1、中华中医药杂志(原中国医药学报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 609 论著通信作者：瞿融，江苏省南京市栖霞区仙林大道138号南京中医药大学，邮编：210046，电话：025-85811929，E-mail：黄芩基于PI3K/AKT/GSK3/-catenin通路对慢性皮质酮诱导的抑郁小鼠神经发生的影响赵凡，张卫华，孙若岚，梁研，瞿融（南京中医药大学中医学院中西医结合学院，南京 210046）摘要：目的：研究黄芩对慢性皮质酮诱导的抑郁小鼠神经发生的影响并探讨可能机制。方法：将50只雌性C57BL/6J小鼠随机分为空白组、模型组、艾
2、斯西酞普兰组、黄芩低剂量组及黄芩高剂量组，慢性皮质酮皮下注射6周诱导抑郁模型小鼠，造模3周后再给予艾斯西酞普兰10 mg/kg，黄芩0.75、1.5 g/kg治疗3周。给药结束后进行糖水偏好、悬尾、强迫游泳、开场、新颖摄食行为学测试，ELISA检测血清皮质酮含量，免疫组化检测海马齿状回Ki-67及BrdU阳性细胞数，Western Blot检测PI3K/AKT/GSK3/-catenin通路蛋白表达。结果：与空白组比较，模型组糖水偏好率显著降低（P0.01），悬尾和强迫游泳实验中不动时间显著延长（P0.01），新颖摄食实验中摄食潜伏期显著增加（P0.01）、食物消耗率显著降低（P0.01），血
3、清皮质酮含量显著升高（P0.01），海马齿状回Ki-67及BrdU阳性细胞数显著降低（P0.01），海马组织p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、-catenin蛋白表达显著下调（P0.01）；与模型组比较，艾斯西酞普兰组和黄芩高剂量组糖水偏好、悬尾、强迫游泳、新颖摄食行为学指标显著改善（P0.01，P0.05），黄芩低剂量组悬尾、强迫游泳、新颖摄食潜伏期指标显著改善（P0.01，P0.05），艾斯西酞普兰组及黄芩高剂量组p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、-catenin蛋白表达显著上调（P0.01，P0.05），黄芩低剂量组p-AKT、-catenin蛋白表达上调（P0.01，P0.
4、05）。结论：黄芩可改善慢性皮质酮抑郁模型小鼠的抑郁样行为，促进神经发生，其作用机制可能与PI3K/AKT/GSK3/-catenin信号通路相关。关键词：黄芩；皮质酮；神经发生；PI3K/AKT/GSK3/-catenin；抗抑郁基金资助：国家自然科学基金项目（No.81573701），江苏省中医药科技发展计划项目（No.QN202104），江苏省研究生科研与实践创新计划项目（No.KYCX19_1282）Effects of Radix Scutellariae on neurogenesis in chronic corticosterone-induced depression mou
5、se based on PI3K/AKT/GSK3/-catenin signaling pathwayZHAO Fan,ZHANG Wei-hua,SUN Ruo-lan,LIANG Yan,QU Rong(School of Chinese MedicineSchool of Integrated Chinese and Western Medicine,Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210046,China)Abstract:Objective:To study the effects of Radix Scutellari
6、ae on neurogenesis in chronic corticosterone-induced depression mouse and explore its possible mechanism.Methods:Fifty female C57BL/6J mice were randomly divided into control group,model group,escitalopram group,Radix Scutellariae low-dose group and high-dose group.Chronic corticosterone was injecte
7、d subcutaneously for 6 weeks to induce depression model mice.After 3 weeks,the other three groups except the control group were treated with escitalopram 10 mg/kg,Radix Scutellariae 0.75 and 1.5 g/kg for 3 weeks.The sucrose preference test,tail suspension test,forced swimming test,open field test,no
8、velty-suppressed feeding tests were used to evaluate the depressive-like behaviors after the administration.ELISA was used to detect serum corticosterone content.Immunohistochemistry was used to detect the number of Ki-67 and BrdU positive cells in the hippocampal dentate gyrus.Western Blot was used
9、 to detect PI3K/AKT/GSK3/-catenin pathway proteins expression.Results:Compared with the control group,the mices sucrose preference rate decreased(P0.01),the immobility time in the tail suspension and forced swimming experiment was prolonged(P0.01),the incubation period increased(P0.01),the feeding r
10、ate decreased in the novel feeding experiment(P0.01),and the serum corticosterone content increased(P0.01)after 6 weeks corticosterone injecting.The number of Ki-67 and BrdU positive cells in the hippocampal dentate gyrus were also significantly reduced(P0.01),and the protein expressions of p-PI3K,p
11、-AKT,p-GSK3 and-catenin in hippocampus tissue were significantly down-regulated(P0.01).Compared with model group,the behaviors indicators of sucrose preference test,tail suspension test,forced swimming test,novelty-suppressed feeding tests in escitalopram 内文1.indd 6092023/2/10 16:57:27中华中医药杂志(原中国医药学
12、报)2023年2月第38卷第2期 CJTCMP,February 2023,Vol.38,No.2 610 抑郁症是一种常见的情感障碍性疾病，以情绪低落、快感缺失、兴趣减退、精神迟滞等为核心症状，具有复发率高、致残率高、自杀率高等特点1。传统的抗抑郁药如单胺氧化酶抑制剂、三环类抗抑郁药、5-羟色胺再摄取抑制剂仍存在较多的不良反应及药物耐受性2，而中药在抑郁症治疗方面立足于整体调节，且不良反应少，很可能成为抑郁症治疗的 新突破。抑郁症属中医“郁病”范畴，多因肝失疏泄，肝气郁结而发病。肝气郁滞，易于化火，气滞与内火相互影响，又可变生诸症。对其中医证候及证型进行研究发现，气郁化火及火热病理因素较为常
13、见3。因此，临床治疗抑郁症多配伍具有清热作用的药物。本课题组对文献进行初步统计发现，黄芩是抗抑郁方剂中配伍运用最多的清热药。黄芩作为传统的清热药，具有清热燥湿、泻火解毒之功效。医学衷中参西录记载黄芩“兼能调气，无论何脏腑，其气郁而作热者，皆能宣通之”。本课题组前期研究4发现，在历代治疗神志病的含黄芩方剂中，主治疾病排第一位的是郁病及相关病证。含黄芩的方剂如小柴胡汤、柴胡加龙骨牡蛎汤、柴胡桂枝汤等，临床抗抑郁疗效显著5-7。实验研究8-9亦显示，黄芩能改善慢性应激抑郁小鼠的抑郁样行为，保护神经元、减少神经元凋亡，但其详细具体机制需要进一步研究。传统的抑郁症发病机制假说如细胞因子假说、神经内分泌假
14、说、神经免疫假说、单胺类神经递质假说等，均不能完全解释抑郁症的发病机制。近年来，提出的神经元再生与神经可塑性假说认为抑郁症的发生与海马神经发生受损密切相关10，而磷酸肌醇三激酶（human phosphoinositide-3 kinase，PI3K）涉及突触可塑性、学习和记忆以及抑郁的变化，其活化可介导苏氨酸蛋白激酶（AKT）磷酸化触发糖原合成酶激酶（glycogen synthase kinase 3 beta，GSK3）活性，调节-连环蛋白（-catenin）的表达，影响行为恢复。因此，本研究基于PI3K/AKT/GSK3/-catenin通路探讨黄芩对慢性皮质酮（corticoster
15、one，CORT）诱导的抑郁小鼠神经发生的影响，以期为临床使用黄芩抗抑郁提供更多的实验依据。材料1.动物 SPF级成年雌性C57BL/6J小鼠50只，68周龄，体质量1822 g，购自上海西普尔-毕凯实验小鼠有限公司，许可证号为：SCXK（沪）2013-0016。小鼠置于标准SPF饲养环境中，自由进食和饮水，保持12 h昼夜节律（6：0018：00），恒温（222）。该实验经南京中医药大学实验小鼠伦理委员会批准（伦理批准号：201905A033）。2.药物及制备 黄芩（批号：1303011）购自四川新荷花中药饮品股份有限公司，经南京中医药大学陶伟伟副教授鉴定为唇形科多年生草本植物黄芩Scute
16、llaria baicalensis Georgi的干燥根。经两次煎煮制成终浓度为0.15 g/mL的水溶液，-20 保存。CORT（货号：TCI-C0388）购自日本TCI公司，溶解于含有0.1%二甲基亚砜（DMSO）的0.9%氯化钠溶液中，超声为均匀的乳白色混悬液（浓度为4 mg/mL）。艾斯西酞普兰（Escitalopram，ES）（批号：J20100165）购自西安杨森公司，溶解于0.9%氯化钠溶液中配制成 0.1 mg/mL药液。3.试剂 5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）（批号：B5002）购自美国Sigma公司，蔗糖（货号：S12228）、DMSO（货号：D103283）购自阿拉丁公司，小鼠CORT ELISA试剂盒（货号：ZC-38553）购自中国ZCIBIO公司，蛋白酶抑制剂（货号：HY-K0010）购自美国MCE公司，RIPA裂解液（货号：R0010）购自Solaibio公司，高尔基试剂盒（货号：HTKNS1125）购自美国Hito 公司，Ki67抗体（货号：ab15580）、BrdU抗体（货号：ab6326）、二抗Goat Anti-Rabbit IgG HRP（货