1、第 卷第期 年月沧州师范学院学报 ，吐温 酸性罗丹明维生素化学发光体系测定维生素的含量张金君，杨凤珍，张春蕾，王晨玉（沧州师范学院 化学与化工系，河北 沧州 ）摘要：开发了一种测定饲料添加剂中维生素含量的方法，并探究了其机理以硫酸作为酸性介质，吐温 酸性罗丹明维生素化学发光体系会产生强烈的化学发光信号，根据化学发光信号的强度可以测定饲料添加剂维生素 粉中维生素 的含量 在最佳实验条件下，维生素 的浓度在 范 围 内 与 化 学 发 光 信 号 强 度 呈 现 良 好 的 线 性 关 系，线 性 回 归 方 程：.，检出限为 ，相对标准偏差为，平均回收率为 该方法仪器设备简单，操作方便，可准确测
2、定饲料添加剂药粉中维生素的含量关键词：化学发光法；酸介质；吐温；罗丹明；维生素；含量测定中图分类号：文献标识码：文章编号：（）维生素，又名亚硫酸氢钠甲萘醌粉，是动物生长发育必不可少的营养物质，有助于动物肝脏中凝血酶原的形成，使凝血时间正常目前维生素含量测定方法主要有高效液相色谱法、分光光度法、荧光法、电化学法等其中，有关饲料或饲料添加剂中维生素含量测定的研究多采用高效液相色谱法化学发光分析法具有灵敏度高，分析速度快，仪器设备简单等特点 利用吐温 酸性罗丹明维生素化学发光体系（简称 体系）测定饲料添加剂维生素粉中维生素的含量，其中吐温 能明显增大体系化学发光强度，罗丹明是一种荧光试剂或能量转移剂
3、，可增加化学发光量子产率，从而增强化学发光强度，进而利用该体系通过化学发光法进行饲料中维生素 含量的测定 为得到较高的化学发光强度，研究酸性介质及其浓度、体系中吐温 和罗丹明的浓度对相对化学发光信号强度的影响；在最优条件下对样品中的维生素的含量进行测定，对方法的精密度、准确度及体系的化学发光机理进行分析材料与方法 仪器与试剂实验仪器：型毛细管电泳电化学发光检测仪电化学分析仪、型毛细管电泳电化学发光检测仪多功能化学发光分析仪、型智能流动注射进样器，均购于西安瑞迈分析仪器有限公司实验试剂：维生素粉（河北中贝佳美生物科技有限公司）、维生素标准品（上海西域供应链有限公司）浓硫酸、浓盐酸、浓硝酸、吐温、
4、罗丹明均为分析纯 实验方法 标准溶液配制维生素 标准溶液：，准确称取维生素 标准品 ，用去离子水溶解，定容于 棕色容量瓶中，备用维生素 样品溶液：准确称取一定量饲料添加剂维生素 粉，用去离子水溶解，定容于 棕色收稿日期：基金项目：沧州市重点研发计划指导项目“利用电石渣制备晶型碳酸钙的研究”，编号：作者简介：张金君（），女，河北盐山人，沧州师范学院化学与化工系讲师，理学硕士，研究方向：无机分析检测；杨凤珍（），女，河北沧县人，沧州师范学院化学与化工系教授，研究方向：光谱分析DOI:10.13834/ki.czsfxyxb.2023.01.009 维生素溶液；酸性罗丹明溶液；吐温 溶液；，主、副蠕
5、动泵；三通阀；八通阀；流通池；废液；光电倍增管检测器；电脑显示器图仪器工作原理示意图容量瓶中，过滤，备用 实验方法将配制好的样品溶液、试剂溶液通过蠕动泵（两个泵的转速均为 ）和三通阀汇聚于八通阀，而后进入流通池产生化学发光信号（阀池距的管长为 ，进样管内径），通过光电倍增管将此光信号转换为电信号并放大，然后由电脑记录并显示其结果 根据化学发光信号的强度与维生素 的浓度关系对饲料添加剂维生素粉中维生素的含量进行定量测定工作原理见图结果与分析 实验条件探究 酸性介质种类对体系相对化学发光信号强度的影响 体系需置于酸性介质中，且产生的相对化学发光信号强度与酸的种类密切相关，故需对酸的种类进行优选 体
6、系在 的硝酸、盐酸和硫酸介质中所产生的相对化学发光信号强度分别为，在硫酸介质中的相对化学发光信号明显较强，而在硝酸介质中仅为硫酸介质中的，这是因为硝酸根可使罗丹明发生降解，致使罗丹明浓度降低，光信号偏小因此，体系选择硫酸作为酸性介质图硫酸浓度对相对化学发光信号的影响图吐温 浓度对相对化学发光信号的影响 硫酸浓度对体系相对化学发光信号强度的影响在 体系中，硫酸的浓度对相对化学发光信号强度有着直接的影响，因此通过研究 体系在不同浓度硫酸溶液中的相对化学发光信号强度，选择最优的硫酸介质浓度在（）吐温，罗丹明以及 维生素的条件下，体系在不同浓度（）硫酸介质中的相对化学发光信号强度见图当体系中无硫酸加入
7、时，体系的相对化学发光信号为零；当硫酸浓度从 增大到 时，体系的相对化学发光信号强度急剧上升，在硫酸浓度为 时，相对化学发光信号达到最高值 ；随着硫酸介质浓度继续增加，体系的相对化学发光信号出现缓慢下降趋势 因此选择 的硫 酸 溶 液 作 为 酸 性 介 质 用 于 化学发光体系 吐温 浓度对体系相对化学发光信号强度的影响吐温 能明显增大体系的化学发光强度，体系中吐温 的浓度将直接影响相对化学发光信号强度，为此对加入不同浓度吐温 的 体系的相对化学发光信号强度进行测定，结果如图所示 在 硫酸、罗丹明和 维生素的条件下，体系的相对化学发光信号强度随吐温 浓度的增加出现先增强后减弱的趋势，且当吐温
8、 浓度为（）时，化学发光信号最大，故选择吐温 的浓度为（）图罗丹明浓度对相对化学发光信号的影响 罗丹明浓度对体系相对化学发光信号强度的影响由于荧光试剂罗丹明对 体系相对化学发光信号强度有显著影响，故对不同罗丹明 浓度的 体系相对化学发光信号强度进行测定 在 硫酸、（）吐温 和 维生素 的条件下，浓度在 内，相对化学发光信号强度随罗丹明浓度的增大而升高；当罗丹明 浓度为 时，光信号逐渐下降，结果见图因此，选择罗丹明浓度为 干扰实验基于上述研究可知，体系的最佳检测条件为：以 的硫酸作为酸性介质，吐温 的浓度为（），罗丹明的浓度为 在此条件下，对已知浓度为 维生素 溶液进行化学发光法测定时，研究了常
9、用药物添加剂对体系的影响结果表明，当误差为时，溶液中添加 倍（浓度为 ）的淀粉、氯化钙、尿素、硫酸镁，倍（浓度为 ）的葡萄糖、蔗糖，倍（浓度为 ）的氯化钾、氯化钠，倍（浓度为 ）的硫酸锌对含量测定结果无影响 样品含量、精密度和准确度的测定 标准曲线及检出限按照 实验方法，在 硫酸、（）吐温 和 罗丹明的条件下，测得维生素的浓度在 范围内与体系化学发光强度呈良好的线性关系，线性回归方程为 .，检出限为 样品含量按照 实验方法，在最佳实验条件下，对饲料添加剂维生素粉中维生素的含量进行测定，结果为 精密度及加标回收率按照 实验方法，对 的维生素标准溶液进行 次平行测定，相对标准偏差为，该方法精密度较
10、好同时，为了验证结果的准确性，向一定量饲料添加剂维生素粉样品溶液中加入已知量的维生素 标准溶液进行回收检验，测得维生素 的平均回收率为 ，结果良好，见表表样品分析结果样品浓度 加入量 测得总量 回收率平均回收率 图 体系的化学发光机理 体系的发光机理分析 体系的化学发光机理如图所示 维生素，即亚硫酸氢钠甲萘醌，具有还原性 吐温 中含有聚氧乙烯链，不稳定，在一定条件下很容易发生自氧化降解反应，生成短链降解产物，包括氢过氧化物、甲醛、甲酸、乙酸等 当维生素 溶液与吐温 溶液相遇时，吐温 降解产物中的氢过氧化物可将亚硫酸氢钠 甲 萘醌 氧化 产 生 激 发 态 物 质，它又将能量转移给罗丹明，生成激
11、发态罗丹明，激发态罗丹明返回基态时产生化学发光设计该体系测定维生素 的实验过程中，根据光信号强弱选择硫酸作酸介质，而硫酸在体系中如何发挥作用尚不明确因此，针对酸介质在 体系中的作用机理有待进一步研究结论利用吐温 酸性罗丹明维生素化学发光体系，选择浓度为 硫酸作为酸性介质，在吐温 浓度为（）、罗丹明浓度为 的条件下，可以得到最强相对化学发光信号强度 利用该体系，采用化学发光法测定某饲料添加剂维生素 粉中维生素 的含量为 ，方法检出限为 ，加标回收率为 该方法操作简便、灵敏度高，实验中所用试剂易得易配，为饲料添加剂维生素 粉中维生素 含量的测定提供了一种新方案参考文献：郝文强维生素合成工艺的研究及
12、结构表征西安：陕西科技大学，全国饲料工业标准化技术委员会 ，饲料添加剂 亚硫酸氢钠甲萘醌（维生素）北京：中国标准出版社，申仲健，郝永胜，吴永保，等 维生素 对 日龄北京鸭凝血时间和维生素 依赖蛋白的影响 畜牧兽医学报，（）：邓秉钊，潘绮雯，肖田安，等 亚硫酸氢钠甲萘醌粉（维生素）的含量测定方法研究 广东饲料，（）：单晓雪 法测量饲料中的维生素（）含量的不确定度饲料研究，（）：全国饲料工业标准化技术委员会（），饲料中维生素 的测定高效液相色谱法 北京：中国标准出版社，阳泽平，刘忠芳，胡小莉，等甲基绿褪色分光光度法测定维生素分析化学，（）：董存智，吴雯辉三聚氰胺荧光猝灭法测定维生素淮北师范大学学报
13、（自然科学版），（）：顾玲，石爱华，刘彦平聚中性红膜修饰碳糊电极的电化学研究及其对维生素的检测分析科学学报，（）：李献锐，王娜，王贝贝，等流动注射化学发光法测定饲料中环丙氨嗪分析科学学报，（）：谢琴基于异鲁米诺和草酸酯的长时间化学发光研究武汉：武汉大学，杨凤珍，邱林楠，王彦玉，等化学发光法测定硫酸特布他林的含量沧州师范学院学报，（）：杨凤珍，叶霞无氧化剂化学发光体系对空气中二氧化硫的定量测定化学研究与应用，（）：刘国光，丁雪军，张学治，等硝酸根对罗丹明光解的敏化作用环境化学，（）：谭志高，巢志茂，刘海萍，等聚山梨脂 的化学稳定性研究进展中国实验方剂学杂志，（）：，（，）：，.，：；责任编辑：武玉琳