1、ICS67.050B50中华人民共和国国家标准农业部958号公告一14一2007水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的测定气相色谱一质谱法Determination of chloramphenicol,thiamphenicol and florfenicol in fisheryproducts by GC-MS2007-12-18发布2008-03-01实施中华人民共和国农业部发布农业部958号公告一14一2007前言本标准附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中
2、心。本标准主要起草人：冷凯良、孙伟红、王志杰、王联珠、翟毓秀。I农业部958号公告一14一2007水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的测定气相色谱一质谱法1范围本标准规定了水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的气相色谱一质谱测定方法。本标准适用于水产品可食部分中氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素残留量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T66
3、82分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中残留的氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素以乙酸乙酯超声波提取，正己烷液液萃取去脂，固相萃取柱净化，硅烷化衍生后用气相色谱一质谱仪测定，内标法定量。4试剂除另有说明外，试验用水为GB/T6682规定的一级水。4.1乙酸乙酯：色谱纯。4.2正己烷：优级纯。4.3甲醇：色谱纯。4.4乙腈：色谱纯。4.5无水硫酸钠：分析纯，650灼烧4h,冷却后贮于密闭容器中备用。4.6氯化钠：分析纯。4.74%氯化钠溶液：称取氯化钠20g,加水溶解，稀释到500mL。4.8衍生化试剂：N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺(BSTFA)/三甲基氯硅烷(TMCS)体积比99：1。4
4、.9氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准品：纯度均99%。4.10氘代氯霉素内标标准溶液：100g/mL。4.11氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准储备溶液：分别准确称取氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准品0.01g(准确到0.0001g),用甲醇溶解并定容于50mL容量瓶中，分别配成浓度为200g/mL的标准储备溶液，置一18冰箱中保存，可使用12个月。4.12.氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素混和标准储备溶液：分别准确移取适量氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素标准储备溶液，用甲醇稀释配成浓度为1ug/L的混合标准储备溶液，置一18冰箱中保存，可使用6个月。4.13氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素混和标准使用溶液
5、：准确移取适量氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素混合标准储备溶液，用甲醇稀释配成浓度为0.1g/L的混合标准使用溶液，置4冰箱中保存，可使农业部958号公告一14一2007用3个月。4.14氘代氯霉素内标标准储备溶液：准确移取适量氘代氯霉素标准溶液(4.10)，用甲醇稀释配成浓度为1ug/mL的内标标准储备溶液，置-18冰箱中保存，可使用6个月。4.15氘代氯霉素内标标准使用溶液：准确移取适量氘代氯霉素内标标准储备溶液，用甲醇稀释配成浓度为0.1g/L的内标标准使用溶液，置4冰箱中保存，可使用3个月。5仪器与设备5.1气相色谱一质谱仪：配有化学源。5.2电子天平：感量0.0001g和0.01g各一台
6、。5.3离心机。5.4涡旋混合器。5.5超声波清洗器。5.6旋转蒸发器。5.7烘箱。5.8梨形瓶：50mL、100mL,细口。5.9离心管：50mL,具塞。5.10刻度离心管：5mL,具塞。5.11氮吹仪。5.12C18固相萃取柱，填料300mg。5.13固相萃取装置。5.14无水硫酸钠柱：砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸钠5g。5.15高速组织捣碎机：转速不低于20000r/min。6测定步骤6.1试样的制备鱼，去鳞，沿脊背取肌肉和皮；虾，去头、去壳、去附肢，取可食肌肉部分：贝类，去壳，取可食部分；蟹、甲鱼等，取可食肌肉部分。样品切为不大于0.5cm0.5cm0.5cm的小块后混，高速组织捣碎机(
7、5.15)充分匀浆，密封，标明标记。一18以下冷冻保存。6.2提取将试样解冻，称取试样5g(精确到0.01g),置于50mL具塞离心管中，加人氘代氯霉素内标标准使用溶液(4.15)200L,再加入乙酸乙酯20mL,涡旋混合1min,超声20min提取氯霉素、甲砜霉素和氟甲砜霉素，4000r/min离心5min,将乙酸乙酯层转移到100mL梨形瓶中。离心管中再加人乙酸乙酯15mL,涡旋混合均匀，超声波提取5min,4000r/min离心5min,合并乙酸乙酯提取液于100mL梨形瓶中。在梨形瓶中加入5mL4%NaCl溶液，于5055水浴中旋转蒸发至溶液体积小于5mL,蒸除乙酸乙酯。6.3脱脂向梨
8、形瓶中加人15mL正己烷和20mL4%氯化钠溶液，盖塞振荡混合1in,充分混合提取脂肪，转移到另一50mL离心管中，4000r/min离心2min,除去上层正己烷相。再加入l0mL正己烷，重复提取一遍，弃去正己烷相。水相中加入15mL乙酸乙酯，旋涡混合2min,4000r/min离心3min,吸取乙酸乙酯层，经过无水硫酸钠柱(5.14)脱水过滤于50mL梨形瓶中；再向水相中加入5L乙酸乙酯，重复上述操作；用5mL2农业部958号公告一14一2007乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱，合并提取液于50mL梨形瓶中，在45水浴中旋转蒸发至近干。加入2mL乙酸乙酯溶解提取物并转移于5mL具塞刻度离心管(5.1
9、0)中，用1mL乙酸乙酯洗涤梨形瓶，合并乙酸乙酯于刻度离心管中，于5055的砂浴中吹氮蒸发至近干，再用1L乙酸乙酯洗涤刻度离心管壁并吹干，待衍生化。6.4C1柱净化通常情况下，经6.3步骤净化的样品，离心管内应无明显残留物。但是，部分油脂含量高、不易净化的样品，离心管内可能存有明显残留物，可经C3柱进一步净化。给每个试祥准备一根Cs柱，依次用5mL甲醇和10mL水淋洗活化C1s柱，弃掉洗涤液。用5mL5%(V/V)的乙腈水溶液溶解6.3中的提取物，移入C18柱过柱，流速保持每秒一滴，用2mL水分两次洗涤梨形瓶并过柱；5mL水淋洗C柱，弃去全部淋洗液；微氮吹干或负压抽干Cs柱；用3mL乙腈分2次
10、洗脱Cg柱，合并洗脱液于5L具塞刻度离心管中。于5055的砂浴中吹氮蒸发至近干，再用1mL乙腈洗涤离心管壁并吹干，待衍生化。6.5衍生化在吹干的提取物中加入100L衍生化试剂(4.8)，盖塞并涡旋混合10s,在70烘箱中反应30min;取出冷却至室温，氮气吹干，准确加入0.5mL正己烷，涡旋混匀，供气相色谱一质谱分析。6.6基质混合标准工作溶液根据每种标准的灵敏度和仪器线性范围，移取一定量的混合标准使用溶液(4.13)加入5g空白试样中，以下按本方法6.2、6.3、6.4和6.5步骤操作。6.7测定6.7.1气相色谱一质谱测定条件色谱柱：DB-5ms石英毛细管柱，30m0.25mmX0.25m
11、,或性能相当者。载气：氢气，纯度99.999%，流速1.0mL/min。进样口温度：220。柱温：初始柱温50，保持1min,25/min升至280，保持5min。进样方式：无分流进样。进样量：1L。接口温度：250。离子源：负化学源。离子源温度：120。反应气：甲烷，纯度99.99%。反应气流量：35%。溶剂延迟：10min。测定方式：选择离子检测(SM0。监测离子：氘代氯霉素硅烷化衍生物m/381、383、471、473;氯霉素硅烷化衍生物m/376、378、466、468;甲砜霉素硅烷化衍生物m/z409、411、499、501;氟甲砜霉素硅烷化衍生物m/339、341、429、431.6.7.2定性测定分别注入1L适当浓度的氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素混合标准衍生化工作液及试样衍生化溶液于气相色谱一质谱仪中，在同一条件下进行分析，如试样检出色谱峰的保留时间与标准品相一致，并且在扣除背景后的试样质谱图中，所选择的特征离子均出现，而且所选择离子的相对丰度与浓度相近的标准品衍生物相应选择离子的相对丰度相一致，且偏差不超过表1规定的范围，则可判断试样中存在被测化合物。3