1、分子诊断与治疗杂志2023年1月第15卷第1期J Mol Diagn Ther,January 2023,Vol.15No.1论著基金项目：四川省科技计划项目（2019YFS0443)作者单位：德阳市人民医院急诊科，四川，德阳 618000通信作者：林涛，Email：血清 miR126、miR381 在脓毒症患者中的表达水平及预测价值林涛何顶秀巫金摘要 目的通过检测微小 RNA 126（miR126）、微小 RNA 381（miR381）在脓毒症患者血清中的表达，评估二者对脓毒症的预测价值。方法选取 2019 年 6 月至 2021 年 12 月 189 例德阳市人民医院已确诊收治的脓毒症患者
2、，按照严重程度分为 79 例脓毒症组、65 例严重脓毒症组和 45 例脓毒性休克组，并选取 180 名健康者作为对照组；受试者工作特征曲线（ROC）分析血清中 TNF、IL6、miR126、miR381 表达水平对脓毒症的预测价值；Logistic 回归分析影响脓毒症发生的影响因素。结果与对照组相比，脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组白细胞计数（WBC）、降钙素原（PCT）、C反应蛋白（CRP）、乳酸（Lac）、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、肿瘤坏死因子（TNF）、白介素6（IL6）水平依次显著增加，差异有统计学意义（F=203.191，655.528，565.808，468.356，4
3、97.532，97.385，62.398，P0.05）；miR126、miR381 表达水平在脓毒症组、严重脓毒症组、脓毒性休克组中均显著低于对照组，并随着病情严重程度的增加而显著降低，差异有统计学意义（F=41.349，40.802，P0.05）；多因素分析发现，PCT、CRP、Lac、WBC、HMGB1、TNF、IL6、miR126 和 miR381 均是影响脓毒症发生危险因素（P0.05）；miR126、miR381 联合预测脓毒症发生的 AUC 显著高于 TNF、IL6、miR126 单独预测，差异有统计学意义（Z=1.985，P=0.047；Z=2.121，P=0.034；Z=2.2
4、18，P=0.027）。结论脓毒症患者血清中miR126、miR381 表达显著降低，二者联合对脓毒症发生具有一定的预测价值。关键词 脓毒症；微小RNA126；微小RNA381Expression levels and predictive value of serum miR126 and miR381 in patients withsepsisLIN Tao，HE Dingxiu，WU Jin（Emergency Department of Peoples Hospital of Deyang City，Deyang，Sichuan，China，618000）ABSTRACT Objec
5、tiveTo detect the expression of microRNA126（miR126）and microRNA381（miR381）in serum of patients with sepsis，to evaluate the predictive value of the two in sepsis.MethodsAtotal of 189 patients with sepsis admitted to Peoples Hospital of Deyang from June 2019 to December 2021were selected.According to
6、the severity，they were divided into 79 cases of sepsis group，65 cases of severe sepsis group and 45 cases of septic shock group，180 healthy people were selected as the control group.The receiver operating characteristic（ROC）curve was used to analyze the predictive value of serum TNF，IL6，miR126and mi
7、R381 expression levels for sepsis；Logistic regression analysis was used to analyze the influencing factors of sepsis.ResultsCompared with the control group，white blood cell count（WBC），procalcitonin（PCT），Creactive protein（CRP），lactic acid（Lac），and high mobility in the sepsis group，severe sepsisgroup，
8、and septic shock group Group protein B1（HMGB1），tumor necrosis factor（TNF），interleukin6（IL6）levels increased significantly in turn，and the differences were statistically significant（F=203.191，655.528，565.808，468.356，497.532，97.385，62.398，P0.05）.The expression levels of miR126 and miR381 94DOI:10.1993
9、0/ki.jmdt.2023.01.021分子诊断与治疗杂志2023年1月第15卷第1期J Mol Diagn Ther,January 2023,Vol.15No.1in the sepsis group，severe sepsis group and septic shock group were significantly lower than those in the controlgroup，and decreased with the severity of the disease，and the difference was statistically significant（F
10、=41.349，40.802，P0.05）.Multivariate analysis found that PCT，CRP，Lac，WBC，HMGB1，TNF，IL6，miR126and miR381 were all risk factors for sepsis（P0.05）.The area under the ROC curve（AUC）of miR126 andmiR381 combined to predict the occurrence of sepsis was significantly higher than that of TNF，IL6，miR126alone，an
11、d the difference was statistically significant（Z=1.985，P=0.047；Z=2.121，P=0.034；Z=2.218，P=0.027）.ConclusionThe expressions of miR126 and miR381 in the serum of patients with sepsis were significantly decreased，and the combination of the two has a certain predictive value for the occurrence of sepsis.
12、KEY WORDS Sepsis；MicroRNA126；MicroRNA381脓毒症是 ICU 的主要死亡原因之一，其特点是可导致大量炎症介质的释放、刺激免疫细胞活化、损坏机体微循环系统和引发内皮功能障碍，致使器官衰竭1。脓毒症患者多存在应激性溃疡、急性肺损伤、休克等多种并发症，而掌握其发病机制有助于早期诊断和治疗2。有研究表明，微小RNA（MicroRNA，miRNA）对改善内皮细胞损伤和炎症反应有重要作用3。微小 RNA126（MicroRNA126，miR126）可有效保护血管生成和完整。研究发现，miR126 在脓毒症中表达下调，但关于其在脓毒症中的研究多局限于动物研究3，而关于其在
13、脓毒症临床中的研究还甚少。微小 RNA381（MicroRNA381，miR381）是 一 种 肿 瘤 相 关 基因4。脓毒症患者血清 miR381 低表达，增强其表达可抑制脓毒症大鼠炎症及心功能障碍5。近年来有研究表明，高迁移率族蛋白 B1（high mobilitygroup box 1 protein，HMGB1）是脓毒症产生致死效应的重要原因，而 miR126 与 miR381 可起到下调HMGB1 表达的作用6。为探究脓毒症患者血清miR126、miR381 表达及其临床预测价值，本研究通过检测两者在脓毒症患者血清中的表达，探讨其对脓毒症的临床预测价值。1资料与方法1.1临床资料选取
14、 2019 年 6 月至 2021 年 12 月 189 例德阳市人民医院已确诊收治的脓毒症患者作为观察组，年龄为（49.2811.54）岁，男性 99 例，女性 90例；按照疾病严重程度分为：79 例脓毒症组、65 例严重脓毒症组和 45 例脓毒性休克组；选取 180 名健康者作为对照组，年龄为（49.259.54）岁，男性94 名，女性 86 名。纳入标准：根据 Sepsis3.0 对脓毒症患者诊断：序贯器官衰竭评分（Sequential Organ Failure Assessment，SOFA）2、收 缩 压 100mmHg、呼吸频率22 次/min7，临床资料完整；排除标准：患心、肺
15、、肾功能障碍者或其它免疫系统疾病；入组前已接受过免疫抑制治疗；患者依从性差。本研究通过伦理委员会批准，经受试者和家属知情并签署同意书。1.2研究方法1.2.1样品采集及保存患者入院次日空腹抽取静脉血 4 mL，对照组健康体检血液 4 mL。样本均进行 4 000 r/min、10 min离心取上清至-80冰箱待测。1.2.2qRTPCR 法检测血清样本中 miR126、miR381表达水平使用RNA提取试剂盒（北京天根生化有限公司）提取出各组样本血清中总RNA后反转录成cDNA。以此为模板，采用qRTPCR检测（日本Takara公司）样本中miR126、miR381的表达水平。通过2Ct分析m
16、iR126、miR381的表达。引物序列见表1。1.2.3信息收集收集患者白细胞计数（white blood cell count，WBC）、降钙素原（procalcitonin，PCT）、C 反应蛋白（Creactive protein，CRP）、乳酸（Lactic acid，Lac）、肿瘤坏死因子 （tumor necrosis factor，TNF）、Primer namemiR126miR381U6Forward primer sequence（53）ACACTCCAGCTGGGCATTATTACTTTTGGTACGGAGCCTATACAAGGGCAAGCATTGGAACGATACAGAGAAGATTReverse primer sequence（53）ACACTCCAGCTGGGACTGCAGTGAAGGCACTTACGAGCGATACAAGGGCAAGCGGAACGCTTCACGAATTTG表1实时荧光定量PCR 引物Table 1Real time fluorescent quantitative PCR primers 95分子诊断与治疗杂志2023年1月第15卷第1期