1、书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛 犖犜 危险品生殖毒性试验方法犜 犲 狊 狋犿 犲 狋 犺 狅 犱狅 犳 狉 犲 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 犻 狅 狀狋 狅 狓 犻 犮 犻 狋 狔犳 狅 狉犱 犪 狀 犵 犲 狉 狅 狌 狊犵 狅 狅 犱 狊 发布 实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发 布版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售书书书前言本标准修改采用联合国经济合作与发展组织（）化学品测试方法 一代繁殖毒性试验（）、两代繁殖毒性试验（）。本标准与 化学品测试方法 、相比，存在以下差异：对 化学品测试方法 、进行了编辑性修改；增加了前言部分。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验
2、检疫总局提出。本标准由国家认证认可监督管理委员会归口。本标准负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局。本标准参加起草单位：中化化工标准化研究所、江南大学、天津市检验检疫科学技术研究院。本标准主要起草人：李宁涛、张园、周磊、于智睿、熊中强、赵黎华。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售危险品生殖毒性试验方法范围本标准规定了危险化学品生殖毒性试验的试验方法和试验结果。本标准适用于对危险化学品进行生殖毒性的测定。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版
3、均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。实验动物配合饲料通用质量标准 实验动物环境及设施术语和定义下列术语和定义适用于本标准。生殖 狉 犲 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 犻 狅 狀人和哺乳动物繁衍种族的复杂的生理过程，包括两性生殖细胞或称配子的发生、配子的释放、性周期和性行为、卵细胞受精、受精卵的卵裂、胚泡形成、着床、胚胎形成、胚胎发育、器官形成、胎儿发育、分娩和哺乳、出生后发育直至性成熟并繁殖下一代的过程。生殖毒性 狉 犲 狆 狉 狅 犱 狌 犮 狋 犻 狅 狀狋 狅 狓 犻 犮 犻 狋 狔化学毒物对
4、生殖系统产生的不良效应，包括对父母双方和对胚胎、新生儿的损害。试验方法 试验器材和试剂 器材灌胃针、注射器及针头、外科手术剪、手术刀、无齿镊、电子天平、动物体重秤。试剂蒸馏水、生理盐水或二甲基亚砜等溶剂。试验动物选用大鼠，每一剂量组至少 只雌鼠、只雄鼠。试验动物饲养条件应符合 和 有关规定。剂量和分组将试验动物随机至少分为两个剂量组和一个对照物。最高剂量应使亲代动物出现明显的毒性反应，但不引起动物死亡；低剂量应不引起亲代及其子代动物的任何毒性反应。如果受试样品的毒性较低，体重的剂量仍未对繁殖过程有任何毒副作用，则可以采用限量试验，即试验不需要设其他剂量组。若高剂量的预试验观察到明显的母体毒性作
5、用，但对生育无影响，也可以采用限量试验。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售 染毒方法 一代繁殖试验 雄性动物：在交配前 开始染毒，覆盖从精原细胞到精子的整个发育过程；雌性动物：至少要在交配前 染毒，染毒期要覆盖卵子发育期、怀孕期和哺乳期。二代繁殖试验按照表的程序进行染毒。表二代繁殖毒性试验染毒程序时间出生 离乳 开始染毒（连续染毒 ）交配 出生 离乳染毒结束开始染毒（连续染毒 ）交配 出生 离乳 染毒结束，病理解剖注：为亲代，为子代，为子代。交配方法及妊娠检查雄性和雌性动物按或的比例进行交配。雌鼠应始终与同剂量组的同一只，但不是同窝所生的雄鼠合笼直至受孕，合笼最长时间可为周。在交配过
6、程中，每天早晨应对雌鼠进行检查，查看有无阴栓或阴道中是否有精子。将检查到精子或阴栓的当天计为雌鼠妊娠的第天。每窝新生幼鼠数量的调整代出生后的第天，应将仔鼠数尽量随机调整到每窝雌和雄。若得不到雌和雄时可作不均等的调整（如雄雌）。每窝的幼仔数小于只时，可不进行调整。子代按同样的方法进行调整。试验结果 观察记录检查记录活仔数和死仔数、性别比和产生畸形活仔的雌性动物数。体重参与繁殖的动物（亲代和子代）应在染毒的第天进行称量，以后每周称量体重一次。数据应逐只进行记录。产仔后，每窝仔鼠需要称量体重时，母鼠的食物摄入量也应同时计算。以每窝为单位，对仔鼠于出生的当天上午、第天、第天、第 天和第 天进行称量。大
7、体观察每日至少对动物进行一次仔细的观察。记录有无行为改变、难产或滞产以及所有的毒性反应（包括死亡）。在交配前和交配期，应计算每周的食物摄入量，在妊娠中可考虑逐日记录。交配结束时，采集亲代雄鼠附睾的精子，显微镜下计数 个精子，观察其活动性、形状及数量。妊娠观察妊娠周期应该从怀孕的第天开始计算。生产下的仔鼠应尽早分辨性别，记录每窝的出生数、活仔犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售数以及幼仔外观有无异常和畸形。同时记录母鼠或仔鼠在生理上和行为上的异常表现。大体解剖死亡和到期处死的亲代和成年的子代动物都应解剖进行大体检查，肉眼观察有无组织器官形态上的改变，特别是生殖器官。死亡或濒临死亡的仔鼠也
8、应接受检查，查看是否有外观或器官形态的缺陷。病理组织学检查保留上述剖检的所有亲代和子代动物的卵巢、子宫、子宫颈、阴道、睾丸、附睾、精囊、前列腺、脑下垂体和靶器官标本。先对最高剂量组和对照组的动物标本以及剖检中发现异常的标本进行组织病理学检查。如最高剂量组没有发现有意义的病变，其他剂量组的标本可不必再进行病理检查。反之，若最高剂量组发现有意义的病理改变，则其他剂量组相关的标本也应作进一步的检查。结果计算 生育力指数按式（）计算：受孕率妊娠雌鼠数交配雌鼠数 （）受孕指数按式（）计算：正常妊娠率正常分娩的雌鼠数妊娠雌鼠数 （）存活力指数按式（）计算：出生存活率出生后存活幼仔数出生当时存活幼仔数 （）其他指标 交配指数（交配占发情周期的百分率）；雌性生育力指数（妊娠雌鼠数占接触育龄雄鼠的雌鼠总数的百分率）；雌性生殖率指数（使雌鼠受孕的雄鼠数占与育龄未孕雌鼠接触的雄鼠总数的百分率）；生后、的存活指数。数据处理数据可以用表格进行统计，表中应显示每组的试验动物数、交配的雄性动物数、受孕的雌性动物数、各种毒性反应及其出现动物的百分数。结果评价逐一比较剂量组动物与对照组动物繁殖指数是否有显著性差异，以评定受试样品有无生殖毒性，同时还可根据统计学差异出现在哪个指标上（如体重、观察指标、大体解剖和病理组织学检查结果等），进一步评价生殖毒性的损害作用特点。犛 犖犜 版权所有 禁止翻制、电子传阅、发售