1、1CS65.020B04中华人民共和国国家标准农业部953号公告一8.4一2007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第4部分：生物多样性影响Evaluation of environmental impact of genetically modifiedplants and its derived productsInsect-resistant ricePart 4:Impacts on biodiversity2007-12-18发布2008-03-01实施中华人民共和国农业部发布农业部953号公告一8.4一2007前言本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标
2、准由全国农业转基因生物安全管理标准化技术委员会归口。本标准起草单位：中国农业科学院植物保护研究所、农业部科技发展中心。本标准主要起草人：彭于发、刘信、张永军、谢家建、厉建萌、傅强、叶恭银。I农业部953号公告一8.4一2007转基因植物及其产品环境安全检测抗虫水稻第4部分：生物多样性影响1范围本标准规定了转基因抗虫水稻对生物多样性影响的检测方法。本标准适用于转基因抗虫水稻对家蚕、柞蚕及稻田主要害虫、优势天敌、节肢动物群落结构及主要水稻病害影响的检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于
3、本标准。然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB4404.1粮食作物种子禾谷类农业部953号公告一8.1一2007转基因植物及其产品环境安全检测.抗虫水稻第1部分：抗虫性GB/T15794.4稻飞虱测报调查规范3要求3.1试验材料转基因抗虫水稻品种（系）和对应的非转基因水稻品种（系）。3.2其他要求按照农业部953号公告8.1一2007中“4要求”执行。4试验方法4.1试验设计小区采用随机区组设计，小区面积不小于150m2,4次重复，小区间设有1.0m宽隔离带，处理包括：转基因抗虫水稻品种（系）适时喷施化学农药防治
4、非靶标害虫；转基因抗虫水稻品种（系）不喷施任何化学农药；对应的非转基因水稻品种（系）统一喷施化学农药：对应的非转基因水稻品种（系）不喷施化学农药。4.2播种水稻材料按当地单季水稻播种（或按水稻品种特性确定），2530d秧龄（或按水稻品种推荐秧龄）时单本移栽，按当地常规栽插密度或供试品种推荐密度进行栽插。4.3调查和记录4.3.1对稻田节肢动物群落结构的影响4.3.1.1调查方法农业部953号公告一8.4一2007直接观察法：田间调查采用盆拍法平行跳跃式取20个30个样点，每个样点取2穴，瓷盘规格为30cm40cm,从水稻移栽以后，每隔7d调查1次，记载整株水稻上各种昆虫和蜘蛛的数量、种类和发育
5、阶段。开始调查时，首先要快速观察活泼易动的昆虫和（或）蜘蛛的数量。对田间不易识别的种类进行编号，带回室内鉴定。吸虫器调查法：在水稻苗期、分蘖期、扬花期和乳熟期各调查1次，每小区采用对角线5点取样。每点用吸虫器抽取0.5m0.5m面积的水稻（全株）及其地面上的所有节肢动物。将抽取的样品带回室内清理和初步分类后，放入75%乙醇溶液中保存，供进一步鉴定。4.3.1.2结果记录记录所有直接调查观察到的和吸虫器抽取到的节肢动物的名称、发育阶段和数量。4.3.1.3结果表述采用节肢动物群落的多样性指数、均匀性指数和优势集中性指数3个指标，分析比较转基因抗虫水稻田靶标害虫、非靶标害虫和天敌亚群落，以及捕食性
6、天敌和寄生性天敌功能团的稳定性。节肢动物群落的多样性指数按公式(1)计算。PnP(1)式中：H一多样性指数；P=Ni/N;N:第i个物种的个体数；N一总个体数；节肢动物群落的均匀性指数按公式(2)计算。J=H/lnS(2)式中：J均匀性指数；H一一多样性指数：S一物种数。节肢动物群落的优势集中性指数按公式(3)计算。C=(N:/N)2式中：C一优势集中性指数：N第i个物种的个体数；N一总个体数。4.3.2对稻田主要鳞翅目害虫的影响4.3.2.1调查方法采用平行跳跃法取样，每点连续调查相邻2穴4穴水稻，每小区查25点，分别在移栽后25d30d(分蘗中期)、分蘖末期、齐穗期和乳熟期各调查1次。调查
7、指标包括每穴水稻的分蘖数、叶片数，稻螟虫（二化螟、三化螟、大螟）造成的枯鞘、枯心或白穗数，稻纵卷叶螟造成的卷叶数及卷叶程度，其他鳞翅目害虫如稻弄蝶、稻眼蝶、稻螟蛉的数量。4.3.2.2结果表述依公式(4)计算控制效果。确定转基因抗虫水稻对主要鳞翅目害虫的田间影响效果。E=D=TX100D(4)农业部953号公告一8.4一2007式中：E控制效果，用百分率表示；D对照小区受害植株数或虫数；T供试小区受害植株数或虫数。4.3.3对稻田主要刺吸性害虫的影响4.3.3.1调查方法调查每个小区飞虱（褐飞虱、灰飞虱、白背飞虱等）和叶蝉（黑尾叶蝉等）的种类和数量，下述两种方法任选1种。方法1：参照GB/T1
8、5794.4中本田飞虱的调查方法，即采用平行双行跳跃式法取样。每小区用盆拍法调查15点30点（虫多选点少，虫少选点多），每点查2穴水稻，记录稻飞虱及叶蝉的种类、虫态和数量。分别在苗期、分蘖期、孕穗期和黄熟期各调查1次。记录稻飞虱及叶蝉的种类、虫态和数量。方法2：采用机动吸虫器取样法，用对角线5点取样法，分别在苗期、分蘖期、齐穗期和黄熟期各调查1次。每个样点用吸虫器吸取0.25m(6穴)范围内水稻全株及其地面的所有害虫。将抽取的样品带回室内清理并记录稻飞虱和叶蝉的种类、虫态和数量。4.3.3.2结果表述按公式(4)计算转基因抗虫水稻对主要刺吸性害虫的田间影响效果。4.4对家蚕和柞蚕的影响4.4.
9、1水稻花粉的采集在水稻扬花盛期，采用拍打法将转基因抗虫水稻花粉收集到磁盘中。.分别将转基因抗虫水稻和非转基因对照水稻花粉取回到实验室中。采集的花粉用200目的分样筛过筛，除去花药等杂质，放入50mL离心管，迅速用液氮冷冻后放入一20冰箱中保存备用。：4.4.2不同浓度水稻花粉叶片的制备将转基因抗虫水稻和非转基因水稻花粉按每毫升蒸馏水1mg、5mg和10mg的花粉量分别制成不同花粉浓度的悬浮液，将新鲜桑叶或柞树叶片分别放入不同浓度的花粉悬浮液中，并充分摇动，使花粉均匀分布在叶片上，然后取出晾干，制备成0粒/cm、100粒/cm2、500粒/cm2和1000粒/cm2花粉浓度桑叶或柞树叶片，以对应
10、的非转基因水稻花粉作对照。4.4.3检测方法取直径20cm的培养皿，底部铺一湿润的滤纸，放入沾有水稻花粉的新鲜桑树或柞树叶片，然后接人20头家蚕或柞蚕的初孵幼虫（蚁蚕），每2d更换一次新鲜叶片，检测在25，L:D=16：8光照条件下进行，到第7d结束。4.4.4调查记录每2d检查取食沾有水稻花粉叶片的家蚕或柞蚕初孵幼虫的存活率，检查时用毛笔尖轻触虫体无反应为死亡判断标准，第7d对存活的幼虫称重。4.4.5结果表述根据取食沾有不同浓度转基因抗虫水稻花粉和对应的非转基因水稻花粉桑叶或柞树叶家蚕或柞蚕初孵幼虫第7d的死亡数和幼虫体重是否存在显著差异，评价转基因抗虫水稻花粉对家蚕和柞蚕的影响。4.5对水稻主要病害的影响4.5.1对水稻白叶枯病害的影响在灌浆期调查1次，每小区采用5点取样，每点取10穴20穴水稻，对水稻白叶枯病发生情况进行调查，分级标准按附录A中表A.1执行。水稻白叶枯病的发病情况用病情指数表示，按公式(5)计算。3