1、184国际消化病杂志 2023 年 6 月 25 日第 43 卷第 3 期 Int J Dig Dis，June 25，2023，Vol.43，No.3 论著 LINC01224 靶向 miR-485-5p 调节 PAK4 表达影响 结直肠癌术后复发的研究 马胜辉 王春华 李建华 王 翔【摘要】目的 探究长链非编码 RNA（lncRNA）LINC01224 靶向 miR-485-5p调节 p21 激活激酶 4（PAK4）的表达，继而影响结直肠癌（CRC）患者术后复发的分子机制。方法 选取 2019 年 1 月至 2022 年 1 月承德市中心医院病理科归档的病历资料完整的 96 例患者的 CR
2、C 组织，其中 54 例未复发患者设为未复发组，42 例局部复发、转移患者设为复发组。采用实时荧光定量 PCR 法检测 2 组 CRC 组织中LINC01224、miR-485-5p 和 PAK4 的表达水平。将人 CRC 细胞 CACO-2 和 HCT116各分为 3 组，分别制备 2 种细胞的对照组（为正常培养细胞）、NC 组（为转染阴性组，转染 NC-siRNA 慢病毒质粒）和 LINC01224 下调组（转染 LINC01224-siRNA 慢病毒质粒）。采用 CCK-8 法、细胞划痕实验和 Transwell 实验分别检测各组细胞的增殖、迁移和侵袭能力，荧光素酶报告实验鉴定 LINC
3、01224 与 miR-485-5p、miR-485-5p 与PAK4 的靶向关系，蛋白质印迹法检测 PAK4 蛋白的表达水平。结果 与未复发组患者相比，复发组患者 CRC 组织中 LINC01224 和 PAK4 表达水平均显著升高，miR-485-5p 表达水平显著降低（P 均0.01）。与 NC 组和对照组细胞相比，LINC01224下调组细胞的增殖、迁移和侵袭能力均显著减弱（P0.05，P0.01，P0.01），而NC 组与对照组细胞的差异均无统计学意义（P 均0.05）。荧光素酶报告实验结果显示，LINC01224 与 miR-485-5p、miR-485-5p 与 PAK4 均存在
4、靶向关系。LINC01224下调组细胞的 PAK4 蛋白表达水平较 NC 组和对照组均显著降低（P 均0.01）。结论 下调 LINC01224 的表达可以抑制 CRC 细胞的增殖、迁移和侵袭，其机制可能是 LINC01224 靶向 miR485-5p 调节 PAK4 的表达，从而影响 CRC 术后复发。【关键词】LINC01224；人结直肠癌细胞；迁移；侵袭；靶向关系DOI:10.3969/j.issn.1673-534X.2023.03.010LINC01224 targeted miR-485-5p regulation of PAK4 expression and its impact
5、 on postoperative recurrence of colorectal cancer MA Shenghui,LI Jianhua,WANG Xiang.Department of Oncology,Chengde Central Hospital,Chengde 067000,China;WANG Chunhua.Department of General Surgery,Hengshui Eighth Hospital,Hengshui 053000,China【Abstract】Objective This paper intends to explore the mole
6、cular mechanism of long chain non-coding RNA(lncRNA)LINC01224 targeting miR-485-5p regulating the expression of p21 activated kinase 4(PAK4),which then affects the postoperative recurrence of colorectal cancer(CRC)patients.Methods From January 2019 to January 2022,the CRC tissues of 96 patients with
7、 complete medical records archived by the Pathology Department of Chengde Central Hospital were selected,of which,54 non recurrent patients were assigned to the non recurrent group,and 42 locally recurrent and metastatic patients were assigned to the recurrent group.Real time fluorescence quantitati
8、ve PCR was used to detect the expression levels of LINC01224,miR-485-5p,and PAK4 in the two groups of CRC tissues.Human 基金项目：河北省医学科学研究课题（20211022）作者单位：067000 承德市中心医院肿瘤科（马胜辉、李建华、王翔）；053000 衡水市第八医院普外科（王春华）185国际消化病杂志 2023 年 6 月 25 日第 43 卷第 3 期 Int J Dig Dis，June 25，2023，Vol.43，No.3CRC cells CACO-2 and
9、HCT116 were divided into three groups respectively,and the control group(normal cultured cells),the NC group(negative transfection group,transfected with NC siRNA lentivirus plasmid)and the LINC01224 down-regulation group(transfected with LINC01224 siRNA lentivirus plasmid)of the two kinds of cells
10、were prepared respectively.The CCK-8 method,the cell scratch test,and the Transwell test were conducted to detect the proliferation,migration,and invasion of cells in each group.The luciferase report assay was used to identify the targeting relationship between LINC01224 and miR-485-5p,miR-485-5p an
11、d PAK4,while western blotting was used to detect the expression level of PAK4 protein.Results Compared with the non recurrent group,the expression levels of LINC01224 and PAK4 in the CRC tissue of the recurrent group are significantly increased,while the expression level of miR-485-5p is significant
12、ly reduced(P0.05,P0.01,P0.01).Compared with the cells of the NC group and the control group,the proliferation,migration,and invasion abilities of the cells of the LINC01224 downregulated group are significantly reduced(P0.05,P0.01,P0.01),while the differences between the cells of the NC group and th
13、e control group are not statistically significant(P0.05).The results of the luciferase report assay show that LINC01224 has a targeting relationship with miR-485-5p,while miR-485-5p has a targeting relationship with PAK4.Compared with the NC group and the control group,the expression level of PAK4 p
14、rotein in the cells of the LINC01224 downregulated group is significantly reduced(P0.01).Conclusions Downregulating the expression of LINC01224 can inhibit the proliferation,migration,and invasion of CRC cells.The mechanism may be that LINC01224 targets miR485-5p to regulate the expression of PAK4,t
15、hereby affecting postoperative recurrence of CRC.【Key words】LINC01224;Human colorectal cancer cells;Migration;Invasion;Targeting relationship结直肠癌（CRC）的发病原因中，除了人口老龄化和饮食习惯因素外，肥胖、缺乏体育锻炼和吸烟等因素也会增高 CRC 的发病风险1。目前CRC 的临床治疗包括内镜下切除、外科手术切除、转移性肿瘤的局部消融治疗、放射治疗、化学治疗、靶向治疗和免疫治疗2。由于 CRC 患者多在晚期出现症状而贻误了诊断和治疗时机，因此提高早期诊
16、断率可以显著降低 CRC 患者的病死率和改善预后。长链非编码 RNA（lncRNA）是长度大于200个核苷酸的非编码RNA，其在调控表观遗传、细胞周期和细胞分化中扮演着重要角色，在多种恶性肿瘤发生、发展中起着重要作用。研究表明CRC 组织中 lncRNA LINC01224 表达上调，并可分泌 miR-2467 促进 CRC 进展3。LINC01224 还可靶向子宫内膜癌组织中 miR-485-5p 调节丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶 3（AKT3）的表达，以促进细胞增殖并抑制细胞凋亡4。目前 LINC01224 在 CRC 中作用机制尚不明确。表观遗传学研究表明，miR-485-5p 和 p21 激活激酶 4（PAK4）是 CRC 的潜在生物标志物和抑癌因子，其参与了多条信号通路，影响肿瘤细胞的增殖、侵袭、迁移及凋亡，对肿瘤的发生和发展起着重要作用5-6。本课题组推测在 CRC中，LINC01224 可能通过调控 miR-485 影响 CRC 细胞的恶性生物学行为，因此本研究分析了不同预后患者的 CRC 组织中 LINC01224 表达水平，并探究了下调 LINC01224 表达对 CRC