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电针调节TLR4、NLRP...大鼠胃黏膜炎症反应机制研究_王晓彤.pdf

1、109第 2 5 卷 第 2 期 2023 年 2 月辽 宁 中 医 药 大 学 学 报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol.25 No.2 Feb.,2023Med,2021,2021(7 ):5536237.77 邓秘,龙霖梓,谭令,等.活血解毒中药配伍抑制心肌细胞自噬改善大鼠冠脉无复流的作用机制研究 J .环球中医药,2021,14(5 ):811-815.78 刘琪,宋温婷,贾运时,等.止麻消痰活血汤治疗大鼠无复流心肌梗死实验研究 J .陕西中医,2021,42(2 ):148-151.79 张波涛,汤克虎,任进平,等.通心络对急性心肌梗死患

2、者冠状动脉置入支架后无复流的保护作用观察 J .实用心脑肺血管病杂志,2020,28(S2 ):252-253.80 成玲,孟根托娅,梁俊国.芪参益气滴丸对 PCI 术后患者心肌保护作用及不良心血管事件的防治 J .中国实验方剂学杂志,2019,25(16 ):78-84.81 何传玉.芪苈强心胶囊联合西药对急性心肌梗死PCI术后患者心肌灌注及心功能的影响 J .新中医,2021,20(53 ):40-44.82 陈韦,张明雪.化瘀祛痰颗粒对急性心肌梗死PCI术后无复流患者心功能及心血管事件的影响 J .辽宁中医杂志,2021,48(8 ):106-109.83 A X,LI Z,LUO W,

3、et al.Long-term compound danshen dripping pills therapy reduces the no-reflow phenomenon in nondiabetes mellitus patients after primary percutaneous coronary intervention for acute myocardial infarction J .Ann Palliat Med,2020,9(3 ):1144-1151.84 HU Z,WANG H,FAN G,et al.Danhong injection mobilizes en

4、dothelial progenitor cells to repair vascular endothelium injury via upregulating the expression of Akt,eNOS and MMP-9 J .Phytomedicine,2019,61(8 ):152850.85 秦立,赵莹,张斌.丹红注射液联合瑞舒伐他汀对急性心肌梗死PCI术后心肌无复流及IL-6、Cys-C、Hcy的影响 J .中西医结合心脑血管病杂志,2018,16(17 ):2453-2456.86 LI X,LAI XL,FEI YT,et al.Efficacy and safet

5、y of Shen-Yuan-Dan capsules for peri-procedural myocardial injury following percutaneous coronary intervention:study protocol for a randomized,double-blind,placebo-controlled trial J .Ann Transl Med,2019,7(6 ):119.87 李莉,陈光亮,周宜轩,等.通脉颗粒对兔急性心肌梗死再灌注后无复流的影响 J .中成药,2013,35(5 ):893-899.88 沈长,银陈攀,科盛瑾,等.银杏达莫

6、注射液对急性心肌梗死再灌注后无复流的作用 J .遵义医学院学报,2015,38(4 ):405-407.89 邓伟.血必净注射液预防 STEMI 患者直接介入治疗后冠脉无复流的效果 J .医学信息,2020,33(17 ):163-165.90 陈晨,吴丹,吕晓琳,等.电针预处理对急性心肌梗死再灌注无复流大鼠黏附分子及内皮细胞功能的影响 J .现代中西医结合杂志,2019,28(19 ):2067-207.91 陈晨,曹明明,吴丹,等.电针预处理对急性心肌梗死无复流大鼠心肌自噬与凋亡相关蛋白表达的影响 J .中国中医急症,2018,27(9 ):1514-1517.92 郝锋,蔡荣林,余情.电

7、针预处理对急性心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌组织NF-Bp65、IB、IKK蛋白表达的影响 J .中国针灸,2020,40(10 ):1103-1107.93 谭成富,王超,杜琳,等.电针、艾灸预处理对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌自噬相关蛋白LC 3、Beclin 1表达的影响 J .针刺研究,2018,43(1 ):1-7.94 王堃,黄日龙,吴生兵,等.电针预处理对心肌缺血大鼠心肌自噬相关蛋白LC3、LC3、Beclin 1、HIF-1表达影响 J .辽宁中医药大学学报,2020,22(7 ):44-47.95 白桦,卢圣锋,陈婉莹,等.麦粒灸预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤不同时期保护效应及Be

8、clin 1表达的影响 J .针刺研究,2017,42(6 ):471-476.电针调节TLR4、NLRP3改善功能性消化不良大鼠胃黏膜炎症反应机制研究王晓彤,董佳梓,王建波,薛亚楠,王丹,孙杰,魏肖禹,冷明慧,肖璐嘉,张立德(辽宁中医药大学,辽宁 沈阳 110847)基金项目:国家自然科学基金项目(81603704);辽宁省自然科学基金项目(2021-BS-182);辽宁中医药大学大学生创新创业训练计划项目 (S202110162010)作者简介:王晓彤(1991-),女,辽宁营口人,硕士在读,研究方向:针刺治疗与预防疾病机理研究。通讯作者:张立德(1959-),男,辽宁朝阳人,教授,博士研

9、究生导师,研究方向:针刺治疗与预防疾病机理研究。E-mail:。摘要:目的 观察电针“足三里”“太冲”穴是否通过调节TLR4、NLRP3而改善大鼠胃黏膜炎症反应,从而起到干预功能性消化不良(FD)的作用。方法 将48只10 d龄幼年SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组、非穴位组,每组各12只,雌雄各半。采用碘乙酰胺联合夹鼠尾法造制备FD大鼠肝郁脾虚证模型。造模成功后,针刺组和非穴位组分别电针大鼠双侧“足三里”穴、“太冲”穴、“非经非穴”,1次/d,每次20 min,连续14 d。Elisa法检测胃组织中白介素1(IL-1)的含量表达;RT-PCR法检测各组大鼠胃组织中Toll样受体4(TLR

10、4)、NOD样受体热蛋白3(NLRP3)的mRNA表达;免疫组化染色法检测各组大鼠胃组织中TLR4、NLRP3的蛋白表达。结果 针刺组干预后,FD大鼠胃黏膜炎症反应得到了明显缓解;与正常组比较,其中模型组中FD大鼠胃组织中TLR4蛋白及mRNA表达、NLRP3蛋白表达及IL-1水平均明显升高(P0.01),NLRP3 mRNA表达水平增高(P0.05)。与模型组比较,针刺组FD大鼠胃组织中TLR4蛋白表达、NLRP3蛋白及mRNA表达、IL-1水平均降低(P0.05),其中TLR4 mRNA表达显著降低(P0.01);与针刺组比较,非穴位组大鼠胃组织中TLR4、NLRP3蛋白及mRNA表达升高

11、,IL-1水平升高(P0.05)。结论 电针“足三里”“太冲”穴能够下调FD大鼠胃组织中TLR4、NLRP3的表达,降低炎症因子IL-1的表达水平,最终缓解了炎症反应,起到了电针对FD的干预作用。关键词:功能性消化不良;电针;TLR4;NLRP3中图分类号:R245.97 文献标志码:A 文章编号:1673-842X (2023)02-0109-05Mechanism of Electroacupuncture Regulation of TLR4 and NLRP3 on Improving Gastric Mucosal Inflammation in Rats with Function

12、al Dyspepsia WANG Xiaotong,DONG Jiazi,WANG Jianbo,XUE Yanan,WANG Dan,DOI:10.13194/j.issn.1673-842x.2023.02.022110 辽宁中医药大学学报 25 卷功能性消化不良(functional dyspepsia,FD)是以发病范围广泛、复发率高为特点,以疼痛为主、伴有早期饱胀和餐后饱足症状的消化系统疾病1。据研究,FD的发生与胃肠道黏膜炎症、胃十二指肠动力异常或内脏超敏等因素有关,其中,胃肠道黏膜炎症逐渐成为FD发病机制研究的热点2-3。TOLL样受体4(Toll-like receptors

13、4,TLR4)是TLRS家族在目前研究中极为重要的成员,作为一种关键模式识别受体,能激活炎症信号通路,诱导炎症反应发生4。NOD样受体热蛋白3(NOD-like receptor 3,NLRP3)作为自然免疫不可或缺的组成部分,在机体的炎症反应中起关键作用5。“足三里”系足阳明胃经之合穴,具有健脾和胃之效6。“太冲”系足厥阴肝经的原穴,具有疏肝理气,调畅气机之功7。两穴配伍,有疏肝健脾,理气和胃止痛之功。综上,本研究拟观察电针“足三里”、“太冲”穴是否通过调节胃组织中TLR4、NLRP3的表达,起到改善功能性消化不良大鼠胃黏膜炎症反应的作用,旨为针灸临床提供实验依据。1材料与方法1.1 材料1

14、.1.1 动物与分组健康 SPF级出生10 d的幼年 SD大鼠48只,雌雄各半,体质量(153)g,由辽宁长生生物技术股份有限公司提供,实验动物均检验检疫合格。生产许可证号:SCXK(辽)2020-0001。实验动物饲养于辽宁中医药大学沈阳校区实验动物中心,动物所处环境控制房间潮湿度、温度分别为(45%65%、2125),明暗环境各半自由饮食饮水。采用随机数字表法进行科学分组,将大鼠分为正常组、模型组、针刺组、非穴位组,每组各12只。整个实验过程中完全以 关于善待实验动物的指导性意见 为准则,对实验动物进行合理处置。1.1.2 主要仪器和试剂针灸针(0.19 mm10 mm,苏州医疗用品厂有限

15、公司);电子针疗仪(苏州医疗用品厂有限公司);酶标仪(赛默飞世尔科技公司);正置荧光显 微 镜(Leica,德 国);荧 光 定 量PCR仪(Applied Biosysterms,美国)。白 介 素1(interleukin-1,IL-1)ELISA试 剂 盒(MB-1588A,江 苏 酶 标 生 物);TLR4一 抗(19811-1-AP,武 汉 三 鹰);NLRP3一 抗(BA3677,博 士 德);PCR引 物(BMH93944,北 京 博 迈 德 引物 生 物);PCR反 转 试 剂 盒(60650,康 为 世 纪),PCR扩 增 试 剂 盒(50539,康 为 世 纪);碘 乙 酰

16、 胺(L18N11G131575,源叶生物)。1.2 方法1.2.1 模型的制备除正常组外,其余组采用“碘乙酰胺联合夹鼠尾法”制备FD大鼠肝郁脾虚模型8,9。对出生 10 d 的幼年SD大鼠用含0.1%碘乙酰胺的2%蔗糖溶液进行灌胃,每次0.2 mL,每天1次,持续7 d;待到大鼠成年期(10周),将长止血钳的顶部夹持处用海绵包裹后,夹持大鼠尾巴远端1/3处(力度大小以大鼠尾巴不破、脱皮为度),激起大鼠暴怒撕咬尖叫,放回笼中时前肢离地并与同笼大鼠打斗,刺激30 min/d,共14 d。造模成功标准:与正常组比较,模型大鼠毛发SUN Jie,WEI Xiaoyu,LENG Minghui,XIAO Lujia,ZHANG Lide(Liaoning University of Traditional Chinese Medicine,Shenyang 110847,Liaoning,China)Abstract:Objective To observe whether electroacupuncture at Zusanli(ST36)and Taichong(LR3)points c

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