1、甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4三种血清标志物联合检测对肝细胞肝癌的诊断价值研究杨丽萍梁勤杨建忠马国珍方岳甘肃省中医院，甘肃 兰州 730050【摘要】目的：分析肝细胞肝癌患者血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3（GPC3）、热休克蛋白 70（Hsp70）及甲胎蛋白（AFP）单独或联合检测在肝细胞肝癌诊断中的临床应用价值。方法：选取 2020 年 1 月至 2021 年 8 月在我院肝病科就诊的 113 例肝细胞肝癌患者与165 例慢性乙型肝炎患者为研究对象，并纳入同期在院进行体检的 188 例健康人群为对照组。以酶
2、联免疫吸附法测定研究对象血清GPC3 和 Hsp70 水平；使用罗氏 cobas 8000 电化学发光系统测定血清 AFP 水平。结果：肝细胞肝癌与慢性乙型肝炎患者血清 GPC3、Hsp70 及 AFP 水平均高于健康对照组（P0.05）。三种血清标志物联合检测时诊断肝细胞肝癌的约登指数最大，ROC 曲线下面积为0.896（0.7830.963），其诊断价值最高。结论：组合血清 GPC3、Hsp70 及 AFP 检测能提高肝细胞肝癌的诊断准确性，弥补单项标志物检测的不足，提升诊断价值。【关键词】磷脂酰肌醇蛋白聚糖 3；热休克蛋白 70；肝细胞肝癌；ROC 曲线中图分类号：R735.7文献标志码
3、：A文章编号：1004-2725（2023）04-0289-04Study on the diagnostic value of three serum markers combined for hepatocellular carcinoma Yang Liping，Liang Qin，Yang Jianzhong，Ma Guozhen，Fang Yue.Gansu Provincial Hospital of TCM，Lanzhou 730050，ChinaCorresponding author：Fang Yue，E-mail：【Abstract】Objective：To explore
4、 the value of combined detection of glypican3（GPC3），heat-shock protein 70（Hsp70），and alpha-fetoprotein（AFP）in the diagnosis of hepatocellular carcinoma.Methods：A total of 278 hepatocellular carcinoma patients were selected as thestudy subjects from January 2020 to July 2021，and 188 healthy subjects
5、during the same period were selected as the control group.The serumlevels of alpha-fetoprotein were determined by Roche cobas 8000 analysis system.The serum levels of GPC3 and Hsp70 were determined by enzyme-linked immunosorbent assay.ROC curve was used to analyze the diagnostic efficacy of GPC3 and
6、 Hsp70.Results：The serum levels ofGPC3，Hsp70 and AFP in patients with hepatocellular carcinoma and chronic hepatitis B were significantly higher than healthy subjects（P0.05），说明三组研究对象基线资料均衡可比。见表 1。2.2三组间血清标志物水平比较采用方差分析分别比较血清 GPC3、Hsp70、AFP 及 AST/ALT 比值在各组间的差异情况。结果显示，研究对象这四种血清标志物水平在肝细胞肝癌组、慢性乙肝组与健康对照组间
7、的差异具有统计学意义（P0.05）。进一步两两比较后结果显示，肝细胞肝癌组与慢性乙肝组的血清 GPC3、Hsp70、AFP 及 AST/ALT 比值均高于健康对照组（P0.05），其中肝细胞肝癌组中的 GPC3、Hsp70、AFP 及 AST/ALT比值最高。见表 2。2.3GPC3、Hsp70 及 AFP 单独或联合检测对 HCC 的诊断价值分析检测血清单一指标诊断 HCC 时，Hsp70290甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期Gansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4图 1GPC3、Hsp70 及 AFP 联合检测诊断 HCC 的 ROC 曲线图表
8、 3GPC3、Hsp70 与 AFP 对 HCC 的诊断价值分析检测指标灵敏度（%）特异度（%）诊断符合率（%）约登指数AUC（95%CI）PAFP72.2681.5273.610.5380.812（0.7670.844）0.001GPC384.2065.1568.800.4940.695（0.6120.769）0.001Hsp7082.9573.0376.500.5600.715（0.6010.752）0.001GPC3+Hsp7083.7572.5080.000.5630.785（0.7100.854）0.001GPC3+Hsp70+AFP86.8487.3185.000.7420.896
9、（0.7830.963）0.001注：与健康对照组比较aP0.05表 2三组间血清标志物水平比较血清标志物HCC 组（n=113）慢性乙肝组（n=165）健康对照组（n=188）FPAST/ALT1.860.85a1.190.56a0.860.3289.9160.001AFP（ng/mL）247.48119.13a55.1531.04a11.234.40549.0130.001GPC3（ng/mL）1.790.89a1.010.67a0.880.4573.1020.001Hsp70（ng/mL）6.141.89a3.611.28a0.980.49626.1640.001的诊断符合率最高（76.
10、50%），其次为 AFP（73.61%）。进一步联合诊断分析显示，当 GPC3、Hsp70 及 AFP 检测结果均诊断为 HCC 时才能判定阳性结果（串联试验）的灵敏度、特异度、诊断符合率、约登指数最大，分别为86.84%、87.31%、85.00%、0.742，提示三种血清标志物串联试验时，对 HCC 的诊断价值最高。见表 3。2.4ROC 曲线下面积比较分别绘制 GPC3、Hsp70及 AFP 单独或联合检测诊断 HCC 的 ROC 曲线，结果显示三种血清标志物联合检测诊断 HCC 的曲线下面积最大（AUC=0.896），高于各指标单独或联合检测的曲线下面积。见表 3、图 1。进一步假设检
11、验结果显示，与GPC3 曲线下面积相比（AUC=0.695），Z=7.708，P0.001；与 Hsp70 曲线下面积相比（AUC=0.715），Z=5.782，P0.001；与 GPC3+Hsp70 曲线下面积相比（AUC=0.785），Z=2.741，P=0.003，差异均具有统计学意义，说明三种血清标志物联合检测的诊断效能更高。3讨论HCC 是一种常见的消化系统肿瘤，其全球发病率和死亡率均较高，作为乙型肝炎病毒（hepatitis B，HBV）感染大国，我国 HCC 的发病率在所有恶性肿瘤中排第五2。由于 HCC 发病隐匿，临床上多数患者被确诊时已进入晚期，错过最佳治疗时期，导致 HCC
12、 患者病死率高、生存率低、远期预后较差11。因此，早发现、早诊断与早期干预 HCC 成为降低肝癌疾病负担以及提高患者生存质量的关键。AFP 是目前我国最常用于诊断肝癌的肿瘤标志物，但目前的研究表明，AFP 诊断 HCC的灵敏度较低，且对早期肝癌的诊断效果并不理想12，故寻找一种能早期诊断 HCC 的肿瘤标志物是目前临床亟待解决的问题。GPC 是一种与硫酸乙酰肝素具有相似结构的蛋白多糖家族，GPC 由核心蛋白、硫酸乙酰肝素链及糖基化磷脂酰肌醇三部分组成，分子量约为 6070kD，其羧基末端常被硫酸肝素侧链修饰13。GPC 家族共有 6 名成员（GPC1GPC6），在胚胎发育过程中均高度表达，其中
13、 GPC3 广泛表达于胚胎的各种细胞表面14。与胚胎期相比，成人 GPC 的表达模式变化很大15：GPC1、GPC4和 GPC6 广泛表达于各种组织，GPC2 不再表达，GPC3仅在卵巢中表达，GPC5 仅在大脑中表达。近年来，GPC3 作为 HCC 的一种潜在诊断与治疗靶点被广泛研究。现有的研究表明，GPC3 表达水平在绝大多数早期HCC 患者中显著升高，但在正常人群或肝脏良性肿瘤患者中不表达16，认为 GPC3 参与 HCC 发生、发展中的转移、侵袭等多个过程，其可能原因是 GPC3 蛋白通过刺激 Wnt 信号通路与巨噬细胞募集调控癌细胞的291甘肃医药 2023 年 42 卷第 4 期G
14、ansu Medical Journal，2023，Vol.42，No.4增殖与生长17，说明 GPC3 可以作为早期诊断 HCC 的一种潜在生物标志物。Hsp70 是热休克蛋白家族中最具特征的一种分子伴侣，在应激状态下大量产生，参与体内炎症反应、免疫应答等许多重要过程，在多种恶性肿瘤患者中 Hsp70表达均明显升高，且与肿瘤分期、肿瘤大小、侵犯范围等密切相关18。研究通过比较结节型肝癌及其相应非癌肝组织中的成分表达谱，结果发现 Hsp70 在早期肝癌成分中表达量最丰富19。国内学者通过免疫组化研究20发现，Hsp70 可用来区分肝活检标本中的早期肝癌与发育不良结节，提示 Hsp70 在高分化
15、小肝癌与不典型结节间的鉴别诊断中具有很高的临床应用价值。另一项研究发现21，Hsp70 不但可以促进 HCC 的发生与发展，而且在 HBV 感染时能促进癌细胞生长，说明Hsp70 是一种能反映 HCC 疾病状态与严重程度的潜在生物标志物。综上所述，血清 GPC3 和 Hsp70 均与 HCC 的增殖、分化、转移、侵袭等过程密切相关，特别是针对 AFP 诊断效果不理想（AFP 阴性）的早期 HCC 患者，GPC3 仍然能够检测到阳性结果16。同时 Hsp70 可用来区分肝活检标本中高分化小肝癌与不典型结节20，说明血清GPC3 与 Hsp70 的检测灵敏度较高，均可用于 HCC 的早期筛查。本研
16、究结果也证实，联合检测血清GPC3、Hsp70 及 AFP 能明显提升 HCC 的诊断效能，这对HCC的早期诊断意义重大，值得临床推广应用。参考文献 1Wu L，Chen L.The trends and efficacy of operation in the treatment ofhepatocellular carcinoma J.Transl Cancer Res，2022，11（1）：148-159.2Bray F，Ferlay J，Soerjomataram I，et al.Global cancer statistics 2018：GLOBOCAN estimates of incidence and mortality worldwide for 36cancers in 185 countries J.CA Cancer J Clin，2018，68（6）：394-424.3Yang J D，Hainaut P，Gores G J，et al.A global view of hepatocellularcarcinoma：trends，risk，preventio