1、:./.论著穿心莲内酯抑制/信号通路改善抑郁症大鼠的抑郁样行为赵雯婧 王婷婷 邱雪 蔡晓 简薇 何宗岭 郑玉萍项目来源:国家自然科学基金资助项目(编号:)作者单位:四川省成都市第四人民医院老年精神科(赵雯婧、王婷婷、蔡晓、简薇)急性精神科(邱雪)临床心理科(何宗岭)四川省成都市第八人民医院老年科(郑玉萍)通讯作者:郑玉萍:.【摘要】目的探讨穿心莲内酯()通过抑制核转录因子 抑制蛋白激酶()/核因子 抑制蛋白()/核因子()信号通路改善抑郁症()大鼠的抑郁样行为 方法 随机取 只 大鼠作为空白对照组(组)其余大鼠采用慢性不可预知轻度应激()结合孤养模式造模将造模成功大鼠随机平分为模型组(组)、组
2、()、组(/信号通路激活剂)、组()每组 只大鼠 组和 组灌胃等量.氯化钠溶液旷场实验、糖水偏好实验、强迫游泳实验、平衡木实验评估大鼠行为 法检测血清、水平免疫荧光染色检测小胶质细胞、星形胶质细胞活性 检测、以及/信号通路蛋白水平 结果 与 组相比 组站立次数、饮用蔗糖量显著减少(.)游泳不动时间、通过平衡木时间、含量、阳性细胞数量、/、/蛋白水平显著增加(.)与 组相比 组大鼠游泳不动时间、通过平衡木时间、含量、阳性细胞数量、/、/蛋白水平显著降低(.)站立次数、饮用蔗糖量显著增加(.)而 组以上指标趋势相反(.)逆转了 对 大鼠抑郁样行为的改善 结论 可能通过下调/通路对 大鼠的抑郁样行为
3、起到一定的改善作用【关键词】穿心莲内酯抑郁症/信号通路抑郁样行为神经炎症【中图分类号】.【文献标识码】【文章编号】()/.【】()()()/()/().()().()()(/)().()().()/.(.).()()/(.)(.).(.).(.)河北医药 年 月 第 卷 第 期 /(.)./.【】/抑郁症()是一种神经系统疾病表现为对活动失去兴趣、感觉昏昏欲睡或缺乏能量和勇气、食欲紊乱、自卑以及有自杀念头或企图自杀是导致残疾的五大原因之一也是全球全因死亡率增加的主要原因 给人们带来了巨大的经济负担但由于病因无法明确目前尚无标准的治疗方案 穿心莲内酯()是一种二萜类化合物具有多种生物作用包括抗炎
4、、抗氧化和抗肿瘤特性 临床研究表明 可用于治疗多种疾病 等也发现 对 小鼠抑郁行为起到减轻作用 等也称 可以通过抑制炎性反应减轻小鼠慢性不可预知轻度应激()诱导的抑郁样行为 核转录因子 抑制蛋白激酶()/核因子 抑制蛋白()/核因子()是炎症发生的关键通路研究称五味子醇 可以通过抑制/信号通路减少神经炎症对帕金森小鼠起到神经保护作用 等称可以通过抑制/途径以减少炎症从而对 诱导的 模型大鼠发挥抗抑郁样作用 本研究探讨 通过下调/信号通路减少神经炎症改善 大鼠的抑郁样行为机制报告如下 材料与方法.实验动物雄性 大鼠 周龄体重()购自贵州医科大学实验动物中心合格证编号:(黔)饲养温度:湿度:本研究
5、已获得本院动物伦理委员会批准.主要试剂(货号:)购自北京凯诗源生物科技有限公司/信号通路激活 剂 白 藜 芦 醇()(货 号:)购 自 试剂盒:白介素()(货号:)、白 介 素()(货 号:)、肿瘤坏死因子()(货号:)购自艾美捷科技有限公司、()、抗体、标记的羊抗兔 二抗均购自.构建 大鼠模型及分组将大鼠适应性饲喂 周后随机选择 只大鼠作为空白对照组(组)其余大鼠参考先前文献采用 结合孤养模式造模主要包括 不睡觉夹尾 不进食 不进水 潮湿环境 冰水游泳 热水游泳 摇晃 每天实施 种刺激方式连续刺激 周以上刺激不得连续出现 若旷场实验以及糖水喜好实验均差异显著则造模成功 若未成功则继续实施以上
6、刺激 将造模成功的大鼠随机平分为模型组(组)、组、组、组每组 只大鼠 组按照 的剂量灌胃 组按照 的剂 量 灌 胃/信 号 通 路 激 活 剂 组在灌胃 的基础上灌胃 组和 组灌胃等量.氯化钠溶液连续灌胃 周.旷场实验在药物处理 后将大鼠置于长 宽 高 的无顶箱子中通过摄像头记录 内大鼠的站立次数.糖水偏好实验在旷场实验结束后将大鼠置于放有 瓶 蔗糖溶液的笼子中 后换成 瓶 的纯水和 瓶 的 蔗糖溶液记录大鼠饮用蔗糖量.强迫游泳实验在糖水偏好实验结束后用强迫游泳系统进行试验取一直径为 高 的圆柱形透明塑料桶往里面加入温水()约 将大鼠放入水中适应 后将其取出擦干放回笼中 后再将大鼠放入水中用摄
7、像头记录 内大鼠停止挣扎、在水中漂浮不动状态的时间即游泳不动时间 每次测试后更换圆桶中的水用毛巾擦干大鼠然后转移到干燥的笼子中.平衡木实验在进行强迫游泳实验后将大鼠进行平衡木实验将长 、直径为.的圆柱形木棍两端放上塑料平台作为起点和终点平衡木距离地面约 地面上铺有泡沫垫以及棉被以防大鼠摔伤记录 组大鼠穿过平衡木的时间.标本采集 行为实验结束后将大鼠麻醉通过腹主动脉采集 血液经 /离心 取上清液保存在处死后分离大鼠海马组织 只固定在 多聚甲醛用于免疫荧光染色 只保存在用于 检测.试剂盒检测炎性因子水平将.保存河北医药 年 月 第 卷 第 期 在 的血清按照 试剂盒说明书检测、水平.免疫荧光染色检
8、测小胶质细胞、星形胶质细胞活性 取固定在 多聚甲醛的海马组织经石蜡包埋脱蜡成水 制成约 的切片 将切片在含.的 中处理 封闭在 羊血清封闭液半小时然后在 下与以下一抗孵育过夜:离子钙结合衔接分子()和神经胶质原纤维酸蛋白()使用 标记的山羊抗兔(二抗)孵育 冲洗后 染色用防荧光淬灭封片剂封片图像采集使用荧光显微镜 阳性染色细胞数分析使用 系统.检测/信号通路蛋白水平将.保存在 只大鼠的海马组织在 缓冲液中裂解、匀浆 法测定蛋白浓度后将蛋白质样品在 凝胶上运行转移到 膜上用 脱脂牛奶在室温下封闭 后与一 抗 ()、()、()、()、()、()、()和 抗体()在 下孵育过夜次日与二抗孵育后加入显
9、色剂 软件分析目的蛋白条带.统计学分析 应用 .统计软件计量资料呈正态分布后以 表示单因素方差分析用于计算多组间差异进一步 组之间比较用 检验.为差异有统计学意义 结果.对大鼠行为学结果的影响与 组相比 组站立次数、饮用蔗糖量显著减少(.)游泳不动时间、通过平衡木时间显著增加(.)与 组相比 组站立次数、饮用蔗糖量显著增加(.)游泳不动时间、通过平衡木时间显著减少(.)而 组以上行为学结果趋势相反(.)与 组相比 组站立次数、饮用蔗糖量显著下降差异有统计学意义(.)游泳不动时间、通过平衡木时间显著升高差异有统计学意义(.)见表 表 组大鼠行为学实验结果比较 组别站立次数(次)饮用蔗糖量()游泳
10、不动时间()通过平衡木时间()组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.对大鼠炎性因子水平的影响 与 组相比 组、含量显著增加(.)与 组相比 组、含量显著减少(.)而 组、水平趋势相反与 组相比 组、含量显著升高(.)见表 表 对大鼠、水平的影响 组别(/)(/)(/)组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.对大鼠小胶质细胞、星形胶质细胞数量的影响 与 组相比 组、阳性细胞数量显著增多(.)与 组相比 组、阳性细胞数量显著减少(.)而 组、阳性细胞数量趋势相反与 组相比 组、阳性细胞数量显著升高(.)见表 图 表 对大鼠、阳性细胞数量的影响 组别 阳性细
11、胞数量(个)阳性细胞数量(个)组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.对大鼠、蛋白水平的影响与 组相比 组、蛋白水平显著上升(.)与 组相比 组、蛋白水平显著下降(.)而 组、蛋白水平趋势相反与 组相比 组、蛋 白 水 平 显 著 升 高(.)见图 表.对大鼠/通路蛋白水平的影响 与 组相比 组/、河北医药 年 月 第 卷 第 期 图 免疫荧光染色检测大鼠、阳性细胞数量图 法检测、蛋白水平表达 组 组 组 组 组表 对大鼠、蛋白水平的影响 组别/组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较./蛋白水平显著升高(.)与 组相比 组/、/蛋白水平显著下降(.)而
12、组/、/蛋白水平趋势相反(.)与 组相比组/、/蛋白水平显著上调(.)见图 表 讨论 是一种常见的精神障碍疾病严重限制患者的社会心理功能并降低生活质量 年世卫组织将重度 列为全球第三大疾病负担原因并预测到 年该疾病将排名第一图 法检测/通路相关蛋白表达 组 组 组 组 组表 组大鼠/信号通路蛋白水平比较 组别/组.组.组.组.组.注:与 组比较.与 组比较.与 组比较.是一种二萜内酯化合物先前的研究证实 具有解热镇痛、抗炎、抗菌、抗病毒、免疫调节、抗肿瘤、神经保护、保肝、胆囊保护和抗心血管疾病的活性 可以通过减轻炎性反应缓解焦虑和抑郁等精神疾病 等也证实 可以抑制神经炎症的发生缓解 大鼠抑郁样
13、行为 本研究通过采用 结合孤样方式构建 大鼠模型结果发现 大鼠立次数、饮用蔗糖量显著减少而河北医药 年 月 第 卷 第 期 游泳不动时间、通过平衡木时间显著增加表明 大鼠造模成功 炎性细胞因子的过量产生是导致神经系统炎症的关键因素这对于 的精神病理学至关重要是海马神经发生下降的原因而海马神经发生又与抑郁样行为的发展有关这表明 在 的发病机制中起关键作用 是细胞内模式识别受体主要由 组成研究表明 炎症小体参与应激诱导的抑郁其可能是治疗抑郁的潜在靶点 抑郁很可能是小胶质细胞疾病的一种抑制小胶质细胞的激活可以减轻 诱导的抑郁和焦虑样行为 本研究结果显示 治疗后大鼠、含量、阳性细胞数量、蛋白水平显著下
14、降表明 可以减轻 大鼠神经炎症 研究报道称 可以通过激活、促进促炎相关的高度浸润性癌症鼻咽癌的发生 等也发现柴胡皂苷 可以通过调控/信号转导减轻巨噬细胞炎性反应进而治疗炎症相关疾病 等也发现下调/信号轴可以对 诱导的 大鼠抑郁样行为起到改善作用 本研究结果与其一致 大鼠体内/、/蛋白高表达而 治疗后/、/蛋白水平显著下降暗示 可能通过下调/信号通路减轻神经炎症对 大鼠抑郁样行为起到改善作用 为了进一步证实该结论我们对 大鼠灌胃/信号通路激活剂 结果显示 组大鼠加重了炎性反应以及抑郁样行为且 逆转了 对 大鼠的抗抑郁样效果 综上所述 可能通过抑制/信号轴来改善 大鼠抑郁样行为及神经炎症 然而其它用于治疗 的药物同样可能通过调控/信号轴发挥相同功效需要我们下一步继续探究参考文献 .:.():.():.:.():.():./.:.:.():.().:./.:.:/.:.韩涵韩健曹蕾.氟西汀联合毛蕊花糖苷改善抑郁症大鼠抑郁行为、学习记忆能力和上调 水平.解剖学杂志():.():.:.():.():.():./.:.():./.():.(收稿日期:)河北医药 年 月 第 卷 第 期