1、第 卷第期 年月西 安 交 通 大 学 学 报（医 学 版）（）本刊网址：微信公众号：西安交通大学学报医学版基础研究 基因 和 位点多态性在广西人群的分布刘潮，罗艳萍，谷嬉嬉，陈健明，蓝艳，韦叶生（桂林医学院附属医院检验科，广西桂林 ；右江民族医学院附属医院皮肤科，广西百色 ）摘要：目的研究 基因 和 在广西健康人群中的分布特点，并将其多态性与其他地区人群的分布进行比较。方法对 例广西健康人群 和 位点采用高通量 技术进行基因分型检测，并将结果与人类基因组计划（）公布的不同人群基因多态性数据进行比较。结果在广西健康人群中 位点存在种基因型，为（）、（）和（），其中、等位基因频率分别为、。位点基
2、因存在种基因型为（）、（）和（），其中、基因频率为、。将两位点检测结果与 公布的 、及 基因型数据比较，差异均有统计学意义（）；而与 、相比，两位点基因型和等位基因频率差异均无统计学意义（）。位点三种基因型人群血脂之间比较，携带 基因型人群的高密度脂蛋白胆固醇（）与组比较，差异具有统计学意义（）。结论广西健康人群 基因 和 位点多态性与其他区域存在不同程度差异，位点多态性与 水平高低有关。关键词：；基因多态性；广西人群；血脂中图分类号：文献标志码：，（，；，）：，（），（），（）（），（），（）（），（），（），（）（）：；收稿日期：修回日期：基金项目：国家自然科学基金项目（、）；广西自然科学
3、基金项目（）；桂林医学院硕士研究生科研项目（）（，），（），（）通信作者：韦叶生，教授 ：网络出版时间：网络出版地址：期刘潮，罗艳萍，谷嬉嬉，等 基因 和 位点多态性在广西人群的分布本刊网址：微信公众号：西安交通大学学报医学版 是一类长度为 个核苷酸的内源性非编码小分子 ，通过与靶 的 区特异性结合，从而降解靶 或者抑制其表达。还参与调控细胞增殖、分化与凋亡等多种生物学过程，在机体正常发育、新陈代谢及疾病发生发展等过程中发挥着重要作用。基因作为目前临床心脑血管疾病研究广泛的 之一，其主要机制包括 可以通过与靶基因活化蛋白、细胞程序性死亡蛋白结合，加重心肌细胞凋亡、氧化损伤和自噬，降低 表达能够
4、减轻缺血再灌注损伤心肌细胞氧化应激损伤、炎症反应，从而抑制心肌细胞凋亡、自噬；除了参与体内众多复杂过程的调控外，基因还被证明在短暂性脑缺血发作、心肌梗死和冠心病等多种心脑血管疾病中异常表达，并通过调控机制使这些疾病朝着不同的方向改变。血脂异常是上述多种心脑血管疾病的独立危险因素，早期发现和血脂控制是避免心脑血管疾病发生的重要手段。已有多位学者对不同人群血脂水平与相关基因的单核苷酸多态性（）进 行 研 究，而 关 于 基 因 和 位点单核苷酸多态性的研究在国内外尚未查阅到有关的文献报道。因此，本研究对广西健康人群 基因 和 位点采用高通量 技术进行基因分型检测，以探究其在不同种族健康人群中的分布
5、特征，并进一步分析两位点基因多态性与血脂指标的相关性，为今后对 基因在相关疾病进程中的机制研究提供新思路，为群体遗传学在地区的研究提供参考资料，丰富广西人群基因数据库。对象与方法研究对象随机选取 年月至 年月来桂林医学院附属医院体检的无亲缘关系的体检人群 例，其中女性 例，男性 例，年龄 岁，排除患有重大疾病如血液性疾病、肿瘤感染、心脑血管疾病及癌症等。本研究通过本院伦理委员会审批。位点选择依据通过 网站查找 基因多态性情况，尽量选取标签 （）；已经被 基因组计划（）扫描过的位点；亚洲人群中次要等位基因频率大于 的位点，即 ；经过筛选，最终 基因 、基因 被用于进一步研究。临床样本的采集及处理
6、抽取研究对象晨起静脉血 于 抗凝采血管中，用于全血基因组 提取；另外，采集入组研究对象晨起空腹静脉血 于生化管中，用于血脂生化指标的检测。放入 冰箱保存备用。基因组 提取采用 抗 凝管 收集各体检者静脉 血，血液基因组 提取试剂盒（吸附柱法）购自北京天根生化科技有限公司，并按照其说明书方法提取基因组，将提取的 放置 冰箱分装储存。选取 样本浓度在 范围之间、值在范围之间的合格样本用于后续基因分型实验。引物的设计与合成登录 查 询 基 因 和 的 序 列，引 物 序 列 的 设 计 采 用 在线软件进行设计，将设计好的引物序列交给上海天昊公司公司合成。引物序列如下。：上游 ，下游 ：上游 ，下游
7、 。连接和多重荧光 反应及基因分型检测连接反应：反应体系总体积均为，其中包括 缓 冲 液、引物、聚合酶和模板，剩余体积用灭菌双蒸水补足。连接反应参数如下，循环次，。多重荧光 扩增：反应体系总体积 ，其中包括上述连接产物，缓冲液 ，聚合酶，多重荧光扩增引物，灭菌双蒸水。多重荧光 反应参数如下，（每个循环降低），循环次；，循环 次；。基因分型：将上述得到的产物经 稀释 倍并振荡混匀后，取 该混合液与 ，混匀，变性 后在 测序仪上检测，软件分析原始数据。血脂相关指标检测采集各受试者空腹 静脉血，以 离心 ，分离血清，用全自动生化分析仪检测血西 安 交 通 大 学 学 报（医 学 版）第 卷本刊网址：
8、微信公众号：西安交通大学学报医学版清总胆固醇（，）、三酰甘油（，）、高密度脂蛋白胆固醇（，）、低 密 度 脂 蛋 白 胆 固 醇（，）。统计学分析将所得到的实验结果用 软件进行统计分析。其中，采用直接计数法统计两位点的基因型和等位基因频率的分布，之后用 软件对两位点的基因型和等位基因频率的分布用检验来分析，对符合正态分布的血脂等计量资料采用检验，均值标准差（?）表示，为差异有统计学意义。结果 基因 和 研究对象的一般临床资料参与研究的对象一共 名。临床资料见表。表研究对象临床资料 临床资料（）基本信息年龄（?）性别（男女）胆固醇（）三酰甘油（）高密度脂蛋白胆固醇（）低密度脂蛋白胆固醇（）基因
9、和 两位点基因分型检测结果分型结果显示，存在（）、（）及 （）种基因型，等位基因、频率分别为 、。位点存在（）、（）以及 （）种基因型，等位基因、频率为、。基因分型结果见图、图。、：箭头分别表示、基因型。图 基因 位点测序图 、：箭头分别表示、基因型。图 基因 位点测序图 期刘潮，罗艳萍，谷嬉嬉，等 基因 和 位点多态性在广西人群的分布本刊网址：微信公众号：西安交通大学学报医学版广 西 健 康 人 群 基 因 和 位点多态性的分布情况在广 西 健 康 人 群 基 因 和 位点中，常见的基因型分别为 （）和（），其次为 （）和 （）；其中，频 率 最 高 的 等 位 基 因 分 别 为（）和（）
10、。通过比较两位点的基因型和等位基因频率在男 女 性 别 间 的 分 布 发 现 差 异 无 统 计 学 意 义（，表）。广西健康人群 基因 和 两位点多态性与不同种族人群间的比较将广西健康人群 、两位点基因型和等位基因频率与 公布的 、及 基因多态性数据进 行 比 较（群 体 数 据 来 自 以 下 网 站：），结果显示三者差异均有统计学意义（）；而将结果与 、相 比，、基因型和等位基因频率两者差异均无统计学意义（，表，表）。基因 和 两位点不同基因型血脂水平比较广西人群 位点、基因型携带者之间各血脂指标差异均无统计学意义（）；位点、基因型携带者之间，、和 比较，差异没有统计学意义（）；组与
11、组 比较，差异有统计学意义（），组 水平较组高（表，表）。表广西健康人群 基因 和 基因型和等位基因频率分布 组别基因型频率（）等位基因频率（）男 （）（）（）女 （）（）（）合计 （）（）（）（）（）（）（）（）（）男 （）（）（）女 （）（）（）合计 （）（）（）（）（）（）（）（）（）表广西健康人群 基因 基因型和等位基因频率与不同人群的比较 组别基因型频率（）等位基因频率（）广西人群 （）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（），北欧和西欧血统的犹他州人群；，北京汉族人群；，日本东京人群；，意大利托斯卡纳人群；
12、，非洲尼日利亚伊巴丹约鲁巴人人群。西 安 交 通 大 学 学 报（医 学 版）第 卷本刊网址：微信公众号：西安交通大学学报医学版表广西健康人群 基因 基因型和等位基因频率与不同人群的比较 组别基因型频率（）等位基因频率（）广西人群 （）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（）（），北欧和西欧血统的犹他州人群；，北京汉族人群；，日本东京人群；，意大利托斯卡纳人群；，非洲尼日利亚伊巴丹约鲁巴人人群。表广西人群 基因 位点不同基因型血脂水平比较 （，?）位点基因型 与 比较，。表广西人群 基因 位点不同基因型血脂水平比较 （，?）位
13、点基因型 讨论 基因作为临床研究广泛的 之一，位于人类第 号染色体上。本研究将 基因两位点多态性与 公布的个人群基因多态性数据比较发现，两位点的基因型和等位基因频率同 、及 相比有统计学差异，与 相比无统计学差异。可 能 是 因 为 广 西 人 群 与 和 人群 所 处 地 区 同 属 于 亚 洲 地 区，与 等相比地缘关系相对较近，因此，两位点的遗传多态性分布差异相对较小，与遗传学定律中所描述的“亲缘关系越近，其基因型的分布越相似，反之则差异越显著”相符。而 、和 种人群大多数为白种人、黑种人，广西人群为黄种人，其地缘关系、亲缘关系都相对较远，多种影响因素阻碍了种族间遗传物质的交流，久而久之
14、，出现了各群体发生的遗传变异朝着不同的方向发展的现象，这可能是导致遗传多态性在上述种人群中呈现出不同程度差异的原因之一。基因多态性受多种因素的影响，常见的影响因素包括地理位置、种族、生活环境、饮食习惯的不同及遗传突变等。同一 位点与同一疾病的遗传易感性在不同的地域、人群间也存在不同程度的差异，而同一 位点基因多态性的差异也能引起不同的疾病。例如，等研究发现，（）多态性的 等位基因与冠状动脉疾病的风险相关，然而 等研究发现，基因多态性与胃癌风险升高之间有关联。本次研究结果表明，由于不同种族的遗传背景、生活方式等不同，同一 位点在不同种族间存在不同程度的差异。随着人类基因组计划不断完善，越来越多的
15、研究发现微小 与肿瘤 、癌症 等多种疾病的发生发展相关。而 基因在多种疾病的发生发展过程中有重要作用，例如，在非小细胞肺癌（）中下调，可能通过靶向 通路阻止上皮间质转化（）的激活，降低 细胞的迁移和侵袭能力。因期刘潮，罗艳萍，谷嬉嬉，等 基因 和 位点多态性在广西人群的分布本刊网址：微信公众号：西安交通大学学报医学版此，可能代表了一个通过靶向 通路来诊治非小细胞肺癌的新靶点。基因在包括动脉粥样硬化和心肌梗死在内的冠状动脉疾病中表达升高。血脂水平异常与动脉粥样硬化的发生发展密切相关，因此，积极控制、干预血脂水平对于以动脉粥样硬化为病理基础的疾病防治有着重大的意义。体内脂质代谢受环境、遗传以及遗传
16、环境等多种因素相互作用的影响，而且这种遗传变异通常存在种族特异性。人类可遗传变异中最常见是 ，是指在基因组的水平上由于单个核苷酸突变引起的 序列多态性。例如，等 研究发现，北京汉族人群血清 在不同基因型之间存在差异。本研究发现，广西人群 位点 基因型的 水平较 基因型 水平低，提示 位点基因多态性与血清 水平存在相关性。综上所述，基因 和 两位点在中国广西人群中存在基因多态性，其多态性与不同种族之间比较存在不同程度的差异，不仅为解释 基因与其相关疾病的发生在不同种族间表现的差异提供一个新的方向，而且还丰富了人类群体遗传学资料，为进一步相关疾病防治的研究提供了参考资料。参考文献：，：，（）：，：，：，：，：，（）：，（）：，（）：，（），（）：，（）：，（）：，：，（）：，：，（）：，（）：李建军血脂异常与动脉粥样硬化关系的现代观念中国循环杂志，（）：，（）：，（）：，（）：（编辑卓选鹏）