1、SN/T1812-2006封住三角烧瓶瓶口，将三角瓶放在往复式振荡器上振荡5min,立即将洗涤液注入离心管内，以1000r/min离心5min,倾去上清液，再加入剩余洗涤悬浮液，离心，直至所有洗涤悬浮液离心完毕，留沉淀物6.2.2定容在沉淀物中加入席尔氏浮载剂使之悬浮，视沉淀物多少定容至1mL3mL6.2.3镜检用微量加样器吸取沉淀物悬浮液至载片上，加盖玻片制片。制片用沉淀物悬浮液的量以加盖片后悬浮液不外溢为宜。在显微镜下镜检，检查是否有表面呈网状的腥黑粉病菌冬孢子。每份试验样品的离心沉淀物至少检查5张玻片，每片按视野依次全部检查。6.3菌检查镜检发现有孢壁纹饰网眼状的腥黑粉病菌冬孢子，挑菌瘿
2、。将取走试验样品和保存样品的剩余样品例入灭菌白瓷盘内，在充足光线下仔细检查有无菌瘿，受腥黑粉病菌侵染的种子被病菌粉状冬孢子代替面成为菌瘿，菌瘿较健康种子粗短、饱满，外被一层薄且易碎寄主果皮，暗灰色、褐色或黑褐色，冬孢子堆深褐色或黑褐色，禾草腥黑粉菌菌瘿和黑麦草黑粉菌菌瘿可直接用肉眼检查，剪股颖腥黑粉菌菌瘿可在体视显微镜下检查。6.4冬孢子形态测量发现腥黑粉病菌菌瘿，挑取少许冬孢子加适量席尔氏液制片镜检。如冬孢子表面网状，进行冬孢子形态测量。随机选30个成熟冬孢子通过油镜(100)在显示器屏幕上，或用目镜测微尺进行相关数据的测量禾草腥黑粉菌测量冬孢子平均直径，平均网脊高度值和冬孢子一直径内平均网
3、目数，剪股颖腥黑粉菌和黑麦草腥黑粉菌测量冬孢子平均直径和平均网脊高度值。6.4.1平均直径测量每个成熟冬孢子按长短轴方向测量直径大小，两者平均值为该冬孢子直径，并计算出30个冬孢子的平均直径。6.4.2平均网目数目测定每个成熟冬孢子按长短轴方向计数一直径上网目数目，两者平均值为冬孢子网目数，并计算出30个冬孢子平均网目数。6.4.3平均网脊高度值每个成熟冬孢子按上下左右随机测量4个网脊高度，4个网脊高度的平均值即为该冬孢子的网脊高度，并计算出30个冬孢子的平均网脊高度值。6.5冬孢子萌发试验禾草腥黑粉菌和黑麦草腥黑粉菌需作冬孢子萌发试验，剪股颖腥黑粉菌不作冬孢子萌发试验，6.5.1培养在Eppendorf离心管中加入适量0.25%的次氯酸钠溶液，挑取一定数量的冬孢子放入，用涡旋振荡器混合，消毒50s后，以3000r/min离心1min,立即用微量加样器吸去上清液，混合与离心处理时间不超过3min,加无菌水离心清洗两次，将冬孢子沉淀物转至3%水琼脂平板上培养，每一培养温度重复3个培养皿。6.5.2培养条件6.5.2.1禾草腥黑粉菌培养条件将涂有冬孢子的平板分别置于5，10和17连续光照条件下培养。6.5.2.2黑麦草腥黑粉菌培养条件将涂有黑麦草腥黑粉菌冬孢子的平板分别置于20和5连续光照条件下培养。2
