1、环介导恒温扩增芯片法在中医辅助诊断下呼吸道感染中的价值研究齐晓丽,马晓兵,胡晓艳,左晓红,马红英,吕春兰(北京中医医院怀柔医院检验科,北京1 0 1 4 0 0)D O I:1 0.1 1 7 4 8/b j m y.i s s n.1 0 0 6-1 7 0 3.2 0 2 2.1 1.0 1 5收稿日期:2 0 2 2-0 8-3 1;修回日期:2 0 2 2-0 9-1 0作者简介:齐晓丽(1 9 8 6),女,硕士研究生,主管技师,主要从事病原微生物分子生物学、溶酶体病和线粒体病诊断研究。T e l:1 5 8 1 0 6 2 7 0 5 3;E-m a i l:f a y y o o
2、 1 6 3.c o m通讯作者:吕春兰(1 9 6 3),女,本科,主任医师,主要从事临床检验学研究。摘要:目的 分析环介导恒温扩增(l o o p-m e d i a t e d i s o t h e r m a l a m p l i f i c a t i o n,L AM P)芯片法在疑似下呼吸道感染患者病原菌检测中的应用价值。方法 选取2 0 2 0年1 2月至2 0 2 2年5月北京中医医院怀柔医院收治的疑似下呼吸道感染患者3 8 3例,采集其痰液标本,应用L AM P芯片法和痰培养法检测7种常见的下呼吸道感染病原菌,观察病原菌分布情况,比较两种方法在检测下呼吸道感染病原菌的一
3、致性、灵敏度、特异性。结果 3 8 3例患者中9 2例(2 4.0 2%)L AM P芯片法检测病原菌阳性,其中单种病原菌感染6 7例(7 4.4 4%),混合病原菌感染2 5例(2 7.1 7%);3 0例(7.8 3%)痰培养法检测阳性。L AM P芯片法检测病原菌阳性率高于痰培养法,差异具有统计学意义(2=5 1.9 4 6,P6 0岁)组,比较两组病原菌检出率,差异无统计学意义(P 0.0 5)。结论 北京怀柔地区下呼吸道感染患者检出病原菌以肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和嗜麦芽窄食单胞菌为主,L AM P芯片法对下呼吸道感染诊断有更好的临床应用价值。关键词:环介导恒温扩增芯片法;痰培养;
4、下呼吸道感染;病原菌中图分类号:R-3 3 1;R 3 7 8 文献标识码:AL AMPM i c r o c h i pM e t h o d i nt h eD i a g n o s i so fL o w e rR e s p i r a t o r yT r a c t I n f e c t i o nw i t ht h eA i do fC h i n e s eM e d i c i n eQ IX i a o l i,MAX i a o b i ng,HU X i a oya n,ZUOX i a o h o ng,MA H o ng yi ng,L YUC h u n l
5、 a n(H u a i r o uH o spi t a l o fB e iji ngT r a d i t i o n a lC h i n e s eM e d i c i n eH o spi t a l,B e iji ng1 0 1 4 0 0,C h i n a)A b s t r a c t:O b j e c t i v eT oa n a lyz et h epo t e n t i a lap pl i c a t i o nv a l u eo fl o op-m e d i a t e di s o t h e r m a la mpl i f i c a t i
6、o n(L AM P)m i c r o c h ipm e t h o d i nt h ed e t e c t i o no fpa t h oge n s i npa t i e n t sw i t hs u spe c t e dl o w e rr e spi r a t o ryt r a c ti n f e c t i o n.M e t h o d sF r o mD e c e m b e r,2 0 2 0t oM ay,2 0 2 2,3 8 3pa t i e n t sw i t hs u spe c t e dl o w e r r e spi r a t o
7、 ryt r a c ti n f e c t i o n w e r es e l e c t e df o rt r e a t m e n ti n H u a i r o u H o spi t a lo fB e iji ngH o spi t a lo fT r a d i t i o n a l C h i n e s eM e d i c i n e.Spu t u ms a mpl e sw e r ec o l l e c t e da m o ngpa t i e n t s,a n d7c o mm o npa t h oge n so fl o w e rr e sp
8、i r a t o ryt r a c t i n f e c t i o nw e r ed e t e c t e dbyt h eL AM Pm i c r o c h ipm e t h o da n d spu t u mc u l t u r em e t h o d.T h ed i s t r i b u t i o no fpa t h oge n i cb a c t e r i aw a s o b s e r v e d,a n d t h e c o n s i s t e n cy,s e n s i t i v i ty,a n d spe c i f i c i
9、 tyo f t h epa t h oge n i cb a c t e r i ao f l o w e r r e spi r a t o ryt r a c t i n f e c t i o nw e r e c o mpa r e db e t w e e n t h e t w om e t h o d s.R e s u l t sA m o ng3 8 3pa t i e n t s,9 2c a s e s(2 4.0 2%)w e r epo s i t i v ef o rpa t h oge n i cb a c t e r i abyt h eL AM Pm i c
10、 r o c h ipm e t h o d,o fw h i c h6 7c a s e s(7 4.4 4%)w e r e i n f e c t e dw i t hs i ngl epa t h oge n s a n d2 5c a s e s(2 7.1 7%)w e r e i n f e c t e dw i t hm i x e dpa t h oge n s.T h i r tyc a s e s(7.8 3%)t e s t e dpo s i t i v e f o r spu t u mc u l t u r e.T h epo s i t i v e r a t
11、eo fpa t h oge n i cb a c t e r i ad e t e c t e dbyt h eL AM Pm i c r o c h ipm e t h o dw a sh igh e r t h a nt h a to f t h espu t u mc u l t u r em e t h o d(2=5 1.9 4 6,P6 0ye a r so l d)gr o up,a n dt h ed e t e c t i o nr a t eo fpa t h oge n s i nt h e t w ogr o upsw a sc o mpa r e d,a n dt
12、h ed i f f e r e n c ew a sn o t s t a t i s t i c a l lys ign i f i c a n t(P0.0 5).C o n c l u s i o nI n H u a i R o u a r e a o f B e iji ng,t h epa t h oge n i cb a c t e r i a d e t e c t e d a r e K l e b s i e l l apn e u m o n i a,P s e u d o m o n a sa e r ugi n o s a,a n d M a l t oph i l
13、 u ss t a s i s,a n dL AM P m i c r o c h ipm e t h o ds h o w sab e t t e rc l i n i c a lap pl i c a t i o nv a l u e f o r t h ed i agn o s i s o f l o w e r r e spi r a t o ryt r a c t i n f e c t i o n.K e yw o r d s:L AMP m i c r o c h ipm e t h o d;Spu t u m c u l t u r e;L o w e rr e spi r a
14、 t o ryt r a c ti n f e c t i o n;P a t h oge n i cb a c t e r i a 据世界卫生组织2 0 2 0年发布的统计结果显示,下呼吸道感染(l o w e r r e s p i r a t o r yt r a c t i n f e c t i o n,L R T I)是全球最致命的传染病之一,位居十大死亡原因的第四位1。引发下呼吸道感染疾病的致病病原菌种类较多且临床症状表现相似,不易通过临床症状对病因进行诊断2-4。目前临床鉴定病原菌通常利用患者的痰液标本进行病原微生物培养,但痰培养存在时间周期长、步骤繁琐、阳性率低等问题。环介导
15、恒温扩增技术(l o o p-m e d i a t e di s o t h e r m a la m p l i f i c a t i o n,L AM P)依赖于识别保守序列D N A的6个特异性片段的4条引物和一种链置换D N A聚合酶5。基于这一技术,将L AM P与微流控芯片技术相结合,通过微流体技术在一张芯片上同时进行多个L AM P反应,扩增多条目的基因,可满足L AM P技术的多重检测需求,具有操作简便,实时快速等优点,在疾病监测、病原体鉴定、环境监测等领域应用广泛6-8。本研究采用L AM P芯片法和痰培养法检测下呼吸道感染患者7种常见病原菌,比较两种方法对下呼吸道感染病
16、原菌的检测效能,评估L AM P芯片法在下呼吸道感染患者病原菌检测中的临床诊断价值。材料和方法 1 一般资料 收集北京中医医院怀柔医院3 8 3例疑似下呼吸道感染患者病例标本作为研究对象,采集时间为2 0 2 0年1 2月至2 0 2 2年5月。纳入标准:患者有明确的呼吸道感染症状,如肺部湿啰音、咳嗽、咳痰;或经胸部X线或胸部C T检查,临床医生判定为肺部感染的患者下呼吸道标本。可收集到住院或就诊患者完整的临床资料,并且能够成功采集到其痰液标本。排除标准:临床医生高度怀疑或明确诊断为真菌性呼吸道感染、病毒性呼吸道感染或肺结核患者。同一位患者的同种标本。2 主要仪器与试剂 R T i s o c h i pTM-A恒温扩增微流控芯片核酸分析仪、呼吸道病原菌核酸检测试剂盒(恒温扩增芯片法)购自博奥晶典生物科技有限公司;痰培养血平板、中国蓝平板购自广州市迪景微生物科技有限公司;激光解析电离飞行时间质谱仪MA L D-T O F购自德国布鲁克公司;细菌全自动鉴定药敏仪P h o e n i x 1 0 0购自美国B D公司。3 检测方法 3.1 标本采集 采集标本为疑似下呼吸道感染患者的痰液。