1、 91 工艺技术 食品工业 2023 年第44卷第 4 期2018,81:161-170.20 刘思含.抑制米饭回生技术研究D.沈阳:沈阳农业大学,2017:1-6.21 NIU L Y,WU L Y,XIAO J H.Inhibition of gelatinized rice starch retrogradation by rice bran protein hydrolysatesJ.Carbohydrate Polymers,2017,175:311-319.22 WU P,LI C F,BAI Y M,et al.A starch molecular basis for aging
2、-induced changes in pasting and textural properties of waxy riceJ.Food Chemistry,2019,284(30):270-278.23 ZHANG C,CHEN S,REN X,et al.Molecular structure and physicochemical properties of starches from rice with different amylose contents resulting from modification of Os GBSSI activityJ.Journal of Ag
3、ricultural&Food Chemistry,2017,65(10):2222-2232.24 GU F,GONG B,GILBERT R G,et al.Relations between changes in starch molecular fine structure and in thermal properties during rice grain storageJ.Food Chemistry,2019,295:484-492.山楂叶多糖提取工艺优化及体外抗氧化和抑菌活性研究李杰，田思雨，谭怡然，赵嘉，周铭懿*1.锦州医科大学食品与健康学院（锦州 121001）；2.辽宁
4、省肉类加工与质量安全控制专业技术创新中心 锦州医科大学（锦州 121001）摘要以山楂叶为原料,采用传统热水提取法提取山楂叶多糖,在单因素试验基础上应用响应面法优化提取的最佳工艺,并对提取的山楂叶多糖的抗氧化性及其抑菌性进行研究。结果表明,山楂叶多糖的最佳提取工艺条件:以提取两次为前提,料液比143 g/mL、提取时间2.2 h、提取温度93,山楂叶多糖的平均提取率为8.916%0.005%。山楂叶多糖的抗氧化性结果表明,多糖质量浓度达到5.0 mg/mL时,ABTS+自由基的清除率为46.24%0.26%,DPPH自由基的清除率可达到70.18%0.04%。抑菌试验结果表明,在最优的提取工艺
5、条件下,山楂叶多糖对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌都起到抑制作用。关键词山楂叶;多糖;抗氧化;抑菌Optimization of Extraction Process of Polysaccharide from Hawthorn Leaves and Study on Its Antioxidant and Antibacterial Activities in VitroLI Jie,TIAN Siyu,TAN Yiran,ZHAO Jia,ZHOU Mingyi*1.College of Food and Health,Jinzhou Medical University(Jin
6、zhou 121000);2.Liaoning Province Meat Processing and Quality Safety Control Technical Innovation Center Jinzhou Medical University(Jinzhou 121000)Abstract Hawthorn leaves were used as raw materials to extract polysaccharide from hawthorn leaves by traditional hot water extraction method.Response sur
7、face method was used to optimize the extraction process based on single factor test,and the antioxidant activity and antibacterial activity of polysaccharide were studied.The results showed that the optimal extraction conditions of hawthorn leaf polysaccharide were as follows:under the conditions of
8、 two extraction times,the ratio of solid to liquid was 143 g/mL,extraction time was 2.2 h,extraction temperature was 93,and the average extraction rate of hawthorn leaf polysaccharide was 8.916%0.005%.The results showed that when the concentration of polysaccharide reached 5.0 mg/mL,the scavenging r
9、ate of ABTS+free radical was 46.24%0.26%,and that of DPPH free radical was 70.18%0.04%.The results showed that polysaccharide from hawthorn leaves had inhibitory effects on Staphylococcus aureus,Escherichia coli and Bacillus subtilis under optimal extraction conditions.Keywords hawthorn leaf;polysac
10、charide;anti-oxidation;bacteriostatic山楂叶为蔷薇科植物山楂（Crataegus pinnatifida Bge.）的干燥叶，主产于我国华北、东北等地。山楂叶中富含各种生物活性物质，包括黄酮类、氨基酸、多糖、维生素、微量元素1。植物多糖的来源广泛、高效且无毒副作用2。由于植物多糖被证实具有诸多生理功能，如免疫调节、抗肿瘤、抗菌抗病毒、抗氧化、降血糖、降血脂等作用3，使得对其研究日益受到关注。目前对山楂叶中活性物质研究主要集中在黄酮类化合物提取、功能特性等方面，对多糖类物质的研究较少。目前对多糖的提取多采用热水提取、超声辅助提取4、酶辅助提取及微波辅助提取5-
11、6等方法。采用传食品工业 2023 年第44卷第 4 期 92 工艺技术统热水提取法对山楂叶多糖进行提取。采用单因素试验对山楂叶多糖的提取条件进行优化，对提取次数、料液比、提取时间和提取温度进行了考察，利用响应面法进行优化分析。同时通过测定DPPH自由基和ABTS+自由基的清除率，探讨山楂叶多糖的抗氧化能力。此外，还对山楂叶多糖的抑菌活性进行研究，以期为山楂叶作为天然抗氧化功能产品的进一步开发利用提供理论依据和参考。1材料与方法1.1材料与仪器山楂叶（广西桂林天堂漓江有限公司）；葡萄糖标准品（江西佰草源生物科技有限公司）；石油醚、无水乙醇、苯酚、浓硫酸、抗坏血酸（天津市富宇精细化工有限公司）；
12、DPPH试剂、ABTS+试剂（上海研启生物科技有限公司）；所有试剂均为分析纯。RE-2 000 B旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；DF-101 S集热式恒温加热磁力搅拌器（韩国DAIHAN公司）；UV-1600紫外可见分光光计（上海精密科学仪器有限公司）；LC-20 a高效液相色谱仪（岛津仪器苏州有限公司）；SHZ-D予华牌循环水真空泵（陕西太康生物科技有限公司）；MIKRO220 R高速低温离心机（德安徽中科中佳科学仪器有限公司）。1.2试验方法1.2.1山楂叶多糖提取1.2.1.1山楂叶的预处理将鲜山楂叶在60 干燥24 h，烘干后用粉碎机粉碎，然后将粉碎的山楂叶粉末过0.250 mm筛
13、，并将过筛后的山楂叶粉末收集备用。称取100 g处理好的山楂叶粉与2 L石油醚混合，室温搅拌处理12 h，并重复3次。抽滤，将石油醚除去，即得除脂的山楂叶粉末，收集备用。1.2.1.2提取工艺参考龚频等7的方法稍作修改。准确称取4 g脱脂后的山楂叶粉，在一定的料液比、提取次数、提取时间和提取温度下提取粗多糖。然后离心（6 000 r/min，10 min）收集上清液，负压浓缩后，向提取液中加入4倍体积的无水乙醇，在4 过夜沉淀，离心后收集沉淀，并冷冻干燥即为山楂叶粗多糖。1.2.1.3标准曲线的绘制参考Lin等8的苯酚-硫酸法。以葡萄糖作为标准品，来绘制标准曲线。精确称取10 mg葡萄糖加蒸馏
14、水，定容至10 mL容量瓶中，配制成 1 mg/mL葡萄糖标准溶液，备用。准确吸取0，0.1，0.3，0.5，0.7和0.9 mL葡萄糖标准对照溶液，分别定容至10 mL容量瓶中。取各稀释液1 mL于试管中，依次添加1 mL 5%的苯酚标准溶液、5 mL浓硫酸，充分混合后静置30 min冷却至室温后，用蒸馏水作为空白对照，在490 nm波长处测吸光度，以葡萄糖质量浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。其标准曲线回归方程为y=0.003 87x+0.006 75，R2=0.998。1.2.1.4多糖含量的测定用1.1.2.3小节中的方法测定吸光度。并计算山楂叶粗多糖的得率，山楂叶多糖得率按式
15、（1）计算。多糖得率=100%（1）CVNM式中：C为葡萄糖标准溶液质量浓度，mg/mL；N为稀释倍数；V为样品溶液体积，mL，M为山楂叶粉质量，mg。1.2.2多糖提取工艺优化1.2.2.1单因素试验以粗多糖得率为指标，分析料液比、提取次数、提取时间和提取温度四个因素对粗多糖得率的影响。固定各因素水平：料液比140 g/mL，提取次数2次，提取时间2 h，提取温度80。改变各因素水平参数：提取次数为1，2，3，4和5次时，分析提取次数对得率的影响；料液比为120，130，140，150和160 g/mL时，分析料液比对得率的影响；提取时间为1，1.5，2，2.5和3 h时，分析提取时间对得率
16、的影响；提取温度为60，70，80，90和100 时，分析提取温度对得率的影响。根据单因素结果进行正交试验，从而确定粗多糖的最佳提取工艺参数。1.2.2.2响应面试验根据单因素试验的结果，对提取料液比、提取时间和提取温度3个因素分别取3个水平进行响应面试验，优化山楂叶多糖提取工艺。响应面试验的三因素三水平选取见表1。表1响应面试验因素与水平水平因素A料液比/(gmL-1)B提取时间/hC提取温度/-11 301.58001 402.09011 502.51001.2.3体外抗氧化性测定1.2.3.1DPPH自由基清除能力的测定参考张婉君等9测定方式并进行修改。分别取不同质量浓度梯度（0.5，1，2，3，4和5 mg/mL）的多糖溶液与抗坏血酸于不同试管中，加入2.0 mL DPPH 溶液，再加0.5 mL蒸馏水摇匀室温避光静置30 min，在波长517 nm下分别测定吸光度。按式（2）计算DPPH的清除率。W=1-100%（2）A1-A2A0mc式中：A0为空白溶液吸光度；A1为多糖或抗坏血酸溶*通信作者；基金项目：2022年辽宁省大学生创新创业训练项目编号：157 93 工艺技术 食