1、59第 2 5 卷 第 2 期 2023 年 2 月辽 宁 中 医 药 大 学 学 报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol.25 No.2 Feb.，2023通窍活血汤治疗缺血性脑卒中的疗效观察及对ET-1、CGRP因子影响刘黎敏，卢昌均，韦冰心，顿玲露，甘艳艳（柳州市中医医院，柳州市壮医医院，广西 柳州 545000）基金项目：国家自然科学基金项目（81760413）；广西自然科学基金项目（2019GXNSFAA245079）；柳州市科技计划项目（2019BJ10611，2020PAAA0610）；广西中医药管理局自筹经费科研课题（GXZYZ202
2、10267）作者简介：刘黎敏（1994-），女，湖南张家界人，硕士在读，研究方向：脑血管病的基础与临床。通讯作者：卢昌均（1963-），男，湖南常德人，教授、主任医师，博士，研究方向：脑血管病的基础与临床。摘要：目的 通过动物实验，探讨通窍活血汤治疗缺血性脑卒中的临床疗效及对ET-1、CGRP因子的影响。方法 实验以48只健康雄性SD大鼠为对象，其中8只大鼠作为假手术组，其余40只用于制备MCAO动物模型。将造模成功的大鼠随机分为4组，模型组及通窍活血汤高、中、低剂量组，每组各8只（排除死亡和不符合标准的模型）。假手术组与模型组灌服同体积的生理盐水，通窍活血汤组按高、中、低剂量灌胃，分别持续灌
3、服14 d，1次/d，给药第14天测定大鼠神经功能情况，并于末次给药后2 h处死。用RT-qPCR法检测大鼠脑组织ET-1及CGRP含量，用TTC染色法观察大鼠梗死情况。结果 与假手术组相比，模型组与通窍活血汤各剂量组血清ET-1表达水平均有所上升（P0.05），脑组织CGRP表达水平有差异（P0.05），呈下降趋势，有统计学意义；与模型组相比，大鼠血清ET-1含量在通窍活血汤各剂量组的表达水平下降（P0.05），脑组织CGRP表达水平升高（P0.05），有统计学意义；与通窍活血汤高剂量组相比，大鼠血清ET-1表达在通窍活血汤中、低剂量组升高（P0.05），脑组织CGRP在通窍活血汤中、低剂量
4、组表达降低（P0.05），有统计学意义，说明通窍活血汤高剂量组比中、低剂量组疗效更优。结论 通窍活血汤治疗急性缺血性脑卒中可能是通过影响血管内皮因子的舒缩功效，发挥对血管内皮功能的保护作用。关键词：缺血性脑卒中；通窍活血汤；ET-1；CGRP中图分类号：R743 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2023)02-0059-05Observation on Therapeutic Effect of Tongqiao Huoxue Decoction（通窍活血汤）on Ischemic Stroke and Its Effect on ET-1 and CGRP FactorsLI
5、U Limin，LU Changjun，WEI Bingxin，DUN Linlu，GAN Yanyan（Liuzhou Hospital of Traditional Chinese Medicine，Liuzhou Zhuang Medical Hospital，Liuzhou 545000，Guangxi，China）Abstract：Objective To explore the clinical efficacy of Tongqiao Huoxue Decoction（通 窍 活 血 汤）in the treatment of ischemic stroke and its ef
6、fect on ET-1 and CGRP factors through animal experiments.Methods 48 healthy male SD rats were selected as subjects，of which 8 rats were used as sham operation group，and the other 40 rats were used to establish MCAO animal model.The successful rats were randomly divided into 4 groups：model group and
7、Tongqiao Huoxue Decoction high，middle and low dose groups，8 rats in each group（excluding death and substandard models）.The rats in the sham operation group and the model group were given the same volume of normal saline，and the rats in the Tongqiao Huoxue Decoction group were given intragastric admi
8、nistration at high，middle and low doses for 14 days，once a day，respectively.The neurological function of the rats was measured on the 14th day，and the rats were killed 2 hours after the last administration.The contents of ET-1 and CGRP in rat brain tissue were detected by RT-qPCR method，and the infa
9、rct was observed by TTC staining.Results Compared with the sham operation group，the expression level of serum ET-1 in model group and Tongqiao Huoxue Decoction group increased（P0.05），and the expression level of CGRP in brain tissue decreased（P0.05）.Compared with the model group，the expression level
10、of ET-1 in serum decreased（P0.05）and the expression level of CGRP in brain tissue increased in Tongqiao Huoxue Decoction groups（P0.05）.Compared with the high dose group of Tongqiao Huoxue Decoction，the expression of serum ET-1 increased in the middle and low dose groups of Tongqiao Huoxue Decoction（
11、P0.05），while the expression of CGRP in brain tissue decreased in the middle and low dose groups of Tongqiao Huoxue Decoction（P0.05）.Conclusion Tongqiao Huoxue Decoction may protect vascular endothelial function by affecting the relaxing and contractile effect of vascular endothelial factor in the tr
12、eatment of acute ischemic stroke.Keywords：ischemic stroke；Tongqiao Huoxue Decoction（通窍活血汤）；ET-1；CGRPDOI：10.13194/j.issn.1673-842x.2023.02.01360 辽宁中医药大学学报 25 卷缺血性脑卒中（ischemic stroke，IS）临床上又称脑梗死，是由各种因素引起的脑部血管狭窄、梗死导致血管内皮损伤，引起脑组织细胞及神经发生缺血、缺氧、坏死。其主要表现为昏倒、猝然跌倒、半身瘫痪、意识障碍或认知障碍等症状。IS有着高患病率，病后易致残致死，且近年来有研究发现，
13、其发病年龄呈年轻化趋势，给患者及家庭带来了一定的生活与经济压力。血清内皮素-1（endothelin-1，ET-1）与降钙素基因相关肽（calcitonin gene-related peptide，CGRP）是作用于血管内皮上的活性肽细胞，正常情况下，二者相互稳定、平衡；脑缺血时平衡状态被打破，使脑血管处于持续的收缩痉挛状态，导致血管内皮功能障碍，进而加重脑组织的损伤，故血清ET-1与CGRP可作为检测IS病情变化及预后的指标之一，对治疗IS的药物研究有重要意义。通窍活血汤出自清代王清任的 医林改错，是我国经典名方，其原文“治头面，四肢，周身血管血瘀之证”，说明通窍活血汤有着活血祛瘀、开窍醒
14、神、通络的功效，是活血化瘀类代表方。现代研究表明通窍活血汤具有抑制血小板积聚、减轻氧化损伤、减轻脑组织水肿、减缓炎性损伤、改善神经元损伤，对脑神经细胞起保护作用1-4。本实验通过建立大鼠MCAO模型，连续灌胃14 d，通过zea long神经功能评分、TTC染色了解梗死灶情况、检测ET-1与CGRP含量表达，比较不同剂量的通窍活血汤对其治疗效果，并从血管内皮角度探讨通窍活血汤对其作用机制及影响，为通窍活血汤治疗急性缺血性脑卒中提供相应的实验依据。1材料与方法1.1 实验动物选择标准及喂养方法选取健康雄性SD大鼠48只，体质量220250 g，由长沙市天勤生物技术有限公司提供 实验单位使用许可证
15、号：SYXK桂2010-0001，许可证号：SCXK（湘）2019-0014，动物房和实验室温度（223），湿度（555）%，每12 h明暗交替；环境安静，避免强光、噪音等刺激；普通饲料喂养，自由进食饮水。1.2 通窍活血汤的备制通窍活血汤（tongqiao huoxue decoction，THD）具体配伍组成如下：麝香（绢包）0.15 g，赤芍3 g，川芎3 g，红花9 g，桃仁（研泥）9 g，红枣（去核）10 g，老葱（切碎）5 g，鲜姜（切碎）9 g。煎煮方法：用黄酒250 mL，将除了麝香之外的7味药先煎至150 mL，去滓，再放入用绢布包好的麝香，再次煎煮。按大鼠体表系数6.3折算
16、可得等效剂量约6.3 g/kg，并对药物浓度进行定容，计算出每只大鼠每天灌胃所需容量为2 gmL-1d-1。通窍活血汤按高、中、低剂量进行相应稀释：高剂量组（THD 0.72 mL/100 mg+水0.28/100 mL），中剂量组：THD 0.36 mL/100 mg+水 0.64 mL/100 mg，THD 0.18 mL/100 mg+水0.82 mL/100 mg）。1.3 实验所需材料与仪器 MCAO栓线（型号：2541）：平顶山豫顺生物科技有限公司；水合氯醛：天津大茂化学试剂厂；生理盐水：贵州科伦药业有限公司；低速离心机：湖南湘仪集团；高速冷冻离心机：日本Hitachi Koki Co公司；全波长酶标仪：美国ThermoFisherScientific公司；数显示三用电热恒温水温箱：上海跃进医疗器械有限公司；大鼠内皮素-1（ET-1）酶联免疫试剂盒：武汉华美生物工程有限公司；TTC染色液（0.5%）：上海源叶生物科技有限公司；全自动化学发光分析仪：海门市其林贝尔仪器制造有限公司；TriQuick Reagent总RNA提取液：近岸蛋白科技股份有限公司。1.4 MCAO大鼠模