1、动物医学进展,():P r o g r e s s i nV e t e r i n a r yM e d i c i n e砂生槐子生物碱对L P S诱导的小鼠急性肺炎的保护作用研究收稿日期:基金项目:甘肃农业大学伏羲英才项目(G a u f x Y );甘肃农业大学青年导师基金资助项目(G AU Q D F C );甘肃省高校产业支撑项目(C );财政部和农业农村部:国家现代农业产业技术体系(C A R S )作者简介:徐誉彰(),男,甘肃兰州人,硕士研究生,主要从事中兽医学与中兽药研发.通讯作者徐誉彰,武振帅,纪鹏,魏彦明,张文飞,武凡琳,张晓松,任建明,李琛琛,华永丽,姚万玲,袁子文(
2、甘肃农业大学动物医学院,甘肃兰州 )摘要:探究砂生槐子生物碱对L P S诱导的小鼠急性肺炎的保护作用.将 只S P F雄性昆明小鼠随机分为对照组(C o n t r o l组)、脂多糖组(L P S组)、地塞米松组(D XM S组,m g/k g)、砂生槐子生物碱低剂量组(S S HD组,m g/k g)、砂生槐子生物碱中剂量组(S S H Z组,m g/k g)、砂生槐子生物碱高剂量组(S S HG组,m g/k g),每组只,给药d后,通过滴鼻L P S(m g/k g)建立小鼠急性肺炎模型.结果表明,S S HD组、S S H Z组、S S HG组小鼠WB C、L YM、G R A显著降
3、低(P),HG B、R B C、P L T显著升高(P);S S HD组、S S H Z组小鼠脾系数显著降低(P),S S HD组、S S H Z组、S S HG组小鼠肺系数、胸腺系数显著降低(P);S S HD组、S S H Z组、S S HG组小鼠血清中T N F 、I L 含量显著降低(P),C R P、I L 含量降低;S S HD组、S S H Z组与S S HG组小鼠肺组织中丙二醛(MD A)显著降低(P),超氧化物歧化酶(S O D)显著升高(P);各给药组小鼠肺脏的病理损伤均有不同程度改善,其中S S HG组保护效果最好,S S HD组保护效果次之;另外,S S HD组、S S
4、 H Z组与S S HG组小鼠肺组织S F T P C染色升高,N F BP 与T L R 染色降低.说明砂生槐子生物碱对L P S诱导的小鼠急性肺炎具有较好的保护作用.关键词:砂生槐子生物碱;急性肺炎;脂多糖;保护作用中图分类号:S 文献标识码:A文章编号:()在兽医临床上,畜禽肺炎为常发病,此类疾病发病急且病死率高,严重危害畜禽养殖业经济效益,其中细菌性感染(巴氏杆菌、肺炎克雷伯氏菌等)诱发的急性肺炎(a c u t ep n e u m o n i a)占比较高.脂多糖(l i p o p o l y s a c c h a r i d e,L P S)是革兰氏阴性菌细胞壁中的主要成分,
5、也称内毒素,常用于小鼠、大鼠急性肺炎模型的建立.西藏道地中药材砂生槐(S o p h o r am o o r c r o f t i a n a)又称“狼牙刺”、“刺柴”等,是西藏特有多年生沙生植物,常以种子入药,具有较高的抑菌、抗炎、抗寄生虫等药用价值.生物碱是其主要活性成分之一 ,砂生槐子生物碱主要包括氧化苦参碱、苦参碱、槐果碱、氧化槐果碱、槐定碱、金雀花碱等.氧化苦参碱和苦参碱具有抗肺炎作用 ,而砂生槐子含有大量苦参碱类生物碱,其药用价值仍有待开发.本研究通过急性肺炎动物模型,探索砂生槐子生物碱预防小鼠急性肺炎的作用效果,以期为砂生槐子生物碱作为临床畜禽肺炎防治药物在临床中能够应用于肺
6、炎提供理论依据.材料与方法材料实验动物 只S P F级雄性昆明小鼠,体重 g g,购自兰州兽医研究所实验动物中心,合格证编号为S C X K(甘),适应性饲养d,自由饮食.动物实验获得甘肃农业大学伦理委员会批准,编号为G S AU E t h VMC .药材砂生槐子采自西藏高寒地带,由甘肃农业大学魏彦明教授鉴定.砂生槐子生物碱按课题组前期优化方法提取.药 物 及 试 剂地 塞 米 松 片(国 药 准 字H ),广 东 华 南 药 业 集 团 有 限 公 司 产 品;L P S(货号:L ),北京索莱宝科技有限公司产品;T N F 试剂盒(货号:m l ),上海酶联生物科技有限公司产品;I L
7、试剂盒(货号:m l ),上海酶联生物科技有限公司产品;I L 试剂盒(货号:m l ),上海酶联生物科技有限公司产品;S F T P CP o l y c l o n a lA n t i b o d y(货 号:A P),T L R M o n o c l o n a lA n t i b o d y(货 号:I g),N F BP M o n o c l o n a lA n t i b o d y(货 号:I g),武汉三鹰生物技术有限公司产品.主要仪器设备血细胞分析仪,瑞典B o u l eM e d i c a lA B公司产品;S p e c t r a M a xP l u s
8、 酶标仪,美谷分子仪器有限公司产品;D Z WS多管架自动平衡离心机,长沙湘仪离心机仪器有限公司产品;RM 切片机,德国L e i c a公司产品;K D BM组织包埋机,上海艾牧生物科技有限公司产品;O l y m p u sD P 显微照相系统,日本O l y m p u s公司产品.方法给药方案与模型制备将 只小鼠随机分成对照组,L P S组,D XM S组,S S HD组,S S H Z组,S S HG组,每组只,共组.每日灌胃前称小鼠体重及计算采食量.按照如下剂量给 药,D XM S组(m g/k g),S S HD组(m g/k g),S S H Z组(m g/k g),S S H
9、G组(m g/k g),连续给药d,次/d,C o n t r o l组与L P S组给予等量蒸馏水.第天除C o n t r o l组外,其余 各组小鼠 滴 鼻L P S(m g/k g)造模.造模前 h小鼠禁食不禁水,C o n t r o l组小鼠滴鼻等量生理盐水.样本收集与脏器系数测定造模后h,采血.后取肝、脾、肺、肾和胸腺,称重,并计算脏器系数,脏器系数器官重量(g)/体重(g).部分肺用 m L/L多聚甲醛固定用于HE、M a s s o n染色和免疫组化试验,部分肺冷冻保存于 冰箱.血常规检测采用血细胞分析仪检测小鼠外周血中白细胞(WB C)、淋巴细胞(L YM)、单核细胞(MO
10、N)、中性粒细胞(G R A)、血红蛋白(HG B)、平均红细胞血红蛋白(MCH)、红细胞(R B C)、血小板(P L T)含量.炎性细胞因子和氧化应激指标检测按照试剂盒说明书分别检测血清中C R P、T N F 、I L 和I L 的含量及肺组织中MD A、S O D的含量.肺脏病理组织学观察肺组织经脱水、石蜡包埋与切片,采用HE、M a s s o n染色和免疫组织化学染色处理,拍照观察各组肺组织.统 计 学 分 析数 据 分 析 采 用G r a d p a dP r i s m、S P S S 进行分析.计量资料以“平均数标准差(xS D)”表示,多组间差异比较采用单因素方差分析和多
11、重比较,以P 表示差异显著.结果日增重、日采食量变化各组小鼠外观体征、行为表现均正常,采食量与体质量变化无显著差异(图).血常规变化与C o n t r o l组 相 比,L P S组 的WB C、G R A、MCH显著升高(P),HG B、R B C、P L T显著降低(P ),L YM、MON无 显 著 差 异(P).与L P S组相比,D XM S组、S S HD组、S S H Z组、S S HG组的WB C、L YM、G R A显著降低(P);各 给 药 组MON无 显 著 差 异(P );D XM S组、S S HD组、S S H Z组、S S HG组的HG B显著升高(P);各给药
12、组的MON无显著差异(P);S S HD组、S S H Z组、S S HG组的R B C、P L T显著升高(P)(表).图砂生槐子生物碱对小鼠日增重及日采食量的影响F i g E f f e c t so fS o p h o r am o o r c r o f t i a n aa l k a l o i d so nd a i l yw e i g h tg a i na n dd a i l yf e e d i n t a k eo fm i c e脏器系数变化与C o n t o l组相比,L P S组肝、脾、肺、胸腺系数显著升高(P );肾 系 数 无 显 著 差 异(P);与
13、L P S组相比,虽然各组肝系数无显著差异(P),但L P S组肝系数最大,各给药组肝系数均小于L P S组;S S HD组、S S H Z组脾系数显著降低动物医学进展 年第 卷第期(总第 期)(P),其他给药组脾系数无显著差异(P);D XM S组、S S HD组、S S H Z组和S S HG组肺系数、胸腺系数显著降低(P);各组肾系数均无显著差异(P)(表).血清中C R P及细胞因子变化与C o n t r o l组相比,L P S组的C R P、T N F 、I L 显 著 升 高(P ),I L 无 显 著 差 异(P);与L P S组相比,D XM S组、S S HD组、S S
14、H Z组和S S HG组 的C R P无 显 著 差 异(P );D XM S组、S S HD组、S S H Z组和S S HG组的T N F 显著降低(P);D XM S组、S S HD组、S S H Z组和S S HG组 的I L 无 显 著 差 异(P );S S HD组、S S H Z组和S S HG组的I L 显著降低(P)(表).表各组小鼠血常规数据(xS D)T a b l eT h er e s u l t so fb l o o dr o u t i n e t e s to fm i c e i ne a c hg r o u p(xS D)分组G r o u pWB C(
15、/L)L YM(/L)MON(/L)G RA(/L)HG B(/L)MCH(/L)R B C(/L)P L T(/L)C o n t r o l L P S a a a a a aD XM S b b b b S S HD b b b b b bS S H Z b b b b b bS S HG b b b b b b注:“a”与对照组相比,差异显著(P);“b”与L P S组相比,差异显著(P).N o t e:a S i g n i f i c a n td i f f e r e n c ec o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p(P);
16、b S i g n i f i c a n td i f f e r e n c ec o m p a r e dw i t hL P Sg r o u p(P)表各组小鼠脏器系数(xS D)T a b l eT h er e s u l t so fo r g a nc o e f f i c i e n t s i ne a c hg r o u po fm i c e(xS D)分组G r o u p肝系数L i v e r脾系数S p l e e n肺系数L u n g肾系数K i d n e y胸腺系数T h y m u sC o n t r o l L P S a a a aD XM S b bS S HD b b bS S H Z b b bS S HG b b注:“a”与对照组相比,差异显著(P);“b”与L P S组相比,差异显著(P).N o t e:a S i g n i f i c a n td i f f e r e n c ec o m p a r e dw i t hc o n t r o l g r o u p(P);b S i g n i f i c