1、附件2食品中氯酸盐和高氯酸盐的测定BJS 2017061 范围本方法规定了食品中氯酸盐和高氯酸盐含量的液相色谱-串联质谱测定方法。本方法适用于包装饮用水、液体乳、大米、胡萝卜、哈密瓜、猪肉、鱼肉、茶叶、婴幼儿配方乳粉（不包括特殊医学用途的婴幼儿配方乳粉）中氯酸盐和高氯酸盐的测定。2 原理试样经提取、离心后，上清液经固相萃取柱净化，用液相色谱-串联质谱测定，内标法定量。3 试剂和材料3.1 试剂3.1.1 乙腈（CH3CN）：色谱纯。3.1.2 甲醇（CH3OH）：色谱纯。3.1.3 甲酸（HCOOH）：色谱纯。3.1.4 甲酸铵（HCOONH4）：液质联用级。3.1.5 超纯水（H2O）：电阻
2、率为18.2Mcm。注：以上试剂在使用前均应做本底测试。3.2 试剂配制3.2.1 含0.1%甲酸的水溶液：量取1.0mL甲酸（3.1.3）至1000mL容量瓶，用超纯水（3.1.5）稀释至刻度，混匀。3.2.2 20mmol/L甲酸铵溶液：称取0.63g甲酸铵（3.1.4），用超纯水（3.1.5）溶解并稀释至500mL，混匀。3.2.3 甲酸铵甲醇溶液：取100mL甲酸铵溶液（3.2.2），加入200mL甲醇（3.1.2），混匀。3.3 标准品3.3.1 氯酸钠标准品：采用具有证书的标准品或高纯试剂，纯度99%。中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量详见表1。3.3.2 高氯钠
3、盐标准品：采用具有证书的标准品或高纯试剂，纯度99%。中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量详见表1。表1氯酸盐和高氯酸盐的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量氯酸钠Sodiumchlorate7775-09-9NaClO3106.44高氯酸钠Sodiumperchlorate7601-89-0NaClO4122.453.4 同位素内标3.4.1 氯酸盐同位素内标：氯酸盐-18O3（200g/mL，以氯酸根-18O3离子计，北京振祥提供，EURL-SRMLotNo:024），4保存。3.4.2 高氯酸盐同位素内标：高氯酸
4、盐-18O4（100g/mL，以高氯酸根-18O4离子计，美国剑桥提供，CILOLM-7310-1.2），4保存。3.5 标准溶液的配制3.5.1 氯酸盐标准储备液（1mg/mL，以氯酸根计）：精密称取氯酸钠0.128g（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用超纯水（3.1.5）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg/mL标准储备液，4保存。3.5.2 高氯酸盐标准储备液（1mg/mL，以高氯酸根计）：精密称取高氯酸钠0.123g（精确至0.0001g），置于100mL容量瓶中，用超纯水（3.1.5）溶解并稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg/mL标准储备液，4保存。3.5.3 混
5、合标准中间液：分别准确量取0.2mL氯酸盐标准储备液（3.5.1）、0.1mL高氯酸盐标准储备液（3.5.2），置于同一100mL容量瓶中，用超纯水（3.1.5）稀释至刻度，摇匀，制成氯酸盐、高氯酸盐浓度分别为2.0g/mL、1.0g/mL的混合标准中间液，4保存。3.5.4 混合同位素内标液：分别准确量取75L氯酸盐同位素内标（3.4.1）、20L高氯酸盐同位素内标（3.4.2）置于同一10.0mL容量瓶中，用超纯水（3.1.5）稀释至刻度，摇匀，制成氯酸盐-18O3、高氯酸盐-18O4浓度分别为1500ng/mL、200ng/mL的混合同位素内标液，4保存。3.5.5 混合标准工作溶液：分
6、别准确量取混合标准中间液（3.5.3）0L、10L、25L、50L、75L、100L、250L、500L、750L、1000L，及混合同位素内标液（3.5.4）100L，用甲酸铵甲醇溶液（3.2.3）稀释并定容至10mL，作为混合标准工作溶液S0、S1S9。氯酸盐浓度依次为：0.00ng/mL、2.00ng/mL、5.00ng/mL、10.0ng/mL、15.0ng/mL、20.0ng/mL、50.0ng/mL、100ng/mL、150ng/mL、200ng/mL，高氯酸盐浓度依次为：0.00ng/mL、1.00ng/mL、2.50ng/mL、5.00ng/mL、7.50ng/mL、10.0n
7、g/mL、25.0ng/mL、50.0ng/mL、75.0ng/mL、100ng/mL，混合标准工作液中氯酸盐-18O3、高氯酸盐-18O4浓度分别为15.0ng/mL、2.0ng/mL，或依需要配制适当浓度的混合标准工作液。临用新制。4 仪器和设备4.1 液相色谱-串联质谱仪，配有电喷雾离子源（ESI源）。4.2 涡旋振荡器。4.3 组织捣碎机。4.4 均质器。4.5 离心机：转速10000r/min。4.6 电子天平：感量分别为0.0001g和0.001g。4.7 超声波恒温水浴振荡器。4.8 具塞离心管：50mL。4.9 PRiMEHLB固相萃取柱：3cc，150mm，或性能相当者。注：
8、4.8、4.9的耗材在使用前均应做本底测试。5 试样制备与保存5.1 包装饮用水充分混匀，直接取用。5.2 液体乳：充分摇匀，取适量有代表性的试样，均分成两份，作为试样和留样，分别装入洁净容器中，密封并标记，于4避光保存。5.3 猪肉、鱼肉：取适量有代表性的可食部分试样，切成小块，组织捣碎机捣碎，均分成两份，作为试样和留样，分别装入洁净容器中，密封并标记，于-18避光保存。5.4 胡萝卜、哈密瓜：取适量有代表性的试样，去皮去籽，切成小块，组织捣碎机捣碎，均分成两份，作为试样和留样，分别装入洁净容器中，密封并标记，于-18避光保存。5.5 婴儿配方乳粉：充分混匀，取适量有代表性的试样，均分成两份
9、，作为试样和留样，分别装入洁净容器中，密封并标记，于常温避光保存。5.6 大米、茶叶：取适量有代表性的试样，粉碎机粉碎后过40目筛，均分成两份，作为试样和留样，分别装入洁净容器中，密封并标记，于常温避光保存。6 测定步骤6.1 提取6.1.1 包装饮用水：准确移取1.0mL试样，加入10.0L混合同位素内标液（3.5.4），涡旋震荡10s，经0.22m再生纤维素滤膜过滤后，取续滤液供液相色谱-串联质谱仪测定。6.1.2 胡萝卜、哈密瓜、茶叶：准确称取1g（精确至0.001g）试样置于50mL具塞离心管（4.8）中，加入200L混合同位素内标液（3.5.4），准确加入7.0mL超纯水（3.1.5
10、），涡旋振荡5min，再准确加入13.0mL甲醇（3.1.2），混匀，振荡超声提取30min，10000r/min常温离心10min，取上清液待净化。6.1.3 大米：准确称取2g（精确至0.001g）试样置于50mL具塞离心管（4.8）中，加入200L混合同位素内标液（3.5.4），准确加入7.0mL超纯水（3.1.5），涡旋振荡5min，再准确加入13.0mL甲醇（3.1.2），混匀，振荡超声提取30min，10000r/min常温离心10min，取上清液待净化。6.1.4 婴儿配方乳粉：准确称取2g（精确至0.001g）试样置于50mL具塞离心管（4.8）中，加入150L混合同位素内标液
11、（3.5.4），准确加入5.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1），迅速混匀，置于45水浴超声20min，涡旋振荡5min，再准确加入10.0mL甲醇（3.1.2），混匀，10000r/min常温离心10min，取上清液待净化。6.1.5 液体乳：准确称取5g（精确至0.001g）试样置于50mL具塞离心管（4.8）中，加入150L混合同位素内标液（3.5.4），加入1.0mL0.1%甲酸水溶液（3.2.1），9.0mL甲醇（3.1.2），涡旋振荡5min，10000r/min常温离心10min，取上清液待净化。6.1.6 猪肉、鱼肉：准确称取2g（精确至0.001g）试样置于50mL具塞离心
12、管（4.8）中，加入200L混合同位素内标液（3.5.4），准确加入7.0mL超纯水（3.1.5），13.0mL甲醇（3.1.2），10000r/min均质30s，10000r/min常温离心10min，取上清液待净化。6.2 净化吸取约3.0mL上述上清液（6.1.26.1.6），按附录A中的图A.1方式过固相萃取柱（4.9）及0.22m再生纤维素滤膜，弃去约1mL流出液，收集续滤液，供液相色谱-串联质谱仪测定。6.3 色谱测定6.3.1 液相色谱-串联质谱检测6.3.1.1 参考液相色谱条件a)色谱柱：AcclaimTRINITYP1复合离子交换柱（50mm2.1mm，3m；100mm2.
13、1mm，3m），或性能相当者。b)流动相：A为乙腈，B为20mmol/L甲酸铵溶液。梯度洗脱程序见表2。c)样品系列运行完后，按表3的色谱柱清洗梯度程序对色谱柱进行清洗。d)流速：0.5mL/min。e)柱温：35。f)进样量：3L。表2梯度洗脱程序50mm2.1mm，3m规格色谱柱100mm2.1mm，3m规格色谱柱时间(min)流动相A(%)流动相B(%)时间(min)流动相A(%)流动相B(%)Initial3565Initial70300.535650.270304.065353.090105.090107.090107.090108.070308.0356510.07030表3色谱柱
14、清洗梯度程序50mm2.1mm，3m规格色谱柱100mm2.1mm，3m规格色谱柱时间(min)流速(mL/min)流动相A(%)流动相B(%)时间(min)流速(mL/min)流动相A(%)流动相B(%)Initial0.53565Initial0.5703010.00.15901015.00.159010100.00.159010150.00.159010注：色谱柱按该程序清洗后保存，有助于延长色谱柱寿命。6.3.1.2 参考质谱条件a)离子源：电喷雾离子源（ESI源）。b)检测方式：多反应监测（MRM）。c)扫描方式：负离子模式扫描。d)毛细管电压：200V。e)锥孔电压：60V。f)脱溶剂温度：500。g)脱溶剂气流量：1000L/h。h)锥孔气流量：150L/h。i)采用多反应监测（MRM）模式采集数据，质谱参数见表4。表4氯酸盐和高氯酸盐定性、定量离子对和质谱分析参数化合物母离子（m/z）子离子（m/z）锥孔电压（V）碰撞能量（eV）氯酸根83.067.0*601585.069.06015高氯酸根99.083.0*6018101.085.06018氯酸根内标89.071.0*6016高氯酸根内标107.089.0*6018*定量离子对。注：6.3.