1、I C S6 5 0 2 0 0B1 6囝圄中华人民共和国国家标准G B T2 8 0 9 2-2 01 1落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法D e t e c t i o na n di d e n t i f i c a t i o no fB o f r y o s p 矗口e r i ol a r i c i n a(K S a w a d a)Y Z S h o n g2 0 11-1 2-3 0 发布2 0 1 2 0 6 0 1 实施丰瞀粥鬻瓣警麟瞥星发布中国国家标准化管理委员会促1 9刚昌G B T2 8 0 9 2-2 0 11本标准按照G B T1 12 0 0 9 给出的规则起草
2、。本标准由全国植物检疫标准化技术委员会(S A C T C2 7 1)提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人：吴翠萍、李彬、粟寒、高渊、陆军、吴晶、刘伟、高振兴、安榆林。1 范围落叶松枯梢病菌检疫鉴定方法G B T2 8 0 9 2-2 0 11本标准规定了落叶松枯梢病菌B o t r y o s p h a e r i al a r i c i n a(K S a w a d a)Y z S h o n g1 9 8 7 的检测和鉴定方法。本标准适用于对落叶松苗木、接穗以及带小枝梢的原木等样品携带落叶松枯梢病菌的检
3、测和鉴定。2 落叶松枯梢病菌基本信息中文名：落叶松枯梢病菌。学名：B o t r y o s p h a e r i al a r i c i n a(K S a w a d a)Y Z S h o n g1 9 8 7。异名：P h y s a l o s p o r al a r i c i n aK S a w a d a，G u i g n a r d i al a r i c i n a(K S a w a d a)W Y a m a m o t o&K I t o。病害英文名：s h o o tb l i g h to fl a r c h，t w i gd i e b a c k
4、o fl a r c h。采用A i n s w o r t h(1 9 7 3)真菌分类系统，病原菌为子囊菌亚门A s c o m y c o t i n a，腔菌纲L o c u l o a s c o m y c e t e s，格孢腔菌目P l e o s p o r a l e s，葡萄座腔菌科B o t r y o s p h a e r i a c e a e，葡萄座腔菌属B o t r y o s p h a e r i a。无性阶段为半知菌亚门D e u t e r o m y c o t l n a，腔孢纲C o e l o m y c e t e s，球壳孢目s p h
5、a e r o p s i d a l e s，球壳孢科s p h a e r o p s i d a c e a e，大茎点霉属M a c r o p h o m a。落叶松枯梢病菌的其他信息参见附录A。3 方法原理根据病原菌危害的症状特点(参见附录B)采集样品进行检测，观察病原菌产生的子实体的显微形态特征，并结合病原菌的地理分布和寄主范围等有关信息进行结果判断。4 仪器和用具4，1 仪器体视显微镜、普通光学显微镜(具显微拍摄和测量功能)、光照培养箱、高压灭菌器、干热灭菌器、冰箱等。4 2 用具手持放大镜、试剂瓶、纱布、脱脂棉、镊子、剪刀、培养皿、修枝剪、吸管、酒精灯、打孔器(直径5r a
6、m)、瓷盘、解剖刀、酒精灯、解剖针、载玻片、盖玻片、微量移液器、标本盒、海绵、胶带、标签等。5 试剂石蜡，7 0、9 5 酒精，二氧化硅干燥剂。G B T2 8 0 9 2-2 01 16 检测6 1 样品采集根据下列症状等进行样品采集：苗木、接穗上的新梢枯死，并且枯死的梢端呈弯曲状；在病组织上有固着的白色滴状物树脂块；干枯的枝干部为紫褐色或灰褐色；在枯死的枝干、松针上有突出的枯梢病原菌子实体。原木上如果带有的小枝梢，则应仔细观察小枝梢上有无子实体，若无，则可排除怀疑带有枯梢病原菌。6 2 样品制备6 2 1 子实体的制片用解剖针挑取样品上的子实体少许，置于载玻片上加盖玻片压碎或由发病部位直接
7、切片制成水玻片，在解剖镜或显微镜下观察子实体的形态并确认是否成熟。如果成熟，则观察典型形态特征并测量大小；如果不成熟则需进一步培养。6 2 2 不成熟子实体的培养对子实体不成熟的部位，先用无菌水浸泡2d 3d，然后浸泡在3 5 和1 0 的无菌水中进行交替变温处理，每次5r a i n，重复1 次，再浸在无菌水中3 0r a i n，最后取出置室温条件下保湿培养中7d-1 2d，诱导产生成熟子实体并制片镜检。7 鉴定7 1有性阶段子实体形态特征子囊座为壳状、瓶状或梨形，黑褐色，单生、2 个5 个群生或丛生在病枝表皮下，成熟后仅孔口外露，大小为(1 7 0“m 5 0 0p m)(1 3 0p
8、m 3 0 0p m)。子囊棍棒状，双壁，无色，顶端圆，下有短柄，平行排列于子囊腔基部，大小为(1 1 5p m 1 4 9p m)(2 0p m 4 5p m)。假侧丝很多，线形，无色，半永久存在，直径3p m。子囊孢子8 个，双行排列，椭圆形至纺锤形，单胞，无色，大小为(2 2 5p m 4 0p m)(6 3p m 1 5 5”m)。参见附录c。7 2 无性阶段子实体形态特征分生孢子器群生于顶梢残留的叶背和顶梢小枝周围的表皮下，并使表皮突起，近球形或扁球形，黑色，大小为(1 2 0 L r n 2 4 9U r n)X(1 4 8p m 2 1 3u m)。分生孢子梗短，不分枝，圆柱形，
9、(5p m 7u m)(2 5p m 3 2p m)。分生孢子椭圆形至纺锤形，单胞，无色，大小为(2 4 l m 3 0p o)(6p m 9p m)。常见1 2 个油球。参见附录c。性孢子器球形至扁球形，单个或几个丛生于病枝表皮下，大小为(1 1 5p m 2 1 4p m)(1 0 9p n 3 1 9 0p m)。性孢子梗细长，无色，2 个3 个分隔，大小为(1 2p m 1 6p m)(3p m 5U r n)。性孢子短杆状或椭圆状，无色，大小为(3”m 6 m)(1p m 2p m)参见附录c。8 结果判定2如有性阶段、无性阶段的形态特征符合第7 章鉴定特征的描述，即可判定为落叶松枯
10、梢病菌。9 标本和样品保存G B T2 8 0 9 2-2 01 1发现落叶松枯梢病菌的样品，需制作成标本在室温条件下进行干燥保存，或将样品置于一2 0 冷冻保存，保存至少6 个月，以备复检、谈判和仲裁。保存期满后进行灭活处理。G B T2 8 0 9 2 2 01 1A 1 地理分布附录A(资料性附录)落叶松枯梢病菌其他信息国外：日本、朝鲜、韩国、俄罗斯(远东)。国内：黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古、山东、陕西、甘肃、青海、宁夏。A 2 寄主落叶松属(L a r i xs p p)：华北落叶松(Lp r i n“p i 5 r“声p r e c m i i)、长白落叶松(L o l g e n
11、s i s r c h a ng p a i e n s i s)、朝鲜落叶松(Lo l g e n s i sv a r k o r e a n a)、海林落叶松(Lo l g e n s i sv a r h e i l i n g e n s i s)、日本落叶松(Ll e p t o g e i s)、黄花落叶松(L o l g e n s i s)、欧洲落叶松(L d e c i d u a)、美国西部落叶松(L o c c i d e n t a l i s)、美加落叶松(Ll a r i c i n a)等。A 3 发病规律该病从幼苗、幼树到成林的当年新梢都能发病，但幼树发病重。
12、7 月上旬开始发病显症状，7 月中、下旬发病最明显。一般都先从主梢发病，然后由树冠上部向下蔓延，加重病情。病后新梢渐渐褪色，顶部弯曲下垂呈勾状，而顶梢与弯曲部分变紫褐色或灰褐色，从弯瞌部分逐渐向下脱叶、干枯，茎收缩变细，仅在顶部残留一簇叶子，枯萎呈紫灰色。次年春天，由侧芽生小枝代替原来主梢，连年发病、为害严重的，树冠出现扫帚状丛枝，高度生长停止，形成小老树或全株枯死(为害症状参见附录B)。在枝梢受害部位，多数有松脂溢出，凝成块状。8 月末至翌年6 月，在枯梢上特别是弯曲部分的枝皮及凹陷处，生长着梭形小黑点，初埋生，至翌年6 月突破寄主，形成病原菌子囊座。发病1 0 余天后，在顶梢残留叶上或弯曲
13、部位可见圆形的散生小黑点，形成病原菌的分子孢子器。有时在病枝上可见圆形黑色突起，即性孢子器。4附录B(资料性附录)落叶松桔梢病拄状图B18 年生日本落叶松枯梢病症状(图片来源TK o b a y 船h i，J a p 蛆)G B T2 8 0 9 2-2 016附录C(资料性附录)落叶松枯梢病原形态特征A 子囊；B 侧丝；c 子囊孢子；D 分生孢子器；E 分生孢子。注1：图片仿K a z u o I t o注2：图片比例尺为1 0“m臼留图C 1落叶松枯梢病的病原特征叭U“i i n i 州i n i”吖U 伊犷队蝴形i。舢M i 拈8 一八H 疗”H i 卅娃i 键i i i缈i 0 叶i l