1、免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023 论著 文章编号1000-8861（2023）03-0248-07；DOI10.13431/ki.immunol.j.20230032人参皂苷Rd通过下调NF-B信号改善小鼠动脉粥样硬化炎症反应符丽珍，饶兰兰，赵勇，易必兴，叶莉华*摘要 目的 探究人参皂苷Rd在ApoE-/-小鼠中抗动脉粥样硬化（AS）的潜在机制。方法 将ApoE-/-小鼠随机分为6组（n=8）：对照组、模型组、阿托伐他汀钙（ATV）组、人参皂苷Rd治疗组（5 mg/kg、10 mg/kg和20 mg/kg）
2、。给小鼠喂食西式饮食6周，然后同时给予人参皂苷Rd治疗6周。采集血样进行脂质分析、炎症因子水平检测和氧化应激水平检测。采集胸主动脉，分别进行苏木素-伊红（HE）和油红O染色，Western印迹检测蛋白表达。结果 人参皂苷Rd显著抑制了AS病变的发展和脂质积累，显著降低总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平，显著升高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平。人参皂苷Rd下调促炎标志物的表达，如肿瘤坏死因子-（TNF-）、白细胞介素（IL）-6和IL-1。此外，人参皂苷Rd处理降低了丙二醛（MDA）活性并增强了超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px
3、）的活性。人参皂苷Rd处理也显著抑制诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）蛋白的表达，并抑制核因子-B（NF-B）通路的异常激活。结论 人参皂苷Rd 通过抑制NF-B通路激活对AS发挥抗炎和抗氧化作用。关键词人参皂苷Rd；动脉粥样硬化；低密度脂蛋白胆固醇；TNF-；NF-B中图分类号 R543.5文献标识码 AGinsenoside Rd alleviates inflammatory response of atherosclerosis inmice by down-regulating NF-B signalingFU Lizhen1,RAO Lanlan2
4、,ZHAO Yong1,YI Bixing1,YE Lihua3,*1.Department of Geriatric Medicine,Second Affiliated Hospital of Hainan Medical University,Haikou 570203,China;2.Department of Pharmacy,Haikou Affiliated Hospital of Central South University Xiangya School of Medicine,Haikou 570208,China;3.Deparment of Dermatology,H
5、aikou Affiliated Hospital of Central South University XiangyaSchool of Medicine,Haikou 570208,China*Corresponding Author:YE Lihua,E-mail:Abstract This study is aimed to investigate the potential mechanism of ginsenoside Rd against atherosclerosis(AS)in ApoE-/-mice.ApoE-/-mice were randomly divided i
6、nto 6 groups(n=8):control group,model group,atorvastatin calcium(ATV)group,and 3 ginsenoside Rd treatment groups(5 mg/kg,10 mg/kg and 20 mg/kg).Micewere fed a Western-style diet for 6 weeks,and then simultaneously treated with ginsenoside Rd for 6 weeks.Bloodsamples were collected for lipid analysis
7、,inflammatory factor level detection and oxidative stress level detection.Thethoracic aortas were collected for hematoxylin-eosin(HE)or oil red O staining,and Western blotting was used todetect protein expression.Data showed that ginsenoside Rd significantly inhibited the development of AS lesionsan
8、d lipid accumulation,significantly decreased total cholesterol(TC),triglyceride(TG)and low-density lipoproteincholesterol(LDL-C)levels,and significantly increased high-density lipoprotein cholesterol cholesterol(HDL-C)levels.Ginsenoside Rd also down-regulated the expression of pro-inflammatory marke
9、rs such as tumor necrosisfactor-(TNF-),interleukin(IL)-6,and IL-1.Furthermore,ginsenosideRdtreatmentdecreasedmalondialdehyde(MDA)activityandenhancedsuperoxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH-Px)activities.Ginsenoside Rd treatment alsosignificantly inhibited the expression of inducible n
10、itric基 金 项 目：2021 年 度 海 南 省 卫 生 健 康 行 业 科 研 项 目（21A200255）作者单位：570203海口，海南医学院第二附属医院老年内科（符丽珍，赵 勇，易必兴）；570208，中南大学湘雅医学院附属海口医院药学部（饶兰兰），皮肤科（叶莉华）*通信作者：叶莉华，E-mail:248免疫学杂志2023年3月第39卷第3期IMMUNOLOGICAL JOURNAL Vol.39No.3 Mar.2023动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）是由脂质代谢异常引起的一种以大、中动脉壁斑块形成为特征的疾病1。AS是心肌梗死、脑卒中等慢性心血管疾病的主要
11、病理基础2，近年来，AS的患病率呈上升趋势，严重影响了老龄人口的健康。氧化应激、血液成分变化引发的炎症因子、内皮细胞损伤和脂质代谢紊乱被认为是导致AS的关键因素3。因此，需要深入研究AS的发病机制，寻找有效的治疗方法。根据中华人民共和国药典（2020年）的标准，人参具有补气安神和增强认知功能保护的功效4。人参皂苷Rd是从人参中提取的一种达玛烷型甾体苷，目前以膳食补充剂的形式出现，具有抗炎、抗肿瘤、神经保护作用、心血管保护和免疫调节等多种药理活性5。例如人参皂苷Rd通过抑制NF-B/MMP-9途径减轻脑缺血诱导的血脑屏障损伤6。Li等7研究证实人参皂苷Rd可预防动脉粥样硬化的发生，其潜在机制可能
12、是通过电压非依赖性Ca2+通道抑制Ca2+内流，从而抑制SR-A活性和表达，随后减少巨噬细胞中氧化低密度脂蛋白的摄取和胆固醇的积累。然而，尚不清楚人参皂苷Rd在体内抑制AS病变的抗炎和抗氧化机制。因此，本研究采用高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠AS模型，采用人参皂苷Rd进行治疗，研究人参皂苷Rd在降低血脂、对抗氧化和炎症因子等方面对AS的保护效应。1材料与方法1.1主要试剂和仪器人参皂苷Rd（纯度98%）购自成都格普特生物科技有限公司；阿托伐他汀钙（ATV）购自大连美仑生物技术有限公司；苏木素伊红染色试剂盒和油红O购自北京索莱宝科技有限公司；总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇
13、（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）和丙二醛（MDA）购自南京建成生物工程研究所；RIPA裂解缓冲液、核和细胞质蛋白提取试剂盒、二辛可宁酸（BCA）蛋白质测定试剂盒和 BeyoECLPlus 试剂购自上海碧云天公司；肿瘤坏死因子（TNF-）、白 细 胞 介 素 1（IL-1）、IL-6、IL-10ELISA试剂盒购自武汉云克隆科技股份有限公司；兔来源一抗-肌动蛋白（-actin）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)、核因子B抑制因子（IB）、磷酸化（p）-IB和核因子kappa-B（NF
14、-B）p65购自英国Abcam公司。Infinite M200 PRO 酶标仪（瑞士 Tecan）；Tanon5500凝胶成像系统（上海天能公司）；Olympus BX50倒置荧光显微镜（日本Olympus）。1.2动物模型的建立与药物治疗48只无特定病原体（SPF）雄性载脂蛋白E基因敲除（ApoE-/-）小鼠（6周龄，体质量2022 g）购自北京维通利华实验动物科技有限公司，生产许可证号SCXK（京）2021-0011，适应性喂养1周。此外，所有动物都保持在以下标准条件下，包括12/12 h光/暗循环，环境温度（2123），湿度范围为30%50%，以及充足的标准食物和水。将小鼠分为6组（n=
15、8）：对照组、模型组、阿托伐他汀钙（ATV）组、人参皂苷Rd低剂量（5mg/kg）组、人参皂苷Rd中剂量（10 mg/kg）组、人参皂苷Rd高剂量（20 mg/kg）组，人参皂苷Rd使用剂量根据Li等6的研究确定。对照组给予标准饮食12周，其他组给予西方饮食（0.25%胆固醇和15%可可脂）12周。喂食6周后，人参皂苷Rd组分别每天腹腔注射5 mg/kg、10 mg/kg、20 mg/kg人参皂苷Rd，ATV组每天口服ATV 3 mg/kg（人当量剂量：0.28 mg/kgd8），对照组和模型组每天注射等量的0.9%生理盐水，连续6周。治疗6周后，用1%戊巴比妥钠（50 mg/kg）对小鼠实施
16、安乐死。取自眶后神经丛的血样并离心，收集血清用于后续实验检测。然后，采集胸主动脉用于组织学和分子研究。所有动物实验均经本院医学伦理委员会批准。1.3组织学病变观察将胸主动脉组织在4%多聚甲醛溶液中固定24 h后，脱水并包埋在石蜡中。石蜡包埋的动脉被横切成4 m厚的小块，脱蜡和再水化，然后行HE染色，光学显微镜下观察胸主动脉的动脉粥样硬化病变。通过油红O染色鉴定脂质沉积，使用 Image J软件分析病变的区域大小。oxide synthase(iNOS)and vascular cell adhesion molecule-1(VCAM-1)proteins,and inhibited the abnormalactivation of nuclear factor-B(NF-B)pathway.In summary,ginsenoside Rd exerts anti-inflammatory andantioxidant effects on AS by inhibiting the activation of NF-B pathway.Key words Ginsenoside R