1、8 1 5il l中华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准N Y/T 4 0 6-2 0 0 0脱毒草毒种苗病毒检测技术规程R u l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s-f r e e s e e d l i n g s t r a w b e r r i e s2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 发布2 0 0 0 一 1 2 一 0 1 实施中华人民共和国农业部发 布N Y/T 4 0 6-2 0 0 0前言 为了 有效地实施对脱毒草毒种苗质量 检验和管理，规范脱毒种苗市场，促进脱毒技术的推广，实现脱毒草毒种
2、苗病毒检测的规范化、标准化，特制定本规程。本规程在参照国内外草毒病毒检测技术最新研究进展的基础上，结合当 前国内生产实际，力求达到快速、准确、可操作性强的检测要求。检测对象主要选择生产上发生 分布范围广、危害性大的病毒。检测方法主要采用双抗体夹心酶联免疫吸附检测和指示植物检测。本规程内 容包括脱毒草毒种苗病毒检测的 适用范围、检测对象、抽样方法、检测方法租质量要求。本标准的附录 A是标准的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准主要起草单位:农业部植物 脱毒种苗质量监督检验测试中心(济南)、山东省植物保护总站。本标准主要起草人:华崇钊、商明清、孙作文、李明立、徐鲁、杨勤民。中 华人民共和
3、国农业行业标准N Y/T 4 0 6-2 0 0 0脱毒草毒种苗病毒检测技术规程Ru l e s f o r v i r u s d e t e c t i o n o f v i r u s-f r e e s e e d l in g s t r a wb e r r i e s范围本标准 规定了脱毒草毒种苗的 病毒检测方法和操作规程。本标准适用于脱毒草萄母本株、组培苗及脱毒草墓种苗的病毒检测。2 引用标准 下列标准所 包含的条文，通 过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。N Y/T 4
4、 0 1-2 0 0。脱毒马铃薯种薯(苗)病毒检测技术规程3 定义 本标准采用下列定义。3.1 脱毒草毒母本株 由 脱毒组培苗直接繁育并且不带本规程规定的检测对象、用于提供草幕甸甸茎繁殖苗的母株。3.2 脱毒草萄种苗 由 脱毒草每母本株繁育并符合本规程规定合格标准的种苗。3.3 病毒病株允许率 脱毒草墓母本株及种苗繁殖田中病毒病株的允许比率。检测对 象草萄轻黄边病毒(S t r a w b e r r y m i l d y e l l o w e d g e-a s s o c i a t e d v i r u s,S M Y E V);草萄镶脉病毒(S t r a w b e r r y
5、 v e i n b a n d i n g v i r u s,S V B V);草毒斑驳病毒(S t r a w b e r r y m o t t l e v i r u s,S M o V);草毒皱缩病毒(S t r a w b e r r y c r i n k l e v i r u s,S C r V);抽样5.1 脱毒草毒母本株抽样 每株均需检测。繁育季节从待检母本株选取幼嫩叶片作为检测样品。每年检测 3 次以上。5.2 组培苗的抽样5.2.1 脱毒核心材料:每株均须检测。5.2.2 扩繁组培苗:每扩繁一次随机抽取 1 0 0 2 写检测。5.3 出圃种苗抽样5.3.，采用分层
6、取样或随机取样等方法抽取样品，抽样数量见表 1,中华人民共和国农业部 2 0 0 0 一 0 9 一 2 2 批准2 0 0 0 一1 2 一0 1实施N Y/T 4 0 6-2 0 0 0表 1 草毒种苗抽样数量标准表种苗总数量，株抽样百分率，%抽样最低数量，株(1 0 0 0 06-1 01 0 0 1 0 0 0 03-5注:不足抽样最低数量的全部作为混合样品。3.2 将第一次抽取的样品混合后进行二次抽样，随机抽取 1 0%的混合样品检测。6 检测方法6.1 双抗体夹心酶联免疫吸附检测法 用于检测草 毒轻黄边病毒、草幕 镶脉病毒。检测方法按N Y/T 4 0 1-2 0 0 0中附录A的
7、方法执行。6.2 指示植物检测法 用于检测草毒斑驳病毒、草毒皱缩病毒、草毒镶脉病毒和草墓轻黄边病毒，检测草毒病毒的指示植物及症状见表 2,检测方法见附录A。表 2 检测草毒病毒的指示植物及症状病 毒 种 类指示植物指示植物症状草幕斑驳病毒E M C UC 5叶片斑驳草幕皱缩病毒U C 5UC l o叶片皱缩草毒镶脉病毒U C6呈镶脉症状U C5叶片反转草毒轻黄边病毒U C4叶片枯死，整株死亡U C5叶片边缘逐渐变成浅黄7 质t要求 只要酶联免疫检测或指示植物检测呈阳性反应的均为带毒株。脱毒草幕母本株:病毒病株允许率是。脱毒草毒种苗:病毒病株允许率簇5。%。NY/T 4 0 6-2 0 0 0
8、附录A (标准的附录)指示植物检测法A 1 萦育指示植物 采用欧洲草幕(F r a g a r i a v e s c a)及兰毒(F r a g a r i a v i s g i n i a n a)中 的易感品种(见表2)，在防虫条件下将指示植物和待检样品分别栽植在花盆中，不断去掉指示植物的甸旬茎，使叶柄加粗，当叶柄直径达到2 m m左右时嫁接。A 2 燎接 小叶 嫁接法:以待检样品成熟叶片(只留中间小叶下半部)为接穗，将指 示植物剪去中间小叶 作为 砧木.劈接后置于2 0-2 5 C、光照充足的条件下。每个待检样品同时用两种指示植物 进行鉴定，每个待检样品各嫁接 3 株指示植物，每株指示植物嫁接 2-3 个待检小叶，并设阴性对照和阳性对照。A 3 管理 将整株盆栽指示植物罩上塑料袋保湿，每隔2 -3天换一次气，1 0 天左右去掉塑料袋，并开始分期分批去掉指示植物的 成熟未嫁接叶片，以促进幼叶的发生。连续观察症状3 0 -5 0 天，记录指示植物症状。A 4 阳 性判断 根据指示植物症状，确定病毒有无及种类。在所有嫁接的指示植物中只要有一株表现典型 症状，该样品即为阳性。