1、基金项目:贵州省科技计划项目(编号:黔科合成果 一般 );贵州省科技创新能力建设专项(编号:黔科合服企 号);贵州省教育厅高等学校特色重点实验室建设项目(编号:黔教合KY字 号)作者简介:王丽,女,贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室助理研究员,硕士.通信作者:杨小生(),男,贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室研究员,博士.E m a i l:g z n c n p s i n a c n收稿日期:改回日期:D O I:/j s p j x 文章编号 ()刺梨提取物抗炎活性及对溃疡性结肠炎小鼠的治疗作用A n t i i n f l a m m a t o r ya c t i v i
2、t yo fC i l i e x t r a c t sa n d i t s t h e r a p e u t i ce f f e c to nu l c e r a t i v ec o l i t i sm o d e l o fm i c e王丽,WANGL i,李立郎,L IL i l a n g,李齐激,L IQ i j i,王瑜,WANGY u,杨小生,Y ANGX i a o s h e n g,(省部共建药用植物功效与利用国家重点实验室,贵州 贵阳 ;贵州省中国科学院天然产物化学重点实验室,贵州 贵阳 )(S t a t eK e yL a b o r a t o r
3、yo fF u n c t i o n sa n dA p p l i c a t i o n s o fM e d i c i n a lP l a n t s,G u i y a n g,G u i z h o u ,C h i n a;T h eK e yL a b o r a t o r yo fC h e m i s t r yf o rN a t u r a lP r o d u c t so fG u i z h o uP r o v i n c ea n dC h i n e s eA c a d e m yo fS c i e n c e s,G u i y a n g,G
4、u i z h o u ,C h i n a)摘要:目的:探讨刺梨提取物治疗肠炎腹泻的作用.方法:用 不 同 质 量 浓 度(,g/m L)的刺梨提取物处理R AW 细胞,MT T法检测细胞活力;用不同浓度刺梨提取物处理R AW 细胞,再以脂多糖(L P S)诱导建立细胞炎症模型,利用G r i e s s法检测细胞培养上清液中NO的含量.以葡聚糖硫酸钠(D S S)诱导建立小鼠溃疡性结肠炎(U C)模型,观察造模及药物治疗期间小鼠体征变化,评估疾病活动指数(D A I),测定小鼠结肠长度、结肠湿重指数及脾脏重量;HE染色观察小鼠结肠组织病理学形态;W e s t e r nb l o t法及
5、免疫组化法检测小鼠结肠组织中K e a p 及N r f 蛋白水平.结果:刺梨提取物质量浓度 g/m L时对细胞活力无显著影响(P);刺梨提取物可抑制NO的释放,随着给药浓度的增加,抑制作用越明显(P 或P).与模型组比较,刺梨提取物各组小鼠的结肠长度较长,结肠湿重指数、脾脏重量及D A I分数降低(P 或P);HE染色结果显示刺梨提取物对U C小鼠肠道黏膜层显示出了较好的保护作用;W e s t e r nb l o t及免疫组化结果显示刺梨提取物能下调K e a p 的表达水平,上调N r f 的表达水平.结论:刺梨提取物具有较好的体外抗炎活性,对溃疡性结肠炎小鼠有治疗作用.关键词:刺梨提
6、取物;抗炎活性;葡聚糖硫酸钠;溃疡性结肠炎;作用机制A b s t r a c t:O b j e c t i v e:T h i ss t u d ya i m e dt o i n v e s t i g a t e t h ee f f e c to fC i l i e x t r a c t s i nt h et r e a t m e n to fe n t e r i t i sa n dd i a r r h e a M e t h o d s:T h eR AW c e l l sw e r et r e a t e dw i t hd i f f e r e n tc o
7、 n c e n t r a t i o n s(,g/mL)o fC i l ie x t r a c t s,a n dt h e nt h ec e l lv i a b i l i t yw a sd e t e r m i n e db yMT T m e t h o d R A W c e l l sw e r et r e a t e dw i t hd i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so fC i l ie x t r a c t s,a n dt h e nl i p o p o l y s a c c h a r i d
8、e(L P S)w a su s e dt oi n d u c et h ec e l li n f l a mm a t i o n m o d e l T h e c o n t e n t o f NO i n c e l l c u l t u r es u p e r n a t a n tw a sd e t e c t e db yG r i e s sm e t h o d T h eU Cm i c em o d e lw a si n d u c e d b y D S ST h ec h a n g e so fs i g n sd u r i n gt h em o
9、d e l i n ga n dd r u gt r e a t m e n tw e r eo b s e r v e d,a n dt h ed i s e a s ea c t i v i t y i n d e x(D A I)w a se v a l u a t e d T h ec o l o n l e n g t h,c o l o nw e tw e i g h t i n d e xa n ds p l e e nw e i g h tw e r em e a s u r e d HEs t a i n i n gw a su s e dt o o b s e r v et
10、 h e p a t h o l o g i c a l m o r p h o l o g y o fc o l o n T h ep r o t e i ne x p r e s s i o n o f K e a p a n d N r f i n c o l o nt i s s u e s w e r ed e t e c t e db y w e s t e r n b l o ta n di mm u n o h i s t o c h e m i s t r y R e s u l t s:T h ec o n c e n t r a t i o no fC i l i e x
11、 t r a c t g/m Lh a dn os i g n i f i c a n te f f e c t o nc e l l v i a b i l i t y(P)C i l i e x t r a c t i n h i b i t e d t h e r e l e a s eo fNO,a n dt h ei n h i b i t o r ye f f e c t w a s m o r eo b v i o u s w i t ht h ei n c r e a s eo fd r u gc o n c e n t r a t i o n(P o rP)C o m p a
12、 r e dw i t ht h em o d e l g r o u p,t h ec o l o n l e n g t ho fC i l i e x t r a c tg r o u pw a sl o n g e r,a n dt h ec o l o nw e tw e i g h t i n d e x,s p l e e nw e i g h ta n dD A If r a c t i o nw e r ed e c r e a s e d(P o rP )HEs t a i n i n gs h o w e dt h a tC i l ie x t r a c th a d
13、ab e t t e rp r o t e c t i v ee f f e c to nt h ei n t e s t i n a lm u c o s ao fU Cm i c e W e s t e r nb l o ta n di mm u n o h i s t o c h e m i s t r ys h o w e dt h a tC i l ie x t r a c td o w n r e g u l a t e dt h ee x p r e s s i o nl e v e lo fK e a p a n du p r e g u l a t e dt h ee x p
14、 r e s s i o nF OO D&MA CH I N E R Y第 卷第期 总第 期|年月|l e v e lo fN r f C o n c l u s i o n:C i l i e x t r a c th a dg o o da n t i i n f l a mm a t o r ya c t i v i t yi nv i t r oa n de x p r e s s e dt h e r a p e u t i ce f f e c to nU Cm i c e K e y w o r d s:C i l i e x t r a c t;a n t i i n f l
15、a mm a t o r y a c t i v i t y;D S S;u l c e r a t i v ec o l i t i s;m e c h a n i s m溃疡性结肠炎(u l c e r a t i v ec o l i t i s,U C)是一种常见的原因不明的慢性结肠炎症,为消化内科常见病,临床上主要以腹痛、腹泻、黏液脓血便为特征,反复发作,严重影响患者身心健康.近年来,U C在全球的患病率呈持续上升的趋势,发病高峰在 岁,老年人是另一个发病高峰,但稍低于青年人群,世界范围内的U C患病率估计在 人/万人.目前治疗U C主要以 氨基水杨酸类药物、糖皮质激素和免疫抑制剂为
16、主,这些药物普遍存在副作用大、复发率高且价格昂贵等特点.研究发现,用中药治疗U C不仅能够长期缓解症状,还可以减少复发,且疗效显著,能明显提高患者的生活质量.刺梨 为 蔷 薇 科 蔷 薇 属 植 物 刺 梨R o s ar o x b u r g h i iT r a t t(C i l i)的果实,主要分布于中国贵州、云南、湖南等省份,尤其在贵州省呈大规模人工种植.中华本草中记载刺梨具有健胃、消食、止泻之功效,主治食积饱胀、肠炎腹泻.刺梨富含维生素C、超氧化歧化酶(S O D)、多糖及三萜类化合物等多种活性成分,针对刺梨的药理活性,目前有抗氧化、抗癌、防治糖尿病、抗动脉粥样硬化等药理作用的研究报道,尚未见关于刺梨的抗炎活性及对溃疡性结肠炎的治疗作用的研究报道.K e a p N r f A R E信号通路是细胞防御氧化应激损伤的最重要机制之一,与氧化应激相关的多种疾病(如炎症、神经退行性疾病、癌症、心血管系统疾病和代谢等疾病)都 有 相 关 性,已 成 为 这 些 疾 病 预 防 和 治 疗 的 靶点.研究拟采用R AW 小鼠巨噬细胞炎症模型评价刺梨提取物的体外抗炎活性,将刺梨提取物