0 5.0 10 50 BDE47 0.5 1.0 5.0 10 50 BDE99 0.5 1.0 5.0 10 50 BD
14、E100 0.5 1.0 5.0 10 50 BDE153 0.5 1.0 5.0 10 50 BDE154 0.5 1.0 5.0 10 50 BDE183 0.5 1.0 5.0 10 50 BDE209 5.0 10 50 100 500 BDE77（IS）5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 13C-BDE209（IS）50 50 50 50 50 DBS13/0052016 6 3.03.54.04.55.05.56.06.57.07.58.08.59.09.510.010.511.00.51.01.52.02.53.0(x100,000)TICTIC912345678 图1 多溴联苯醚混合标准溶液总离子流色谱图（0.01 mg/L）（注：1：BDE28,2:BDE47,3:BDE77(IS),4:BDE100,5:BDE99,6:BDE154,7:BDE153,8:BDE183,9:BDE209+13C-BDE209）表 3 多溴联苯醚的方法检出限和定量限 化合物 检测限（ng/kg）定量限（ng/kg）BDE28 2.0 6.0 BDE47 2.5 7.0 BDE99 6.5 20.0 BDE100 3.0 7.0 BDE153 5.0 14.5 BDE154 4.0 9.0 BDE183 3.0 6.0 BDE209 8.0 22.0