1、IICS 67.040CCS X11团团体体标标准准T/CIQA 502023食药物质中赭曲霉毒素食药物质中赭曲霉毒素 B 的测定的测定高效液相色谱法高效液相色谱法Determination of Ochratoxin B in drug homologous food byHPLC method2023-02-20发布2023-08-20实施中国出入境检验检疫协会 发布全国团体标准信息平台T/CIQA 50-2023I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。
2、本文件由中国出入境检验检疫协会进出口食品标准化技术委员会（CIQA/TC10）提出并归口。本文件起草单位：南京师范大学、皖西学院、中华全国供销合作总社南京野生植物综合利用研究所、江西中医药大学、湖南农业大学、中国药科大学、南京海关动植食中心、常州磐诺仪器公司。本文件主要起草人：吕广萍、沈伟健、韩邦兴、王涵文、孙力军、林群英、陈丽华、简晖、卢向阳、刘虎虎、曹崇江、胡德俊、张新轩、董欢欢、黄泽建、张盈月、易鑫、匡峰岩、吴丽娜。本文件知识产权归中国出入境检验检疫协会所有。任何单位或个人未经许可，不得以营利为目的，印制、出版、翻译、转发或复制全文或部分文字。全国团体标准信息平台T/CIQA 50-20
3、231食药物质中赭曲霉毒素 B 的测定 高效液相色谱法1范围本文件描述了按照传统既是食品又是中药材的物质（简称食药物质）中赭曲霉毒素B的高效液相色谱-荧光检测方法。本文件适用于石斛、栀子、莲子、百合、薏苡仁、茯苓和麦芽中赭曲霉毒素B含量的测定，附录A内其余食药物质可参考执行。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法。3原理采用乙腈提取液提取试样中的赭曲霉毒素B，分散固相萃取方法净化，高效液相色谱-荧光检测法检测，外标法
4、定量。4试剂和材料除另有规定外，所用试剂应均为分析纯，水为符合GB/T6682中规定的一级水。4.1试剂4.1.1乙腈（CH3CN）：色谱纯。4.1.2甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.1.3甲酸（HCOOH）：色谱纯。4.1.4无水硫酸镁（MgSO4）。4.1.5氯化钠（NaCl）。4.1.6柠檬酸钠二水合物（C6H5Na3O72H2O）。4.1.7柠檬酸氢二钠盐倍半水合物（C6H9NaO8）。4.1.8石墨化碳黑（C，GCB），6080 m。4.1.9N-丙基乙二胺（C5H14N2，PSA），4060 m。4.2盐析剂和吸附剂配比4.2.1盐析剂：无水硫酸镁、氯化钠、柠檬酸钠二水合物和柠檬酸
5、氢二钠倍半水合物，质量比为4110.5。4.2.2吸附剂1：无水硫酸镁、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，质量比为311。4.2.3吸附剂2：无水硫酸镁、石墨化碳黑和乙二胺基-N-丙基，质量比为312。全国团体标准信息平台T/CIQA 50-202324.3溶液配制4.3.10.1%甲酸水溶液：取1 mL甲酸，用水稀释至1000 mL，混匀。4.3.22%甲酸乙腈溶液：取20 mL甲酸，用乙腈稀释至1000 mL，混匀。4.3.3乙腈-甲酸-水溶液(50：0.05：49.95，V/V/V)：量取500 mL乙腈，加入0.5 mL甲酸（4.1.3），用水稀释至1000 mL，混匀。4.4标准品赭曲
6、霉毒素B标准品（C20H19NO6，CAS：4825-86-9）：纯度98%，或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。4.5标准溶液配制4.5.1标准储备液（1.0 mg/mL）：准确称取一定量的赭曲霉毒素B标准品，用甲醇溶解成1 mg/mL的标准储备液，-20 下避光保存。4.5.2标准工作液（4.0 g/mL）：准确移取一定量赭曲霉毒素B标准储备液（4.5.1），用甲醇稀释成4g/mL的标准工作液，4 下避光保存。4.5.3基质标准工作液：准确移取一定量标准工作液（4.5.2），用基质空白溶液稀释成浓度为1、2、5、10、20、50 ng/mL的基质标准工作液。5仪器和设备5.1高效液相
7、色谱仪：配荧光检测器。5.2分析天平：感量分别为 0.01 g 和 0.000 01 g。5.3超声波发生器。5.4高速离心机：转速5 000 r/min。5.5恒温氮吹装置。5.6涡旋混合器。5.7粉碎机。5.81 mL 一次性注射器。5.9滤膜：0.22 m，有机系。5.10离心管：50 mL。5.1120 目筛。6试样制备与保存从样品中取出具有代表性的样品1 kg，粉碎机粉碎混匀后过20目筛，装入洁净的自封袋中，密封，并标明标记，-20 保存。7分析步骤7.1提取与净化全国团体标准信息平台T/CIQA 50-20233称取20 g试样（精确到0.01 g），加入100 mL 2%甲酸乙腈
8、（4.3.2），涡旋或振荡30 s，超声波处理10 min，8000 r/min离心10 min，将20 mL上清液转移至另一离心管中，加入7.8 g盐析剂（4.2.1），涡旋或振荡1 min，8000 r/min离心5 min，分别按不同类型食药物质作如下处理。7.1.1石斛、栀子、莲子、百合、茯苓、麦芽的净化将10 mL上清液转移至另一离心管中，再加入500 mg吸附剂1（4.2.2），涡旋或振荡1 min，8000 r/min离心5 min7.1.2薏苡仁的净化将10 mL上清液转移至另一离心管中，再加入600 mg吸附剂2（4.2.3），涡旋或振荡1 min，8000 r/min离心5
9、 min。分别取7.1.1和7.1.2中上清液5 mL，在45 条件下，用氮气吹干，加入1.0 mL乙腈-甲酸-水溶液（4.3.3），涡旋或振荡1 min溶解残留物，过0.22 m有机滤膜，收集滤液于进样瓶中，用高效液相色谱-荧光检测法测定。7.2测定7.2.1液相色谱参考条件液相色谱参考条件列出如下：a)色谱柱：C18柱，（柱长 150 mm，柱内径 4.6 mm，填料粒径 3.5 m）或等效柱；b)检测波长：激发波长 320 nm，发射波长 456 nm；c)流动相及洗脱条件：A：0.1%甲酸水，B：乙腈；等度洗脱：50%A-50%B；d)流速：1.0 mL/min；e)柱温：40；f)进
10、样量：10 L。7.2.2标准曲线的制作以标准工作溶液浓度为横坐标，待测物质的峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。每次试验均应重新绘制标准工作曲线。7.2.3定性测定按照保留时间进行定性，在相同试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在2.5%之内。7.2.4定量测定按照 7.2.1 液相色谱条件测定样液和标准工作液，外标标准曲线法测定样品中的待测物质的含量，样品中待测物质的响应值应在标准曲线范围之内，如果超出标准曲线范围，应适当稀释后再进样。色谱图参见附录 B。全国团体标准信息平台T/CIQA 50-202347.2.5空白试验除不加试样外，均按7.1和7.2步骤进行
11、。8结果计算和表述赭曲霉毒素B的含量按式（1）计算：X=cV1 000m1 000f（1）式中：X试样中待测物质的含量，单位为微克每千克（g/kg）；c从标准曲线上得到的待测物质的溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；1 000单位换算常数；m试样的质量，单位为克（g）；f稀释倍数。计算结果扣除空白值，检测测定结果以平行测定值的算术平均值表示，结果小数点后保留两位数字。9检出限和回收率9.1灵敏度本方法的检出限为0.3 g/kg，定量限为1 g/kg。9.2回收率本方法的添加浓度和平均回收率见附录C。全国团体标准信息平台T/CIQA 50-20235
12、附录A（资料性附录）食药物质名单（110 种）丁香、八角、茴香、刀豆、小茴香、小蓟、山药、山楂、马齿苋、乌梢蛇、乌梅、木瓜、火麻仁、代代花、玉竹、甘草、白芷、白果、白扁豆、白扁豆花、龙眼肉（桂圆）、决明子、百合、肉豆蔻、肉桂、余甘子、佛手、杏仁、沙棘、芡实、花椒、红小豆、阿胶、鸡内金、麦芽、昆布、枣（大枣、黑枣、酸枣）、罗汉果、郁李仁、金银花、青果、鱼腥草、姜（生姜、干姜）、枳子、枸杞子、栀子、砂仁、胖大海、茯苓、香橼、香薷、桃仁、桑叶、桑葚、桔红、桔梗、益智仁、荷叶、莱菔子、莲子、高良姜、淡竹叶、淡豆豉、菊花、菊苣、黄芥子、黄精、紫苏、紫苏籽、葛根、黑芝麻、黑胡椒、槐米、槐花、蒲公英、蜂蜜、
13、榧子、酸枣仁、鲜白茅根、鲜芦根、蝮蛇、橘皮、薄荷、薏苡仁、薤白、覆盆子、藿香、人参、山银花、芫荽、玫瑰花、松花粉、粉葛、布渣叶、夏枯草、当归、山奈、西红花、草果、姜黄、荜茇、党参、肉苁蓉、铁皮石斛、西洋参、黄芪、灵芝、天麻、山茱萸、杜仲叶。全国团体标准信息平台T/CIQA 50-20236附录B（资料性附录）赭曲霉毒素B标准品色谱图赭曲霉毒素B标准品色谱图，见图B。图B 赭曲霉毒素B标准品色谱图全国团体标准信息平台T/CIQA 50-20237附录C（资料性附录）赭曲霉毒素 B 平均回收率赭曲霉毒素 B 平均回收率，见表 C。表 C 赭曲霉毒素 B 平均回收率（n=3）7种药食两用物质低（1
14、g/kg）中（10 g/kg）高（20 g/kg）回收率（%）精密度（%）回收率（%）精密度（%）回收率（%）精密度（%）石斛89.72.999.810.772.810.7栀子109.84.0103.811.787.93.9莲子105.04.2118.88.487.92.8百合86.32.874.37.687.42.0薏苡仁78.11.278.81.378.88.4茯苓74.37.987.42.0109.84.0麦芽83.71.895.64.291.612.8石斛、栀子、莲子、百合、薏苡仁、茯苓、麦芽中赭曲霉毒素 B 的加标水平为 1、10、20 g/kg，平均回收率为 72.8%118.8%，精密度为 2.8%12.8%。全国团体标准信息平台