1、第53卷精细化工中间体不同炮制温度对盐杜仲主要有效成分含量的影响管松滨1，胥骞2，卢白荟2，龚妹1，彭东明2*，卢茂芳2（1.湖南振兴中药有限公司，湖南 长沙 410299；2.湖南中医药大学 药学院，湖南 长沙 410208）摘要：比较盐杜仲不同温度下炮制前后主要化学成分松脂醇二葡萄糖苷的变化，推测其适宜炮制温度并优化炮制工艺参数。依据 中华人民共和国药典（2020年版）中的“断丝”指标，考察不同炮制温度对杜仲“断丝”程度的影响，优化杜仲炮制工艺参数。采用高效液相色谱（HPLC）分析杜仲生品和盐炙品主要化学成分的差异，研究炮制工艺对杜仲质量的影响。结合实验数据确定杜仲炮制温度为110，时间控
2、制在8 min左右。高温炮制后杜仲化学成分含量明显降低，其主要有效成分松脂醇二葡萄糖苷（PDG）也大幅减少。采用HPLC方法，分析炮制前后杜仲主要化学成分的变化，为杜仲盐炙工艺和盐杜仲的质量控制提供了更可行的参数依据。关键词：盐杜仲；炮制温度；HPLC分析；松脂醇二葡萄糖苷中图分类号：R917文献标志码：A文章编号：1009-9212（2023）01-0034-05DOI：10.19342/ki.issn.1009-9212.2023.01.007Effects of Processing Temperatures on the Content of Main Active Component
3、s in Salt EucommiaGUAN Song-bin1,XU Qian2,LU Bai-hui2,GONG Mei2,PENG Dong-ming2*,LU Mao-fang2(1.Hunan Zhenxing Traditional Chinese Medicine Co.,Ltd.,Changsha 410299,China;2.College of Pharmacy,Hunan University of Chinese Medicine,Changsha 410208,China）Abstract：Based on the changes of the main chemic
4、al contents in pinoresinol diglucoside(PDG)before andafterprocessingatdifferenttemperaturesofSaltEucommiatheoptimumprocessingparametersweredetermined.According to the broken silk index in Pharmacopoeia of the Peoples Republic of China(2020 edition),the effect of different processing temperatures on
5、the degree of broken silk of Eucommia wasinvestigated.Using High performance liquid chromatography(HPLC)to analyze the difference of mainchemical contents between raw Eucommia ulmoides and salted products the effect of processing technology onthe quality of Eucommia ulmoides was studied.Based on the
6、 experimental data it was determined that theoptimum temperature for Eucommia ulmoides processing was 110,and the time was controlled at about 8 min.Afterhightemperatureprocessing,thecontentsofchemicalcomponentsofEucommiaulmoideswassignificantly reduced,and the main active ingredient pinoresinol dig
7、lucoside was also greatly reduced.Key words：Salt Eucommia;processing temperature;HPLC analysis;pinoresinol diglucoside基金项目：湖南省卫生健康委科研重点课题（No.202113052006），湖南省自然科学科药联合基金项目（No.2021JJ80011），湖南省药学一流学科开放基金（科函 2020 4号2020YX01、2020YX07、2021YX12）。作者简介：管松滨（1969），男，湖南武冈人，主管中药师，研究方向：中药炮制与加工（E-mail：）。联 系 人：彭东明，
8、教授，博士，研究方向：新药研究与开发（E-mail：）。收稿日期：2022-06-22第53卷第1期2023年2月精 细 化 工 中 间 体FINE CHEMICAL INTERMEDIATESVol.53 No.1Feb.2023医药及中间体第1期杜仲为杜仲科植物杜仲（Eucommia ulmoidesOliver）的干燥树皮，长期以来都是中国传统中药材。在我国有着悠久的用药历史，神农本草经中将其列为上品，性温，味甘，归肝、肾经，具有补肝肾、强筋骨和安胎功效，用于治疗肝肾不足、腰膝酸痛、筋骨无力、头晕目眩、妊娠漏血和胎动不安等1。历年来，国内外学者已经从杜仲皮、叶、花和果实等部位提取出的化学
9、成分多达134种。按其化学结构可分为黄酮类、木脂素类、苯丙素类、环烯醚萜类、甾醇类及多糖类、三萜类等2。由于生杜仲含有较多的硬性橡胶类物质杜仲胶，对有效成分的溶出产生抑制作用，而通过炮制可将胶质破坏，促进有效成分溶出，提高治疗效果，因而中医临床上常以炮制品为主。而临床上杜仲炮制品种类繁多，有盐炙、姜炙、蜜炙、醋炙等3，现阶段多使用杜仲盐炙品。根据中医药基础理论，盐炙法可引药入肾，直达下焦，盐炙杜仲温而不燥，功效甚多。由于生杜仲含有大量杜仲胺，通过炮制破坏杜仲胺（杜仲丝的主要成分之一）后，将有益于有效成分的煎出，所以历来都是以杜仲“断丝”作为杜仲炮制的标准。中华人民共和国药典（2020年版）以“
10、断丝”作为杜仲炮制标准4-6，却无有关“断丝”的具体参数依据，这就使得杜仲炮制工艺更偏向于主观性、经验性描述，不利中药炮制技术的传承与发展。因而，研究分析杜仲“断丝”的炮制温度以及其化学成分变化十分有必要，为杜仲炮制工艺的规范化、可控化提供理论依据，从而建立更为详尽的杜仲炮制品质量控制标准。本文分两部分研究炮制工艺对盐杜仲主要化学成分的影响因素，首先依据 中华人民共和国药典（2020年版）中“断丝”作为观察指标，研究不同的炮制条件，即炮制温度和炮制时间对杜仲出现“断丝”现象的影响，从而优化炮制工艺参数。其次，文献7认为杜仲中的主要化学成分松脂醇二葡萄糖苷（PDG）含量可作为质量控制指标，通过测
11、定不同炮制温度和时间下所得盐炙品中PDG含量以及浸出物含量研究炮制工艺具有一定的科学依据。以PDG的含量作为研究对象，利用高效液相色谱法（HPLC）分析杜仲炮制前后其主要化学成分的含量变化并测定杜仲炮制前后各理化性质，探究炮制对杜仲质量的影响结果8。1实验部分1.1仪器、试剂与药材仪器：DHG-9053A电热干燥箱（甘易仪器设备上海有限公司）、FW177多功能药材粉碎机（浙江聚能仪器设备有限公司）、CY-700炒药机（南京宏钢盛机械设备厂）、U-3000-2高效液相色谱仪（上海硅仪生化科技有限公司）。试剂：甲醇（色谱纯，天津科密欧化学试剂有限公司）、三氯甲烷（色谱纯，成都市科隆化学品有限公司）
12、、PDG（色谱纯，中国食品药品检定研究院）、盐（湖南盐业股份有限公司长沙市分公司食用级非加碘盐）、高纯水（上海和泰仪器有限公司Q15超纯水机制取）。药材：杜仲药材（湖南省安化县）。1.2炮制对“断丝”的影响研究1.2.1杜仲样品的制备杜仲净料：将杜仲除去粗皮，洗净，润透，切成0.5 cm0.5 cm规格大小的杜仲丝。盐杜仲及不同温度炒制品的制备：取杜仲丝，先用2%盐水充分润透，考虑到用盐水润透后的药材含水量较高，无法客观、准确考察温度及炮制时间对炮制程度的影响，因而先将润透好的盐杜仲平铺置于电热鼓气干燥箱（温度设置为 60）烘干，除去多余水分。1.2.2温度对“断丝”的影响将1.2.1中处理好
13、的杜仲丝分别置于炒药机锅（恒定锅体转速为600 r/min）中，分别用90、100、110、120、130、140 炒至焦黑色并观察是否“断丝”，确认“断丝”后取出，放凉。1.2.3炮制时间对“断丝”程度的影响为进一步探究杜仲炮制时间对杜仲“断丝”情况的影响，在炒制杜仲并观察其“断丝”程度时进行时间记录。1.3炮制对主要化学成分的影响研究1.3.1供试品溶液制备取盐杜仲每个温度下炒制品种3个样各约3 g，剪成碎片，揉成絮状，取约2 g，精密称定，置于管松滨，等：不同炮制温度对盐杜仲主要有效成分含量的影响35第53卷精细化工中间体索氏提取器中，加入三氯甲烷适量，加热回流6 h，弃去三氯甲烷液，药
14、渣挥去三氯甲烷，再置于索氏提取器中，加入甲醇适量，加热回流6 h，提取液回收甲醇至适量，转移至10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。1.3.2对照品制备取PDG对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。1.3.3色谱检测条件确定色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：甲醇-水（V V=25 75）；柱温：25；检测波长：277 nm；流速：1 mL/min；进样量：10 L；理论板数按 PDG 峰计算应不低于 1 000。1.3.4PDG测定方法学考察1）线性关系考察。精密吸取1 mL PDG对照品溶液，置于10 mL量瓶中，加甲醇稀释至
15、刻度，摇匀，分别精密吸取8、10、12、14、16、18、20 L，按上述色谱条件测定。以进样量（g）为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，计算回归方程式。2）稳定性试验。取同一批号盐杜仲，按1.3.1中方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，分别于 0、2、4、6、8、10、12 h 进样 10 L，测定PDG的峰面积。计算RSD值。3）精密度试验。取同一批号盐杜仲，按1.3.1中方法制备供试品溶液，取 10 L，按上述色谱条件，连续进样 5次，测定 PDG 的峰面积。计算RSD值。4）重复性试验。取同一样品共5份，按1.3.1中方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，测定PDG的峰面积，计算RS
16、D值。5）加样回收率试验。取已知含量的盐杜仲6 份，精密加入一定量的 PDG 对照品溶液，按1.3.1 中方法制备供试品溶液，按上述色谱条件，进样10 L，测定PDG的峰面积，计算回收率。6）样品含量检测。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 L，进行液相色谱仪测定。1.3.5其他成分测定1）水分测定。参考2020年版药典水分测定法第二法烘干法（通则0832）测定1。2）总灰分测定。参考2020年版药典灰分测定法中总灰分测定法（通则2302）测定1。3）浸出物测定。参考2020年版药典浸出物测定法中热浸法（通则2201）测定1。2结果与讨论2.1炮制对“断丝”的影响由表1可知，温度在100、110、120 均可达到药典规定的“断丝”标准。温度为90 时，无法达到药典规定的“断丝”标准，尽管在该温度炒制过程中可以检测出部分“断丝”现象，但当杜仲放凉后会出现“回生”现象，即药材放冷后杜仲胶丝返回生品时的状态。温度在130 以上时，杜仲会迅速炭化。因此，炮制温度100130 适宜。考察杜仲炮制时间对杜仲“断丝”的影响，结果如表2。由表2可知，100130 的条件下炮制杜仲可以达到药典中所