1、ICS 67.220.10 X 66 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 18402013 食品调料、汤料中罂粟壳的鉴定方法 2013-02-04 发布 2013-03-04 实施安徽省质量技术监督局 发 布 DB34/T 18402013 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。本标准由铜陵市质量技术监督局提出。本标准由安徽省质量技术监督局归口。本标准起草单位:铜陵市食品药品检验所。本标准主要起草人:朱月辉、杨惠、管玉云、张振华、陈志勇、管大平。DB34/T 18402013 1 食品调料、汤料中罂粟壳的鉴定方法 1 范围 本标准规定了薄层色谱法、液相色谱法
2、鉴定食品调料、汤料中罂粟壳的方法。本标准适用于食品调料、汤料中罂粟壳成分-吗啡、罂粟碱、可待因的定性检测。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 结构式 吗啡（C17H19NO3）罂粟碱（C20H21NO4）可待因（C18H21NO3）4 检验方法 4.1 薄层色谱法 4.1.1 原理 试样中的吗啡、罂粟碱、可待因等成分经萃取、离心等处理，除去干扰物质，浓缩、点样、展开后，显色，将样品生成的荧光斑点和斑点
3、与对照品斑点比较。4.1.2 试剂 所用试剂和水，在没有注明其他要求时，均指分析纯试剂和 GB/T 6682 规定的三级水；所用试剂如下：a)盐酸。b)乙醚。c)石油醚：沸程 6090。DB34/T 18402013 2 d)氨水。e)无水硫酸钠。f)20三氯乙酸溶液：取三氯乙酸 20 g，用水溶解，定容至 100 ml。g)5硅钨酸溶液：取硅钨酸 5 g，用水溶解，定容至 100 ml。h)稀碘化铋钾显色剂：取碱式硝酸铋 0.85 g，加冰醋酸 10 ml 与水 40 ml 溶解后，即得。临用前取 5 ml 加碘化钾溶液（取 4 g，用水溶解，定容至 10 ml）5ml，再加冰醋酸 20 m
4、l，用水稀释至 100 ml。i)亚硝酸钠乙醇显色剂：取亚硝酸钠 5g，加 60乙醇使溶解，定容至 1000 ml。j)对照品溶液：取吗啡、盐酸罂粟碱和磷酸可待因对照品各 25 mg，用甲醇溶解，定容至 25 ml，摇匀。k)展开剂：甲苯-丙酮-乙醇-浓氨试液（20:20:3:1）。4.1.3 仪器 4.1.3.1 硅胶 G 薄层板。4.1.3.2 展开槽：10 cm10 cm。4.1.3.3 酸度计。4.1.3.4 电动离心机。4.1.3.5 可调电炉：带石棉板。4.1.3.6 电吹风。4.1.3.7 紫外仪。4.1.3.8 电子天平。4.1.4 分析步骤 4.1.4.1 试样处理 取样品
5、500 ml（固体或半固体样品则取 500 g，再加水 500 ml，浸提）加热使油层溶解，用纱布过滤后，用盐酸溶液调节 pH 至 2，移至分液漏斗中。向分液漏斗中加入石油醚洗涤，弃去石油醚层，水液加热浓缩至约 50 ml，放置冷却至室温，加 20三氯乙酸溶液 20 ml，摇匀，离心（3500 转/分钟，10 分钟），取上清液，加 5硅钨酸溶液 10 ml，摇匀，搅拌 5 分钟，离心（4000 转/分钟，20 分钟），弃去上清液，加浓氨水置 50水浴中至沉淀完全溶解,溶液转入分液漏斗中，用乙醚提取 3 次，每次 30 ml，分取乙醚层，用无水硫酸钠脱水，过滤，再用乙醚洗涤无水硫酸钠一次，合并乙
6、醚液，挥干，残渣加甲醇 5 ml 溶解，摇匀，作为试样溶液。4.1.4.2 点样 离薄层板底端约 1 cm 处标记。吸取 3.1.2 项下 j）对照品溶液 5 l、3.1.4.1 项下的试样溶液20 l，点于同一硅胶 G 薄层板上。4.1.4.3 展开 在展开槽中预先倒入 10 ml3.1.2 项下 k），将已经点样的薄层板放入槽中，当溶剂前沿距离原点约 8 cm 时取出，晾干。4.1.4.4 显色 DB34/T 18402013 3 将展开后的薄层板置紫外光灯（365 nm）下检视；再依次喷以稀碘化铋钾试液和亚硝酸钠乙醇试液热风吹干后，日光下检视。4.1.5 分析结果判断 在与对照品色谱相应
7、的位置上，若未显相同颜色的荧光斑点和斑点，则判为未添加罂粟壳。若显相同颜色的荧光斑点和斑点，则判为添加罂粟壳，并参照 3.2 液相色谱法进行验证。4.1.6 检出限 检出限：吗啡 4.2 mg/kg、盐酸罂粟碱 0.21 mg/kg、磷酸可待因 26 mg/kg。4.2 液相色谱法 4.2.1 原理 试样中吗啡、罂粟碱、可待因经萃取、离心等处理，除去干扰物质，浓缩、过滤、进样，取一定量注入高效液相色谱仪，经分离用二极管阵列检测器、检测波长 220 nm、238 nm 检测，与对照品溶液比较。4.2.2 试剂 除同 3.1.2 中试剂外，还需以下试剂：a)乙酸铵（分析纯）。b)甲醇（色谱纯）。c
8、)甲醇-乙酸铵溶液（0.02 mol/L）(50:50)。d)对照溶液：分别取吗啡、盐酸罂粟碱和磷酸可待因对照品 25 mg，置 50 ml 量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，取 2 ml 溶液置 10 ml 量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度。e)试样溶液：取 3.1.4.2 项下试样溶液，经 0.45 m 微孔滤膜过滤后。4.2.3 仪器 4.2.3.1 可调电炉：带石棉板。4.2.3.2 超声波清洗器。4.2.3.3 酸度计。4.2.3.4 电动离心机。4.2.3.5 高效液相色谱仪：带二极管阵列检测器。4.2.4 液相色谱测定条件 4.2.4.1 不锈钢柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。4
9、.2.4.2 检测器：二极管阵列检测器，检测波长：220 nm、238 nm。4.2.4.3 流动相：甲醇-乙酸铵溶液（0.02 mol/L）(48:52)，经 0.45 m 微孔滤膜过滤，超声脱气。4.2.4.4 流速：1.0 ml/min。4.2.5 测定 分别取对照品溶液及试样溶液各 10 l，注入高效液相色谱仪进行分离、检测，记录色谱图。4.2.6 分析结果的判定 DB34/T 18402013 4 若样品中主峰的保留时间与对照品峰保留时间一致，则判定为添加罂粟壳；否则，则判定为未添加罂粟壳。4.2.7 检出限 检出限：吗啡 0.1 mg/kg、盐酸罂粟碱 0.1 mg/kg、磷酸可待因 0.1 mg/kg。DB34/T 18402013 5 A A 附 录 A（资料性附录）对照品混合溶液的液相色谱图 A.1 对照品混合溶液的液相色谱图 对照品混合溶液的液相色谱图见图 A.1。图A.1 对照品混合溶液的液相色谱图 _