1、 何丽玲，艾亚婷，胡慧 基于网络药理学探讨人参 石菖蒲治疗轻度认知损害的作用机制 时珍国医国药，（）：，（）：，（）：李琼锋，郭翔兵 七生力片治疗老年性痴呆 例 福建中医药，（）：商崇智，赵明亮 人参皂苷 对东莨菪碱诱导阿尔茨海默病小鼠学习记忆的影响 中华实用诊断与治疗杂志，（）：邓敏贞，钟晓琴，高志杰，等 人参皂苷 联合 细辛醚对血管性痴呆模型小鼠的改善作用及其机制研究 中国药房，（）：收稿日期：；修订日期：基金项目：中药材生产技术标准制定合同项目（）号作者简介：覃春叶（），女（苗族），贵州遵义人，贵州中医药大学在读硕士研究生，主要从事中药及民族药资源分类鉴定与质量控制工作通讯作者简介：李
2、玮（），男（汉族），湖南邵东人，贵州中医药大学教授，学士学位，主要从事中药炮制原理及技术研究工作通讯作者简介：杜洪志（），男（汉族），贵州毕节人，贵州中医药大学讲师，博士学位，主要从事中药炮制原理及技术研究工作综合评分法优选黔产钩藤的产地加工方法覃春叶，范佐万，吴昭会，杜洪志，李 玮，吴珊珊，林 昶（贵州中医药大学，贵州 贵阳）摘要：目的 优选黔产钩藤的最佳产地加工方法。方法 分别采用阴干、晒干、烘干、蒸制、烫制法加工钩藤，以钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、缝籽嗪甲醚、去氢毛钩藤碱、总黄酮、总多糖、醇溶性浸出物含量为评价指标，采用综合评分法优选钩藤的最佳产地加工方法。结果 钩藤不同
3、加工方法的综合评分值差异较大，从大到小的顺序：蒸制一次（）烘干（）烫制（）阴干（）晒干（）。结论 蒸制一次为钩藤的最佳产地加工方法，最佳工艺为：取钩藤鲜品药材，趁鲜剪枝，置于已经“圆汽”的蒸制容器中，蒸制 后，干燥箱中烘干。该方法可较好的保证钩藤药材的质量。关键词：钩藤；产地加工方法；综合评分法 标识：中图分类号：文献标识码：文章编号：（），（，）：，（）（）（）（）（）：，“”，：；钩藤始载于汉末著作名医别录，药用部位为干燥带钩茎枝，具有清热平肝、息风定惊的功效，临床上常用于治疗肝风内动，惊厥抽搐，小儿惊啼等疾病。现代研究表明，钩藤中含有生物碱类、三萜类、黄酮类以及香豆素类成分，其中生物碱类
4、是主要药效成分，且钩藤碱和异钩藤碱两者占钩藤总生物碱的以上，是降血压、抗惊厥的主要活性成分。目前，钩藤是贵州的道地药材之一，收载于贵州省中药材大品种产业链（第二部）一书中，同时也是贵州中药材产业规划重点发展品种之一。产地加工有利于药材的进一步炮制和充分发挥其药效，是药材必不可少的关键环节。贵州常用中药材种植加工技术一书中提到：“在传统习惯上，钩藤常置锅内蒸片刻或与沸水中略烫后，取出晒干，目的是使色泽变紫红，油润光滑”。年版中国药典一部收载钩藤药材的加工方法为“秋、冬二季采收，去叶，切断，晒干。”其它省的地方炮制规范记载的钩藤加工方法也多为晒干法，如北京市中药饮片炮制规范（年版）、江西省中药饮片
5、炮制规范（年版）等。目前，对钩藤的产地加工方法有一些报道，但多仅以钩藤碱和异钩藤碱含量为评价指标，得出阴干、晒干法较好，。中药化学成分多而复杂，以单一成分为评价指标，存在一定局限性。因此，对于钩藤的产地加工方法缺乏统一标准，影响了钩藤药材的质量。基于此，本文以黔产钩藤为研究对象，钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、缝籽嗪甲醚、去氢毛钩藤、总黄酮、总多糖、醇溶性浸出物的含量为评价指标，采用综合评分法研究不同加工方法对时珍国医国药 年第 卷第 期 钩藤药材质量的影响，以期优选出钩藤的最佳产地加工方法，为该药材的产地加工方法及质量控制提供参考。仪器与材料 仪仪器器 （岛津仪器（苏州）有限公司
6、），型紫外分光光度仪（北京普析通用仪器有限责任公司），型万分之一电子分析天平（上海梅特勒 托利多仪器有限公司），型数显恒温水浴锅（上海况胜实业发展公司），型超声波清洗仪（上海易净超声波仪器有限公司），型电热鼓风干燥箱（天津市泰斯特仪器有限公司）。试试药药 芦丁（批号：）、无水葡萄糖（批号：）对照品均购自贵州迪大科技有限责任公司，纯度均大于；钩藤碱（）、异钩藤碱（批号：）、去氢 钩 藤 碱（批 号：）、异 去 氢 钩 藤 碱（批 号：）、缝籽嗪甲醚（批号：）、去氢毛钩藤碱（批号：）对照品均购自成都埃法生物科技有限公司，纯度均大于；其余试剂为分析纯，水为蒸馏水。钩藤鲜药材采自贵州省遵义市道真县，经
7、贵州中医药大学魏升华教授鉴定为茜草科钩藤 （）的带钩茎枝。方法与结果 产产地地加加工工方方法法 阴阴干干法法 取钩藤鲜品药材，趁鲜剪枝，置于阴凉通风处阴干。晒晒干干法法 取钩藤鲜品药材，趁鲜剪枝，置于阳光下晒干。烫烫制制法法 取钩藤鲜品药材，趁鲜剪枝，烫制透后，烘干。烘烘干干法法 取钩藤鲜品药材，趁鲜剪枝，置于温度分别为、烘箱内烘干。蒸蒸制制法法 取钩藤鲜品药材，趁鲜剪枝，置于已经“圆汽”的蒸制容器中，蒸制 后，烘干，为蒸制一次的样品。按该方法，分别制备蒸制二次、蒸制三次、蒸制四次的样品。部分药材图见图。供供试试品品溶溶液液的的制制备备 生生物物碱碱提提取取 精密称取 钩藤粉末（过 号筛）于
8、锥形瓶中，加入 甲醇，超声提取 （频率；功率 ），取出放冷，过滤，取续滤液过 的微孔滤膜，即得供试品溶液。总总黄黄酮酮提提取取 精密称取 的钩藤粉末（过二号筛）置于 锥形瓶中，加入 的乙醇，称重，于 回流提取，取出放冷，补重，摇匀，过滤，取续滤液，用乙醇定容至 容量瓶中，即得供试品溶液。总总多多糖糖提提取取 精密称取 的钩藤粉末（过二号筛）置于 锥形瓶中，加入无水乙醇 ，在 恒温水浴锅中回流提取，过滤，以除去脂溶性成分，残渣挥干溶剂并晾干后，滤纸连同滤渣一起置于锥形瓶中，加入 蒸馏水，称重，于回流提取 ，取出放冷，补重，摇匀，过滤，取续滤液 ，用蒸馏水定容至 容量瓶中，即得供试品溶液。对对照照
9、品品溶溶液液的的制制备备 生生物物碱碱对对照照品品溶溶液液制制备备 分别精密称取钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱、缝籽嗪甲醚、去氢毛钩藤碱适量，置于 的容量瓶中，加入 甲醇定容，制成每 分别含 、的对照品储备液，备用。图 不同加工方法药材表面特征图 芦芦丁丁对对照照品品溶溶液液制制备备 精密称取芦丁对照品 ，置于 容量瓶中，加 乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为 的对照品溶液，备用。葡葡萄萄糖糖对对照照品品溶溶液液制制备备 精密称取 无水葡萄糖，置于 容量瓶中，用蒸馏水溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度为 对照品溶液，备用。指指标标含含量量测测定定 生生物物碱碱含含量量测测定定 取
10、供试品溶液，按照表 的色谱条件进样，记录峰面积。对照品及供试品的色谱图见图。表 色谱条件柱子流动相组成等度洗脱流速 柱温 检测波长 进样量 （）色谱柱（，）含 乙酸铵的 的磷酸氢二钠溶液（）：甲醇（）（）：（）：异去氢钩藤碱；异钩藤碱；去氢钩藤碱；缝籽嗪甲醚；钩藤碱；去氢毛钩藤碱图 钩藤样品（）和混合对照品（）的 色谱图 总总黄黄酮酮含含量量测测定定 取供试品溶液 于 容量瓶中，加入 乙醇 混合，再加入 亚硝酸钠溶液，静置 ，再加入 硝酸铝溶液，静置 ，再加入 氢氧化钠溶液，用乙醇定容至刻度线，摇匀，静置 ，以相应溶液作空白对照，在 波长下测定吸光度。总总多多糖糖含含量量测测定定 取 供试液于
11、 比色管中，加 的苯酚溶液，迅速加入浓硫酸 ，摇匀，至 水浴锅中加热 ，再冰水冷却 ，以相应溶液作空白对照，在 波长下测定吸光度。醇醇溶溶性性浸浸出出物物测测定定 按照 版中国药典第四部通则 项下“浸出物测定法”，以 乙醇为溶剂，按热浸法测定钩藤中的醇溶性浸出物含量。产产地地加加工工方方法法的的优优选选 综合评分法是根据不同技术方案设置多项指标，将多指标设置成同一度量值，通过具体分值评优的一种数量分析方法。本实验采用多指标综合评分法优选黔产 时珍国医国药 年第 卷第 期钩藤药材的产地加工方法，以醇溶性浸出物、总黄酮、总多糖、异去氢钩藤碱、异钩藤碱、去氢钩藤碱、缝籽嗪甲醚、钩藤碱和去氢毛钩藤碱含
12、量为评价指标，含量都是越高越好。因此在数据处理时引用综合指标“隶属度”，即指标隶属度 （指标值 指标最小值）（指标最大值 指标最小值）；根据各成分在钩藤中的重要性，以浸出物、总黄酮、总多糖、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、缝籽嗪甲醚和去氢毛钩藤碱各占，钩藤碱和异钩藤碱各占，满分为 ，计算各样品的综合评分值。方方法法学学考考察察 线线性性关关系系考考察察 分别精密移取相应体积的各个生物碱成分，于 容量瓶中，配成相应浓度，按照“”项下的色谱条件进样，记录峰面积，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。精密量取不同体积芦丁对照品溶液，配置成浓度分别为、一系列对照品溶液，按“”项下方法进行显色测定，以浓
13、度为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线；精密量取不同体积葡萄糖对照品溶液，配置成浓度分别为 、一系列对照品溶液，按“”项下方法进行显色测定，以质量为横坐标，吸光度为纵坐标制作标准曲线。结果见表。精精密密度度试试验验 精密吸取“”项下对照品溶液，按照“”项下条件连续测定 次，其 均小于 ，表明仪器精密度良好。结果见表。重重复复性性试试验验 取同一处理方法的样品粉末 份，按照“”项下方法制备供试品溶液，按照“”项下条件进行测定，其 均小于 ，表明试验重复性良好。结果见表。稳稳定定性性试试验验 精密吸取“”项下同一供试品溶液，按照“”项下条件，分别于、进行测定，其 均小于 ，表明样品溶液在 内稳定性
14、良好。结果见表。加加样样回回收收率率试试验验 精密称取已知含量的样品约 ，共 份，分别精密加入等量对照品溶液，按照“”项下方法制备供试品溶液，按照“”项下的条件进行测定。总黄酮、总多糖、生物碱成分的平均回收率均大于，小于 ，表明方法准确性好。结果见表。综综合合评评分分法法优优选选最最佳佳产产地地加加工工方方法法 按照“”“”项下各评价指标的测定方法对各样品的指标成分进行测定，并按“”项下方法计算其综合评分值，结果见表。表 方法学考察结果化学成分回归方程相关系数（）线性范围精密度 重复性 稳定性 平均回收率 总黄酮 总多糖 钩藤碱 异钩藤碱 去氢钩藤碱 异去氢钩藤碱 缝籽嗪甲醚 去氢毛钩藤碱 表
15、 不同产地加工方法对钩藤药材质量的影响加工方法浸出物 浸出物隶属度总黄酮 总黄酮隶属度总多糖 总多糖隶属度异去氢钩藤碱 异去氢钩藤碱隶属度异钩藤碱 异钩藤碱隶属度阴干 晒干 烘干 烘干 烘干 烘干 烘干 烘干 烫制 蒸制一次 蒸制二次 蒸制三次 蒸制四次 加工方法去氢钩藤碱 去氢钩藤碱隶属度缝籽嗪甲醚 缝籽嗪甲醚隶属度钩藤碱 钩藤碱隶属度去氢毛钩藤碱 去氢毛钩藤碱隶属度综合评分值阴干 晒干 烘干 烘干 烘干 烘干 烘干 烘干 烫制 蒸制一次 蒸制二次 蒸制三次 蒸制四次 由表可知，阴干法的综合评分值为 ，晒干法的综合评分值为 ；烫制法的综合评分值为 ；对于烘干法，综合评分值从大到小：（）（）（
16、）（）（）（），烘干的综合评分值最高，其次是 烘干，和 烘干的最低。在蒸制法中，蒸制一次（）蒸制二次（）蒸制三次（）蒸制四次（），蒸制一次的综合评分值最高，蒸制四次的最低。不同产地加工方法对钩藤成分含量影响较大，以综合评分值从大到小的顺序为：蒸制一次（）烘干（）烫制（）阴干（）晒干（）。蒸制一次的综合评分值最高，为 ，说明钩藤的最佳产地加工方法为蒸制一次，其工艺为：取钩藤鲜品药材，趁鲜剪枝，置于已经“圆汽”的蒸制容器中，蒸制 时珍国医国药 年第 卷第 期 后，干燥箱中烘干。讨论钩藤药材以生物碱类为主要药效成分，具有遇热易分解的特点，如经典著作明代倪朱谟的本草汇言中记载钩藤：“久煎便无力，俟他药煎熟十余沸，投入即起，颇得力也”；清代吴仪洛的本草从新中记载钩藤：“久煎便无力。俟他药煎就，方入钩藤，一二沸即起，颇得力也”；年版中国药典对钩藤的使用，也明确注明要“后下。”现代文献研究表明，温度对钩藤药材生物碱类稳定性影响较大。因此，钩藤药材在加工过程中，温度控制是关键技术。中药成分复杂，其药效是药材中所含的多种成分协同作用的结果，以单一组分或某几个组分作为药材质量评价指标，不仅不能体现中医学的