1、中出血量及术后机体氧化应激反应的影响J 肿瘤基础与临床，2017;30(6):523-5.2杨庚，李昱，贺亚峰.miNA-19a 对结肠癌 LoVo 细胞生物学特性影响的机制研究 J 国际检验医学杂志，2018;39(5):530-3.3郑俊俊，毛玉娣，汪朝靓，等.结肠癌组织中 miNA 表达谱的变化 J 安徽医科大学学报，2019;54(3):348-53.4孙垭娉，张俊峰.miNA-223 在心血管疾病中的研究进展 J 心脏杂志，2019;31(1):95-9.5Yang F，Xu Y，Liu C，et al NF-B/mi-223-3p/AID1A axis is in-volved i
2、n Helicobacter pylori CagA-induced gastric carcinogenesis andprogression J Cell Death Dis，2018;9(1):12.6邱嘉华.microNA-21、microNA-135b 和 microNA-141 在结肠癌组织中的表达及相关性J 国际检验医学杂志，2017;38(17):2424-5.7徐俊，陈旭.结肠癌辅助化疗的研究进展 J 医学综述，2017;23(20):4039-44.8Banerjee A，Pathak S，Subramanium VD，et al Strategies for target
3、eddrug delivery in treatment of colon cancer:current trends and futureperspectives J Drug Discovery Today，2017;22(8):1224-32.9杜飞，董亚萍，朴成钢.结肠癌靶向治疗的研究进展 J 生命的化学，2018;38(2):259-66.10程钧.miNA 对结肠癌调控机制的研究进展J 西部医学，2018;30(1):154-6.11李伦，兴成娟，丛玲，等.mi-223-3p 靶向上皮细胞转化序列 2基因调控胃癌细胞周期和凋亡的相关性研究 J 世界华人消化杂志，2018;586(2
4、):14-22.12罗吉，罗燕，李勇敏，等.重楼皂苷对结肠癌 HCT116 细胞凋亡及 Bax，Bcl-2，Caspase-3 蛋白表达的影响 J 中国实验方剂学杂志，2018;24(6):172-6.2022-05-27 修回(编辑滕欣航)右美托咪定通过 P2X7 调控 NLP3/IL-1 通路减轻大鼠炎性痛李屹张际政孙晓华车津立任万陆(天津医院麻醉科，天津300211)摘要 目的探讨右美托咪定(Dex)在慢性炎性痛大鼠模型中对嘌呤能 P2X7 及 NOD 样受体蛋白(NLP)3/白细胞介素(IL)-1 通路的影响。方法将 60 只大鼠随机分为对照组、模型组、Dex 低、高剂量组(10、20
5、 g/kg)、Bz-ATP 组(Dex20 g/kg+P2X7 激动剂 Bz-ATP 15 g/kg)，每组 12 只。左后爪足底内注射完全弗氏佐剂(CFA)诱发炎性疼痛模型，大鼠于建模前 1 d、建模后即刻及建模后 1、2、3 d 进行腹腔注射给药，1 次/d。给药结束后，行为学测试检测大鼠机械痛阈(MWT)和热痛阈(PWTL);酶联免疫吸附法(ELISA)检测脑脊液中 IL-1 水平;分离 L4 L6 背根神经节(DG)，免疫荧光法检测 DG 中P2X7、NLP3 与神经元特异核蛋白(NeuN)的共表达;蛋白免疫印迹法检测 DG 中 P2X7、NLP3、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)
6、-1、IL-1 蛋白表达。结果与对照组相比，模型组 MWT、PWTL 显著下降(P0.05);脑脊液中 IL-1，DG 中 P2X7与 NeuN、NLP3 与 NeuN 共表达水平、P2X7、NLP3、Caspase-1、IL-1 蛋白表达均显著升高(P0.05)。与模型组相比，Dex 低、高剂量组 MWT、PWTL 明显升高(P0.05);脑脊液中 IL-1，DG 中 P2X7 与 NeuN、NLP3 与 NeuN 共表达水平、P2X7、NL-P3、Caspase-1、IL-1 蛋白表达均明显降低(P0.05)，且使用 Bz-ATP 激活 P2X7 受体，可明显逆转 Dex 的抗炎镇痛作用。
7、结论Dex 可能通过下调 P2X7，抑制 NLP3/IL-1 通路，减轻大鼠慢性炎性痛。关键词 右美托咪定;慢性炎性痛;嘌呤能 P2X7 受体;NOD 样受体蛋白 3;白细胞介素 1中图分类号 969.4 文献标识码 A 文章编号 1005-9202(2023)03-0734-05;doi:10.3969/j.issn.1005-9202.2023.03.055通信作者:任万陆(1967-)，男，副主任医师，主要从事急危重症创伤麻醉研究。第一作者:李屹(1969-)，男，主治医师，主要从事创伤麻醉研究。炎性疼痛是常见的临床症状，广泛存在于各种急慢性疾病中。一般情况下，急性炎症对于保护身体免受入
8、侵的病原体及促进组织重塑和修复至关重要。持续 6 w 或更长时间的慢性炎症是严重影响患者生活质量的最常见不适之一，可导致组织损伤1。促炎介质(如前列腺素、细胞因子、趋化因子、蛋白酶、神经肽和生长因子)在炎症部位释放能够使周围的痛觉神经元敏感。目前，非甾体抗炎药和阿片类镇痛药仍是临床上常用的药物，但近 50%的患者会感到疼痛缓解不足、胃肠道不适和其他严重的副作用(如便秘、抑郁)2，3。因此，开发高效、低毒的镇痛药一直受到医学界的关注。右美托咪定(Dex)是一种具有镇静、镇痛、辅助麻醉等作用的新一代高选择性 2 肾上腺素能受体(2 A)激动剂;是美国食品药品监督管理局(FDA)批准的在重症监护病房
9、(ICU)中对插管和机械通气患者进行镇静的常用药物4。研究发现其具有显著的抗炎镇痛作用，对2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠慢性炎性内脏痛表现较强的镇痛作用5，6;研究发现Dex 区域麻醉干预对术后镇痛非常有用，可以减少对阿片类药物的需求并提高术后患者的满意度7。嘌呤能 P2X7 已被证明在伤害性炎症和神经性437中国老年学杂志 2023 年 2 月第 43 卷疼痛的动物模型中起核心作用，在患有慢性伤害性和神经性疼痛的患者外周血中可见 P2X7 明显上调和白细胞介素(IL)-1 释放增加8 10。动物研究也发现 P2X7 可通过激活 VOD 样受体热蛋白结构域相关蛋白(NLP)3/
10、IL-1 信号通路，参与大鼠炎性痛的形成11。Dex 可抑制 P2X4 和 NLP3 的表达，减弱糖尿病性神经性疼痛大鼠12;并可下调 NLP3的表达，降低 IL-1 的释放，抑制小胶质细胞的炎症13。而 Dex 能否通过 P2X7 调控 NLP3/IL-1减轻大鼠炎性痛还未可知，故本研究通过建立慢性炎性痛大鼠模型，探讨 Dex 在该模型中对 P2X7 及NLP3/IL-1 通路的影响，为 Dex 能否作为安全、高效的镇痛药提供理论和实验依据。1材料与方法1.1材料SPF 级雄性 SD 大鼠 66 只，体重(18020)g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证为 SCXK(京)2019
11、-0009。将所有大鼠放在可控制的光照下保持 12 h 明暗交替，温度(20 2)，相对湿度为 45%60%，可以自由获取食物和水。研究已由机构动物护理和使用委员会批准，并遵循实验动物的护理和使用指南。盐酸 Dex注射液(江苏恒瑞医药股份有限公司，国药准字H20090248，2 ml:200 g);2(3)-O-(4-苯甲酰苯甲酰)腺苷 5-三磷酸三乙铵盐(Bz-ATP，P2X7 激动剂，93%，美 国 Sigma-Aldrich 公 司，CAS 号:112898-15-4);完全弗氏佐剂(CFA，P2036)、IPA裂解液(P0013B)和二喹啉甲酸(BCA)试剂盒(P0012S)均购自碧云
12、天生物科技公司;大鼠 IL-1(A20020)酶联免疫吸附试验(ELISA)检测试剂盒购自武汉贝茵莱生物科技有限公司;兔抗 P2X7(ab109054)、NLP3(ab263899)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-1(ab238972)、IL-1(ab200478)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)(ab9485)、羊抗兔 IgGHL 辣根过氧化物酶(HP)(ab205718)、小鼠抗神经元特异核蛋白(NeuN，ab104224)、Alexa Fluor 647标记的山羊抗兔 IgG HL(ab150079)、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的山羊抗小鼠 IgG HL(ab6785)
13、均购自英国 abcam 公司;BME-403 Von Frey、BME-410C 全自动热痛刺激仪均购自中国医学科学院生物医学工程研究所;iMark680 多功能酶标仪、蛋白转膜装置(美国 Bio-ad 公司);荧光显微镜(日本 O-lympus 公司)。1.2模型制备大鼠适应性喂养 3 d 后开始实验。将 60 只大鼠随机分为对照组、模型组、Dex 低、高剂量组(10、20 g/kg)12、Bz-ATP 组(Dex 20 g/kg+P2X7 激动剂 Bz-ATP 15 g/kg)11，每组 12 只。1%的戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后，左后爪足底内注射 20 l 的 CFA
14、诱发炎症性疼痛模型14。大鼠于建模前 1 d、建模后即刻及建模后 1、2、3 d 进行腹腔注射给药，对照组和模型组注射生理盐水，Dex 低、高剂量组分别注射相应剂量的Dex，Bz-ATP 组在给予 Dex 的同时注射 P2X7 激动剂 Bz-ATP(溶于无菌的 0.9%生理盐水中，并稀释至所需浓度)，1 次/d，注射体积为 1 ml。1.3行为学测试1.3.1机械痛敏在大鼠注射前 1 d 及给药结束后 30 min 进行机械痛敏测定。实验前将大鼠连续3 d放置在测试笼中 30 min 以适应测试环境，每次测试前，将大鼠放进测试笼中适应15 min，然后用电子 Von Frey 刺激针刺激大鼠左
15、侧足底，从 1.0 g 开始，逐渐增加纤毛折力，记录出现抬足或舔足反射的最小刺激强度为机械缩足反射阈值(MWT)，每只大鼠测量 5 次，每次间隔 5 min，计算其平均值。1.3.2热痛敏分别用移动的热辐射光源照射各组大鼠左侧足底，大鼠快速抬足或舔足即停止照射，记录热辐射持续时间即缩足反射潜伏期(PWTL)，每只大鼠测量 5 次，每次间隔 5 min，计算其平均值。为避免灼伤大鼠足底，刺激时间设置为 15 s，若 15 s内大鼠对热刺激无反应则记为 15 s。1.3.3ELISA 检测脑脊液 IL-1 水平行为学检测结束后，使用戊巴比妥(80 mg/kg)深度麻醉大鼠，固定于脑立体定位仪上，剪
16、开枕骨嵴附近皮肤，使用微量进样器穿过肌肉进入延髓池，缓慢抽取100 l 脑脊液，80 冰箱保存。按照 ELISA 试剂盒说明书的操作检测脑脊液中 IL-1 水平。1.3.4免疫荧光检测背根神经节(DG)中 P2X7、NLP3 与 NeuN 的共表达取脑脊液完成后处死大鼠，经心灌注 150 ml 生理盐水和 400 ml 4%多聚甲醛的 0.1 mol/L 磷酸盐缓冲盐水(PBS)。分离 L4 L6 DG，每组随机选取6 只大鼠的样本，在4%多聚甲醛中固定 3 h，然后转移至 15%和 30%的蔗糖进行脱水。OCT 包埋后在冷冻低温恒温器上将 DG切成 14 m 的切片。将切片用 TBST(0.1%Tween-20)冲洗，并在37下用5%正常山羊血清封闭1 h。然后将切片与兔抗 P2X7(1 100)、NLP3(1 100)和小鼠抗 NeuN(1200)于 4孵育过夜。清洗后，与Alexa Fluor 647 标记的山羊抗兔和 FITC 标记的山羊抗小鼠二抗 IgG 抗体(1 200)进行第二次孵育2 h。46-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)孵育 30 min，漂洗后使537李屹等右美