1、国际生殖健康/计划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan，Ju l y 2 0 2 3,Vo l.42,No.4D0I:10.12280/gjszjk.2023011951例卵巢癌患者BRCA1/2基因突变的分析277.论著葛艳,许飞雪，李虹维，高明霞【摘要】目的：评估BRCA1/2基因突变状态与卵巢癌患者临床特征的相关性及对预后的影响。方法：选取2 0 17 年11月一2 0 2 2 年6 月在兰州大学第一医院进行治疗的51例接受BRCA1/2基因检测的卵巢癌患者作为研究对象，根据检测结果分为BRCA1/2突变组（30 例）和BRCA1
2、/2正常组(2 1例）。比较2 组患者的临床基线资料、临床病理特征和预后,分析影响BRCA1/2基因突变的卵巢癌患者预后的相关因素。结果:BRCA1/2突变组与BRCA1/2正常组相比，发病年龄、体质量指数(body mass index,BMI)、恶性肿瘤家族史、治疗前糖类抗原12 5（c a r b o h y d r a t e a n t i g e n 12 5,CA 12 5）及人附睾蛋白4(human epididymis protein 4,HE4)差异均无统计学意义（均P0.05）。BRCA 1/2 突变组与BRCA1/2正常组肿瘤分期及淋巴结转移情况比较，差异有统计学意义（
3、P0.05).Therewere significant diferences in the tumor stage and lymph node metastasis between the BRCA1/2 mutation groupand the BRCA1/2 non-mutation group(P0.05).Multivariate Cox analysis showed that the BRCA1/2 genemutation was not an independent prognostic factor for survival and PFS in ovarian can
4、cer(HR=0.752,95%CI:0.394-1.435,P=0.329).Conclusions:The BRCA1/2 gene mutation is an important factor in determining theclinical treatment of ovarian cancer,and it is significantly related to tumor stage and lymph node metastasis.However,the BRCA1/2 gene mutation could not be an independent risk fact
5、or for ovarian cancer.Keywords Ovarian neoplasms;Genes,BRCAl;Genes,BRCA2;Genes;Mutation;Prognosis;Proportionalhazards models(J Int Reprod Health/Fam Plan,2023,42:277-281)卵巢癌(ovarian cancer,Oc)是女性生殖系统常见的一种恶性肿瘤,由于该病早期症状不明显而不容易被发现且盆腔种植转移早,其发病率位居妇科恶性肿瘤第3位,病死率高居妇科恶性肿瘤之首,5年生存率约为2 0%。世界卫生组织第5版女性生殖道基金项目：甘肃省
6、自然科学基金（2 1JR7RA378）；兰州大学第一医院院内基金(ldyyn2018-05)作者单位：7 30 0 30 兰州大学第一医院（葛艳，许飞雪，高明霞）；兰州大学第一临床医学院（李虹维）通信作者：高明霞，E-mail：g a o mx 0 5 16 3.c o m肿瘤分类将卵巢癌分为至少5种主要且不同的类型：高级别浆液性癌、低级别浆液性癌、子宫内膜样癌、透明细胞癌和黏液癌2。不同类型卵巢癌的危险因素、前驱病变、发病机制、扩散模式、分子特征、临床病程、对化疗的反应及治疗结局并不相同。由于卵巢癌的发病机制尚不明确，且有多种因素（包括遗传、经济、环境、生活方式等)参与了卵巢癌的发生，而目前
7、还没有用于早期检测的筛查公共计划,因此，卵巢癌的早期检测依然非常困难，多数患者确诊时已到晚期,并已发生转移3。卵巢癌的发生机制虽未278阐明,但越来越多的证据表明,遗传因素在卵巢癌的病因学中起着重要作用。BRCA1和BRCA2是最广为人知的卵巢癌遗传易感基因,BRCA基因突变增加了卵巢癌的遗传风险,有研究发现BRCA1基因突变女性的卵巢癌发病风险是BRCA2基因突变女性的34倍4。本研究通过对51例卵巢癌患者BRCA基因进行检测,并分析其临床及病理特征、结局预后,探索卵巢癌BRCA基因突变与患者临床、病理学特征的相关性,并进一步对相关影响因素进行分析。1对象与方法1.1研究对象选取2 0 17
8、 年11月一2 0 2 2 年6 月在兰州大学第一医院治疗的51例接受BRCA1/2基因检测的卵巢癌患者作为研究对象，年龄34 7 2 岁，中位年龄54.3岁。本研究经兰州大学第一医院医学伦理委员会审核获批准（批号LDYYLL2023-244）。纳人标准：病理组织学类型为卵巢癌；未合并其他系统或器官恶性肿瘤；初始治疗进行了满意的卵巢肿瘤细胞减灭术(primary debulking surgery,PDS)或新辅助化疗（neoadjuvantchemotherapy,NAC)联合中间肿瘤细胞减灭术(interval debulking surgery,IDS），且2 种治疗方式的人组患者均接受
9、了一线铂类药物化疗，化疗疗程共6 8 个周期，上述治疗结束后疗效评价为缓解；均未接受任何多腺苷二磷酸核糖聚合酶poly(ADP-ribose)polymerase,PARP抑制剂治疗。排除标准：存在其他重大器官疾病;合并其他系统或器官恶性肿瘤；一线治疗期间，同步接受其他肿瘤放疗。1.2研究方法收集患者的发病年龄、体质量指数（bodymass index,BMI）肿瘤家族史（一级或二级亲属）治疗前糖类抗原12 5（carbohydrateantigen125，CA 12 5）水平、人附睾蛋白4(humanepididymis protein4,HE4）水平、淋巴转移与否、临床分期、肿瘤分级、病理
10、类型、治疗方式、复发情况、是否铂敏感复发、是否突变及突变位点分析等数据，电话随访或门诊随访，获取患者是否复发和生存状态。人组患者有完整的病历信息，经过正规系统的治疗，治疗方式包括肿瘤细胞减灭术、中间细胞减灭术、单纯化疗，化疗均是以铂类为基础的化疗方案。治疗及生存指标定义：无进展生存期（progression-freesurvival,PFS)指治疗结束(末次化疗日期)至肿瘤进展(第一次复发)或2 0 2 3-0 1-2 0 的间期。初始治疗后PFS6个月为铂敏感复发，6 个月为铂耐药复发。1.3BRCA基因突变检测人组51例患者均自愿接受BRCA1/2基因检测,签署了知情同意书。抽取患者静脉血
11、5mL，置人含乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)的抗凝管，送至上海鼎晶生物医药科技有限公司进行高通量DNA测序，采用二代测序（nextgenerationsequencing，NGS）技术,BRCA检测包括通过NGS技术检测的BRCA1、BRCA2基因的全外显子及毗邻剪接区域，检测的变异类型为国际生殖健康/计划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan,July2023,Vol.42,No.4点突变、小片段插人/缺失和重复。根据检测结果将患者分为BRCA1/2突变组（30 例）和BRCA1
12、/2正常组（2 1例）。1.4信息分析本检测基于多重聚合酶链反应法的核酸序列靶向捕获及高通量测序技术，测序平台为illumina_nextseq2000_VH00185。检测覆盖10 0%的碱基替换突变（95%CI:82%100%）及95%的小片段插入缺失突变（95%CI:98.5%10 0%）。数据通过BWA-MEM软件与人类参考基因组(version hg19)进行比对,Variant calls采用sentieon(version20201001)软件，分析流程涉及软件及版本号为fastp(version 0.23.0)bwa(version 0.7.17)、s a m t o o ls
13、 (v e r s io n 1.9),annovar(version 20180416),cnvkit(version 0.9.7),msisensor2(version2.0)和genefuse(version0.6.1）。数据校准与突变注释使用的软件为TOPGEN自主知识产权分析软件（version即时更新），突变注释的主要参考数据库包括Clinvar（v e r s i o n20220624),Intervar(version 20180118),C0SMIC(version 70),g1000（v e r s i o n 2 0 15a u g),EXA C（v e r s i o
14、 n 0 3),d b n s f p(v e r s i o n35a）、a v s n p（v e r s i o n 150）、T O PG EN自建中国人群数据库(version即时更新)等。1.5统计学方法采用SPSS25.0统计学软件对数据进行分析。定性资料以例数（%）表示，组间比较采用卡方检验。PFS生存分析采用Cox回归生存分析并进行Log-rank检验。P0.05）。见表1。2.2BRCA1/2突变位点及突变类型BRCA1共检测到3种移码突变，3种错义突变，4种终止突变，3种剪接突变，1种同义突变，1种无义突变，1种大片段重排，1种非移码缺失突变;BRCA2共检测到3种移码突
15、变，6 种错义突变，5种终止突变，1种同义突变，1种杂合突变，1种重复突变。具体情况见表2。2.32组患者临床病理特征比较BRCA1/2突变组的肿瘤分期 I V 期占比以及淋巴结转移发生率均高于BRCA1/2正常组,差异有统计学意义（P0.05)。见表3。2.4生存结局分析BRCA1/2突变组中位生存时间为2 年,BRCA1/2正常组为1.7 年。将BMI、肿瘤分期、是否淋巴结转移、是否铂敏感复发这4个因素纳入多因素Cox回归分析中，结果显示,BRCA1/2突变不是卵巢癌生存率及PFS的独立预后因素（HR=0.752,95%CI:0.3941.435,P=0.329)。见图1。国际生殖健康/计
16、划生育杂志2 0 2 3年7 月第42 卷第4期JIntReprodHealth/FamPlan，Ju ly 2 0 2 3，V o l.42,No.43讨论卵巢癌是一种常见的女性生殖系统肿瘤，常发生于40 6 0 岁女性。卵巢癌的诊断通常需要结合影像学、病理学检查以及肿瘤标志物。卵巢恶性肿瘤风险值(risk of ovarianmalignancy,ROMA)基于绝经状态以及CA125和HE4水平进行计算，可以更好地鉴别卵巢良恶性肿瘤、有效辅助评估卵巢癌风险、监测卵巢癌患者治疗效果和疾病进展。由于卵巢癌的早期症状往往不明显,发病机制也尚不明确,故确诊时常已为晚期。有研究发现BRCA1/2基因突变显著增加卵巢癌的风险，且BRCA1/2突变携带者患卵巢癌通常预后更差。本研究旨在探讨BRCA1/2基因突变与卵巢癌临床及病理特征的相关性。3.1 BRCA1/2突变与卵巢癌抑癌基因,在DNA修复、细胞周期控制和细胞凋亡中发挥关键作用。BRCA1和BRCA2的种系突变与乳腺癌和卵巢癌的风险增加有关。一般来说，BRCA1突变携带者患卵巢癌的终生风险估计为2 7%44%,而BMI(kg/m)组别nB