1、ICs 13.100C52中华 人 民共 和 国 国家 职 业 卫生 标 准GBz/T240.252011化学品毒理学评价程序和试验方法第25部分:慢性经皮毒性试验Pr o c e d u r e s a n d t e s t s Fo r t o x i c o Io g i c a】e v a Iu a t i o n s o F c h e m i c a l s Pa r t 25:Ch r o n i c d e r m a l t o x i c i t y t e s t 11-OB-19发布12-001实施中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部发布GBz/T240.25-20
2、11曰根据 中华人民共和国职业病防治法 制定本部分。GBz/T240KK化学品毒理学评价程序和试验方法 现分为以下四十四部分:第1部分:总则;第2部分:急性经口毒性试验;第3部分:急性经皮毒性试验;第4部分:急性吸人毒性试验;第5部分:急性眼刺激性/腐蚀性试验;第6部分:急性皮肤刺激性/腐蚀性试验;第7部分:皮肤致敏试验;第8部分:鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验;第9部分:体外哺乳动物细胞染色体畸变试验;第10部分:体外哺乳动物细胞基因突变试验;第11部分:体内哺乳动物骨髓嗜多染红细胞微核试验;第12部分:体内哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验;第13部分:哺乳动物精原细胞/初级精母细胞染色体畸变试验
3、;第14部分:啮齿类动物显性致死试验;第15部分:亚急性经 口毒性试验;第16部分:亚急性经皮毒性试验;第17部分:亚急性吸人毒性试验;第18部分:亚慢性经 口毒性试验;第19部分:亚慢性经皮毒性试验;第z O部分:亚慢性吸人毒性试验;第21部分:致畸试验;第22部分:两代繁殖毒性试验;第23部分:迟发性神经毒性试验;第24部分:慢性经口毒性试验;第25部分:慢性经皮毒性试验;第26部分:慢性吸人毒性试验;第27部分:致癌试验;第28部分:慢性毒性/致癌性联合试验;第29部分:毒物代谢动力学试验;第30部分:皮肤变态反应试验-局部淋巴结法;第31部分:大肠杆菌回复突变试验;第32部分:酵母菌基
4、因突变试验;第33部分:果蝇伴性隐性致死试验;第34部分:枯草杆菌基因重组试验;第35部分:体外哺乳动物细胞程序外DNA合成(UDs)试验;第36部分:体内哺乳动物外周血细胞微核试验;亠刖GBz/T240.25-011第37部分:体外哺乳动物细胞姊妹染色单体交换试验;第3s 部分:体内哺乳动物骨碇细胞姊妹染色体交换试验;第39部分:檑子畸形试验;第部分g 繁殖/生长发育毒性筛选试验;第狃部分:亚急性毒性合并繁殖/发育毒性筛选试验;第吐2部分:一代繁殖试验;第3部分:神经毒性筛选组合试验;第d 0部分:免疫毒性试验。本部分为GBz/T0的第25部分。本部分由卫生部职业卫生标准专业委员会提出。本部
5、分由中华人民共和国卫生部批准。本部分起草革位:广东省职业病防治院、中国疾病预防拄制中心职业卫生与中毒拄制所本部分主要起草人:黄建勋、孙金秀、郑玉新、李斌、史晓祚。GBz/T240.25-2011化学品毒理学评价程序和试验方法第25部分:慢性经皮毒性试验1 范围GBZ/T240的本部分规定了动物慢性经皮毒性试验的目的、试验概述、试验方法、数据处理与结果评价、评价报告和结果解释。本部分适用于检测化学品的慢性经皮毒性。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的:凡是注 日期的引用文件,仅所注 日期的版本适用于本文件。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G
6、BZ/T224 职业卫生名词术语GBZ/T240.1 化学品毒理学评价程序和试验方法 第1部分:总则3 术语和定义GBZ/T240。l 界定的术语和定义适用于本文件。慢性经皮毒性 c h m n i c d e r m a t c,x i c i t y动物在正常生命期的大部分时间内经皮接触受试样品所引起 的健康损害效应。革 巴 吕 昌 孓 旨 t a r g e t o r g a n实验动物出现的由受试样品引起的明显毒性作用的任何器官。4 试验目的实验动物经皮途径反复给予不同剂量(浓度)的受试样品,观察实验动物的慢性毒性效应、严重程度、靶器官和损害的可逆性,确定无作用剂量(浓度),为拟定人
7、类经皮接触该受试样品的职业接触限值的制定提供依据。5 试验概述在实验动物的大部分生命期间将用受试样品对动物经皮染毒,通常连续染毒1年以上,观察动物的中毒表现,并进行生化指标、血液学指标、病理组织学等检查,以阐明此受试样品的慢性毒性。6 试验方法6.1 受试样品6.1.1 资料收集在开始本试验之前,应尽量搜集受试样品现有的各种资料:13.13.2GBz/T240.25-20l lo 受试样品的商品名和其他名称及CAS号;b)受试样品的结构式、分子式和相对分子质量;受试样品的物理、化学性质(可包括:外观、沸点、熔点、折射率、光谱资料、溶解度、挥发性、化学活性、光化学性质、电离度、粒度、密度 等)。
8、重要 的参数还包括稳定性(包括在 介质 中的稳定性);受试样品的分析方法;受试样品的生产方法、合成路线、杂质、种类和含量;受试样品(包括在介质)要有长期则需定期制各新鲜样品;人类可能接触 的途径和水d)C)f)g)6.1.2 登记接受样品的 日期开始试验前应有适当用 同一批生产 的受试样品,否则,应分别测定每6.2 实验动物和饲6.2.1 实验动物为选择合适验。所选用的品毒物动力学试啮齿类动物,首性试验,一种为物有诸多限制。如果仅有啮齿类6.2.2 实验啮齿类动物每组动物不少于接触受试样品。过平均体重 的10%。如试验期间应增加动物数量。在试验开始时相6.2.3 饲养和环境6.2.3.1 实验
9、动物和动物管理措施并严格控制环境条件,尽量减少人员流、药物治疗等都可对试验结果产生影响。6.2.3.2 每一房间只能饲养一种验用(除非有证据表 明不 同受试样品对动物无影响),也应考虑受试样品又 6.2.3.3 笼具等物品应便于消毒和清洁,应避免使用消毒剂和农药等,特别是与动物有密切接触的部位更应注意,因为这类活性物质对试验结果可能产生影响。饲料应满足动物营养需要,应定期分析饲料成分(包括营养成分和杂质等),不含对试验有影响的杂质,分析结果应在评价报告列出。6.2.3.4 必要时应监测饮水的水质。食盒内饲料应定期更换,约每周一次。动物 自由饮水。6.3 剂设计6.3.1 一般应设三个剂量组及一
10、个对照组。剂量选择可根据急性毒性、亚急性毒性、亚慢性毒性、蓄积毒性和代谢研究等资料确定。高剂量组可以出现某些较轻或较明显的毒性反应,个别动物可能死亡;低剂量不应引起任何毒性反应;中剂量界于高剂量和低剂量之间,动物可能产生轻微的毒性效应。2一房间只供一种受样品来源和批号应相类和品类受试一种为两种动物上对使用资料,将资在生长别体重境设施应符合 国家相应规定,应、饲料的杂质、空气、饮GBz/T240.25-20116.3.2 若掌握人群接触水平,则最低染毒剂量应高于人群的实际接触水平。6.3.3 对照组动物除不接触受试样品及其他介质外,其他处理均与染毒组相同。若染毒应加人溶剂或添加剂,这些溶剂或添加
11、剂不应影响受试样品的吸收或引起毒性作用,同时还应设相应的助剂对照组。6.3.4 可另设一追踪观察组,即选用只动物(雌雄各半),给予高剂量受试样品,染毒两年,在全程染毒结束后继续观察一段时间(一般不少于28,以了解毒性作用的持续性、可逆性或迟发毒作用;也可在试验设计时每组增加一定的动物数,试验结束时每组剖杀部分动物(数量应满足统计分析),部分动物继续作追踪观察。6.3.5 若受试样品引起严重的皮肤刺品的使用浓度,尽管这样可导致原来在高浓度(或高剂量)下出现的毒性作皮肤受到严重损伤,则应终止试验,并降低浓度重新开始试验。6.3.6 本试验中,如果观测到的毒性效应,而且可以根据化合物的构效面试验观察
12、。6.4 试验方法6.4.1 染毒前2,以免引起皮肤通透性 的改变。此后试样品应尽可通过测定动物璃纸和无剌激毒时还应采用6.4.2 通常6.4.3 染毒及面积应相同。受表面积的10%,应的面积。应使用玻试样品脱落。染的松动。也可染毒5d。以后每3月调整一次。6.4.4 染毒周6.5 临床观察试验期内每天对死亡动物进行解量减少动物损失,如作用的开始时间及其进展情况,减少因疾病、观察期间应记录动死亡等,记录其开始时间及进展情况。逐个记录体重变化,前 13次。摄食量在前13周每周记录一次,此后如动物健康状况或体重无异6.6 临床检查6.6.1 血常规检查和其他血液指标检查检查指标可包括血红蛋白浓度、
13、红细胞压积、红细胞数、血小板数、白细胞计数与分类、凝血功能等指标。在染毒开始后第3个月和第6个月各检查一次(如果没有该种动物品系的历史资料时,可在试验开始时做正常值),此后每隔6个月检查一次,试验结束时检查一次。大鼠每组每性别可检查10只,非啮齿类动物应全部应检查。每次检查的动物最好相同。在试验过程中如有动物健康状况恶化,应对该动物作白细胞分类计数。白细胞分类计数通常先在高剂量组和对照组进行,如高剂量组有问题才依次再检查较低剂量组动物。罗“L脞r f 帅弱或消失。若试验早期记录一次,此后每4周记过1000m g/k g 体样品毒性时,则不必进行三个染毒部受试样到实际情一次染毒类所食造成的动物损
14、失。表现,包括神经系统、眼GBz/T240.25-20116.6.2 尿液检查收集各组动物尿样进行分析,大鼠每组每性别可检查10只,非啮齿类动物应全部检查,每次检查的动物最好相同,检查时间间隔与血常规检查一致。尿液的常规检查包括外观、p H值、尿蛋白、尿糖和血细胞。如尿样分析可作为预期或观察得到的毒性指标,则可增加有关的尿液检查项 目。6.6.3 临床生化检查在染毒开始后第3个月和第6个月各检查一次(如果没有该种动物品系的历史资料时,可在试验开始时做正常值),此后应每隔6个月检查一次,试验结束时检查一次。大鼠每组每性别可检查10只,非啮齿类动物应全部检查。每次检查的动物最好相同。检查指标主要包
15、括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、白蛋白(Al b)、总蛋 白(TP)。如有必要还应做 电解质平衡、钙(Ca)、磷(P)、氯(Cl)、钠(Na)、钾(K)、空腹血糖(Gl u)(禁食时间要适当)、碱性磷酸酶(ALP)与总胆红素。在某些情况下,还须检测与肝或其他器官有关的酶和胆酸,以及脂类化合物、激素、高铁血红蛋白、胆碱酯酶(Ch E)活性等分析。如出现肉眼可见的脏器改变,可增加与之相应的血液生化指标。还可增加其他脏器相应指标的检查,以进一步对观察到的毒性反应进行研究。6.6.4 大体解剖所有动物,包括在试验过程中死亡或濒死而被处死的动
16、物均应进行大体解剖。如果处死动物,处死前应收集其血样进行白细胞分类计数。保存所有肉眼可见病变、肿瘤或可疑肿瘤组织。应分析大体解剖与病理组织学检查结果的对应情况。所有的器官组织都应保存。一般包括下列器官和组织:脑、垂体、甲状腺(包括甲状旁腺)、胸腺、肺(包括气管)、心脏、主动脉、唾液腺、肝、脾、肾、肾上腺、食管、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠、子宫、膀胱、淋巴结、胰腺、性腺、生殖附属器官、雌性乳腺、皮肤、肌肉、外周神经、脊髓(颈,胸,腰段)、胸骨或股骨(包括关节)和眼睛。肺和膀胱用固定剂填充能保存更好。脑、肝、脾、肾、肾上腺、性腺需称重。大鼠每组每性别可称10只,非啮齿类动物包括甲状腺及甲状旁腺应全部称重。6.6.5 病理组织学检查6.6.5.1 对所有肉眼可见的肿瘤和异常的组织器官应进行病理组织学检查。6.6.5.2 对在试验中途死亡或处死的动物、所有高剂量组和对照组动物的组织器官进行病理组织学检查并详细描述。6.6.5.3 试验结果证明某一剂量组的动物正常寿命发生明显改变或诱发了影响毒性反应的效应,则下一个剂量组也应做病理组织学检查。6.6.5.4 如果怀疑某种病变是由受