1、无菌药品生产验证中的无菌药品生产验证中的 有关问题讨论有关问题讨论 杭州澳亚生物技术有限公司杭州澳亚生物技术有限公司 徐全华徐全华 电话：电话：86913427、13082806619 邮箱：邮箱：xqh_ 一、干热灭菌的基础理论一、干热灭菌的基础理论 1 1、干热灭菌热穿透性指标、干热灭菌热穿透性指标 F FHH值的概念及计算公式值的概念及计算公式 1.1 FH值概念：FH是干热灭菌的杀菌热力强度，系参照基准温度T0=170 下的干燥灭菌时间得出，以分钟(min)来表示。1.2 计算公式：FH=t10（T1-T0）/Z 式中：T1-每个时间点实测温度；T0-灭菌保证温度（基准温度），取170
2、。Z-温度变化升高的灭菌率。如果以去热原为目的，Z值取 54；如果以灭菌为目的，Z值取20；t-灭菌时间，以分钟来计算。如果每半分钟取一个数据，则 t为0.5；如果5秒钟取一个数据，则t为1/12，代表每 个时间段FH值的累加值。2.2.中国药典中国药典20052005年版二部附录年版二部附录灭菌法灭菌法 中中“干热灭菌法干热灭菌法”的要求以及的要求以及F FHH值的计算值的计算 本法系指将物品置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气 达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。不同灭菌程序的FH值 程序 FH杀菌值 FH灭内毒素值 温度 时间 计算值 效率 计算值 效率 160 120min
3、 37.9 0.008 78.3 5.7 170 120.0 0.03 120.0 8.8 170 60min 60.0 0.013 60.0 4.4 180 189.7 0.04 91.9 6.7 250 45min 4.5105 100 1363.6 100 也可采用其它灭菌程序 根据温度和时间计算 3 3、干热灭菌、干热灭菌F FHH值的标准值的标准 （1）对于不直接接触药品的不锈钢器具（如冻干托盘、框 架或胶塞桶等）,应从灭菌的角度考虑，最低要求为：FH37.9,最高要求FH 189.7，从灭菌的风险性考虑应选择 FH 189.7。我们对这些物品的灭菌采用25030min的灭 菌程序，
4、计算所得的FH=3.0105。（2）对于直接接触药品的内包材（如玻璃瓶），应从杀内 毒素的角度考虑，FH1363。在一定温度下达到在一定温度下达到FHFH值值13631363所需要的时间所需要的时间 温度（）时间（min）280 12.5 285 10.1 290 8.2 295 6.6 300 5.3 305 4.3 310 3.5 315 2.8 320 2.3 325 1.8 330 1.5 4.4.中国药典中国药典附录附录 灭菌法中灭菌法中“干热干热 灭菌法灭菌法”对细菌内毒素挑战试验的要求对细菌内毒素挑战试验的要求 干热灭菌法 细菌内毒素灭活验证试验是证明除热原过程有效 性的试验。一
5、般将不小于1000单位的细菌内毒素加 入待去热原的物品中，证明该去热原工艺能使内毒 素至少下降3个对数单位。细菌内毒素灭活验证试验 所用的细菌内毒素一般为大肠埃希菌内毒素(Escherichia coli endoxin）。5.5.美国药典附录美国药典附录灭菌法及无菌保证灭菌法及无菌保证 “干热灭菌法干热灭菌法”对细菌内毒素挑战试验的要求对细菌内毒素挑战试验的要求 Dry-Heat Sterilization 干热灭菌法 The test with Limuluslysate could be used to demonstrate that the endotoxic substance h
6、as been inactivated to not more than 1/1000of the original amount(3log cycle reduction).用鲎试剂检测法可证实细菌内毒素含量失活不少于1/1000（3个对数单位)。6.6.英国药典附录英国药典附录 灭菌法灭菌法 “干热灭干热灭 菌法菌法”对细菌内毒素挑战试验的要求对细菌内毒素挑战试验的要求 Dry heat sterilisation 干热灭菌法干热灭菌法 Dry heat at temperatures greater than 220C is frequently used for sterilisati
7、on and depyrogenation of glassware。In this case demonstration of a 3-log reduction in heat resistant endotoxin can be used as a replacement for biological indicators 干热温度高于220常被用于玻璃器具的灭菌和除热源。在这种情况下，证实细菌内毒素下降3个对数单位，可用于代替生物指示剂试验。6 6、ExcelExcel在在FHFH值计算中的应用值计算中的应用 （1）每个时间点的）每个时间点的FH值计算公式：值计算公式：FH=POWER
8、(10,(C3)-170)/54)SECOND(B3-B2)/60 power代表以10为底的幂；C3 代表第2次记录时的温度；170 代表灭菌保证温度；54 代表去热原的工值；SECOND 代表秒；B3 代表第二次记录的时间；B2 代表第一次记录的时间；60 秒转换成分钟。次数(A)时间(B)通道1(C)通道2(C)温度 FH值 温度 FH值 1 2007-03-28 09:36:22 120 0.0 94 0.0 2 2007-03-28 09:36:27 139 0.0 94 0.0 3 2007-03-28 09:36:32 139 0.0 111 0.0 4 2007-03-28 0
9、9:36:37 161 0.1 133 0.0 5 2007-03-28 09:36:42 181 0.1 155 0.0 6 2007-03-28 09:36:47 199 0.3 175 0.1 7 2007-03-28 09:36:52 214 0.5 195 0.2 8 2007-03-28 09:36:57 226 0.9 211 0.5 9 2007-03-28 09:37:02 237 1.5 225 0.9 10 2007-03-28 09:37:07 246 2.1 236 1.4 11 2007-03-28 09:37:12 253 2.9 246 2.1 12 2007-
10、03-28 09:37:17 260 3.9 254 3.0 13 2007-03-28 09:37:22 266 5.0 260 3.9 14 2007-03-28 09:37:27 267 5.2 267 5.2 （2）总的）总的FH值在值在Excel的求和功能的求和功能中得到。中得到。二、灭菌隧道烘箱的验证二、灭菌隧道烘箱的验证 1 1、灭菌隧道烘箱的基本情况、灭菌隧道烘箱的基本情况 1.1功能作用：功能作用：玻璃管制注射剂瓶的干热灭菌和除热原.。1.2结构：结构：由预热段、灭菌段、冷却段三部分组成。通过远红外加热管产生的热风空气由耐高温过滤器进行过滤后对玻璃瓶进行灭菌。玻瓶通过转动的网
11、带走过三个段。1.3程序设定考虑的因素：程序设定考虑的因素：(1)网带速度：直接影响玻璃在隧道中的运行时间,应该以企业确定的最大生产能力确定网带运行速度。(2)温度：在速度确定的情况下，设定加热管温度（通常为360）和灭菌温度（330）2 2、验证温度探头的布点图、验证温度探头的布点图 方式一：方式二：方式三：隧道运动方向 隧道运动方向 隧道运动方向 3 3、空载热分布试验、空载热分布试验 USP30：STERILIZATION AND STERILITY ASSURANCE OF COMPENDIAL ARTICLES“Dry-Heat Sterilization”可接受标准依据：美国药典3
12、0版：灭菌法及无菌保证。A typical acceptable range in temperature in the empty chamber is 15 when the unit is operating at not less than 250。当设备温度不小于250时，在空腔中典型的温度可接受范围为15。（1）操作方法：将10支铂电阻探头按方式（三）布点后固定在网带上方的打孔搁板上，按SOP进行预热，待达到控制温度后，开动网带，探头随不锈钢网带进入预热段、灭菌段、冷却段，程序结束，停止试验。（2）测试次数：3次（3）可接受标准：平均温度250以上时，热分布温差 15。（4）统计计
13、算：应统计10个探头同一时间点的温度平均值，并计算平均值与最大值和最小值之间的极差。4.4.空载热分布试验的经验体会空载热分布试验的经验体会 （1）热分布的铂探头应予固定，不能与网带、搁板、或玻瓶接触，否则会造成短路，数据不准确，试验失败。（2）热穿透试验的FH值约为空载热分布的2/3（经验值），热穿透 试验的FH值可接受标准为：大于1363min（一般设计在1800min以 上），因此，尽管空载热分布研究温度分布均匀性，也必须进行FH值 的计算，最好在2700min以上，以保证热穿透的FH值。（3）由于灭菌隧道烘箱运行不正常，造成温度探头在隧道的滞留，FH值的不正常累加，应认为试验失败，应重
14、新试验。（4）偶然的少数数据缺失，可以按统计学的要求进行缺失数据的弥 补。(5)由于温度探头与记录仪之间的导线很长，为了保证检测温度的 准确性，温度探头应该采用三线制的接法，而不应该采用二线制接法。5 5、满载热分布和热穿透试验、满载热分布和热穿透试验 满载热分布和热穿透试验可同时进行。4.1操作方法：操作方法：同空载热分布。但温度探头必须插入玻瓶的内部，但又 不能接触瓶壁。4.2测定次数：测定次数：3次 4.3可接受标准：可接受标准：(1)热分布温差：热分布温差：15。依据：由于满载和热穿透条件下，热空气对流受阻的原因，温度均匀性 较空载时差，制订与空载相同的标准应该说要求更严格。（2）FH
15、1365min。依据：a.中国药典2005年版二部干热灭菌法的除热原程序250 45min计算 所得。b.国家发展改革委员会于2007-03-06发布了JB/T20093-200）抗生素瓶 表冷式隧道灭菌干燥机的制药机械行业标准，要求于2007-09-01实施。在 标准中：5、要求：5.5.4灭菌性能：b）热穿透性FH1365min。6 6、温度无纸记录仪（整体图）、温度无纸记录仪（整体图）生产厂家：北京金立石自动化仪表厂 温度无纸记录仪（正面图）温度无纸记录仪（正面图）温度无纸记录仪（背面图）温度无纸记录仪（背面图）6 6、细菌内毒素挑战试验、细菌内毒素挑战试验 6.16.1内毒素指示剂布点
16、方法内毒素指示剂布点方法 按如下方法进行布点：预热段 冷却段 灭菌段 1 2 3 4 5 6.26.2内毒素指示剂使用方法内毒素指示剂使用方法 除去细菌内毒素指示剂标签，折断易折安瓿瓶颈，用铝箔封闭瓶口，将内毒素指示剂按上述布点方法布置，经过一个干热程序后测定残余内毒素量。6.36.3残余细菌内毒素的检测残余细菌内毒素的检测 内毒素指示剂的标定：将未经干热的内毒素指示剂加1.0ml细菌内毒素检查用水，置于漩涡混合器上混合15min，10倍稀释至接近所选用的鲎试剂灵敏度，再2倍梯度稀释成4、2、1、0.5、0.25的内毒素系列溶液，根据反应终点的稀释倍数计算可回收内毒素量。未经干热的内毒素稀释系列(如2500EU/支)稀释倍数（D）2500 5000 10000 20000 40000 内毒素浓度（EU/ml）1.0 0.5 0.25 0.125 0.06 反应结果+-可回收内毒素 Rc=D1.0ml=0.25100001.0=2500EU/瓶 将经干热的内毒素指示剂加1.0ml细菌内毒素检查用水，置于漩涡混合器上混合15min，再作一次10倍稀释。稀释倍数（D）1 10 反应结果（1）