1、中华人民共和国行业标准叶 绿 素 的 测 定分 光 光 度 法总则主题内容本标准规定了用分光光度法测定水体中的叶绿素适用范围本标准适用于河流 湖泊 水库或池塘等水体中叶绿素的测定干扰及消除脱镁叶绿素能够干扰叶绿素的测定 当含有脱镁叶绿素时叶绿素的测定值偏高因此在测定叶绿素的时候 还要测定脱镁叶绿素脱镁叶绿素对叶绿素的干扰 可通过测定叶绿素酸化前后产生的吸收峰之比 对表观叶绿素的浓度作脱镁叶绿素的校正原理将一定量的试样用微孔滤膜过滤 收集植物性浮游生物 用的丙酮溶液提取将提取液离心分离后 测定的吸光度 计算叶绿素的浓度仪器分光光度计比色池和医用离心机离心管带塞刻度管研钵 直径约过滤装置 过滤器
2、微孔滤膜 孔径直径真空泵 吸气泵或蠕动泵常用实验设备试剂碳酸镁悬浮液称取细粉末碳酸镁悬浮于蒸馏水中每次使用时 要充分摇匀丙酮溶液在丙酮中加蒸馏水盐酸溶液量取盐酸溶于水中 冷却并稀释至水利部批准实施样品的采集与保存样品应按浮游植物定量采样方法 采集在玻璃或聚乙烯瓶子里河流 湖泊 水库取池塘取采样后 样品应放在荫凉处 避免日光直射 最好立即对水样进行分析处理如需放置水样 则应避光冷藏保存而且每升水样需加碳酸镁悬浮液 以防止酸化引起色素溶解步骤浓缩 在一定量的试样中添加碳酸镁悬浮液 充分搅匀后 用直径的微孔滤膜吸滤过滤器内无水分后 还要继续抽吸几分钟如果要延时提取 可把载有浓缩样品的滤膜放在干燥器里
3、冷冻避光贮存提取 将载有浓缩样品的滤膜放入研钵中 加入丙酮溶液至滤纸浸湿的程度 把滤膜研碎 再少量地加的丙酮溶液 把滤膜完全研碎 然后用丙酮溶液将已磨碎的滤膜和丙酮溶液洗入带刻度的带塞离心管中 使离心管内提取液的总体积不超过盖上管塞 置于的暗处浸泡离心 将离心管放入离心机中 以速度离心分离将上清液移入标定过的具塞刻度管中 加少量丙酮溶液于原提取液的离心管中 再次悬浮沉淀物并离心 合并上清液此操作重复次 直至沉淀不含色素为止 最后将上清液定容至测定 取上清液于或的比色池中 以丙酮溶液为对照溶液 读取波长和的吸光度选择比色池的光程长度或稀释度 使其光密度大于小于结果表示从各波长的吸光度中减去波长的
4、吸光度 作为已校正过的吸光度按下式计算叶绿素的浓度式中叶绿素的浓度叶绿素的浓度叶绿素的浓度提取液的定容体积过滤水样的体积比色池的光程长度已校正过的提取液吸光度注意事项使用的玻璃器皿和比色皿均应清洁 干燥 无酸 不要用酸浸泡或洗涤处的吸光度读数用来校正混浊度由于在的提取液的吸光度对丙酮与水之比的变化非常敏感 因此对于丙酮提取液的配制要严格遵守份丙酮比份水 体积比 的配比使用斜头离心机时 容易产生二次悬浮沉淀物为了减少这一困难 使用外旋式离心机头 在离心之前瞬间加入过量的碳酸镁在研钵中用丙酮溶液提取叶绿素时 如果研磨操作进行不充分 就不能完全提取出来也可以用外筒玻璃代替研钵 研棒用特氟隆制的匀化器因为叶绿素提取液对光敏感 故提取操作等要尽量在微弱的光照下进行吸收池事先要用丙酮溶液进行池校正的吸光度是检查的丙酮溶液浊度的用吸收池的吸光度在以上时 应将溶液再一次充分地离心分离 然后再测定其吸光度
