1、-119-横经席提取物降血脂功效评价的实验研究 蒙永明1,2 吕林艳1,2 朱运锐1,2 黄源春1,2 梁云飞1,2 郑志远1,2 （1.广西梧州制药（集团）股份有限公司，广西 梧州 543000；2.广西药物提纯工程技术研究中心，广西 梧州 543000）【摘 要】目的：研究和评价横经席提取物的降血脂功效。方法：建立高血脂斑马鱼模型，制备横经席根茎、枝叶和种子的提取物，并以高、中、低三种浓度分别处理高血脂斑马鱼，观察和比较横经席不同部位提取物对高血脂斑马鱼甘油三脂、胆固醇、血流速度和血管壁厚度的影响。结果：横经席根茎、枝叶和种子的提取物均能降低高血脂斑马鱼的甘油三酯水平和胆固醇水平，并改善高
2、血脂引起的血流速度和血管壁厚度异常。结论：横经席提取物对实验的动物模型具有降血脂功效。【关键词】横经席提取物；降血脂；功效评价【中图分类号】R282 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1151(2022)12-0119-05 Experimental Study on the Evaluation for Hypolipidemic Effect of Calophylli Herba Extracts Abstract:Objective:To study and evaluate the hypolipidemic effect of Calophylli herba extract
3、s.Methods:A hyperlipidemic zebrafish model was established and the extracts of the rhizomes,branch,leaves and seeds of Calophylli herba were prepared.The hyperlipidemic zebrafish were treated with high,medium and low concentrations respectively.The effects of the extracts from different parts of the
4、 Calophylli herba on the triglyceride,cholesterol,blood flow velocity and vessel wall thickness of the hyperlipidemic zebrafish were observed and compared.Results:The extracts from the rhizomes,branch,leaves and seeds of Calophylli herba can reduce the triglycerides level and cholesterol level of hy
5、perlipidemic zebrafish,and improve the abnormal blood flow velocity and vessel wall thickness caused by hyperlipidemia.Conclusion:The extracts of Calophylli herba have hypolipidemic effect in the experimental animal models.Key words:Calophylli herba extracts;hypolipidemic;effect evaluation 引言 横经席，又名
6、薄叶红厚壳、跌打将军、独角风等，其植株多个部位含有香豆素类、呫吨酮类、黄酮类、萜类等多种类化合物1，药用前景广阔，具有祛风湿、强筋骨、止痛、治疗跌打损伤等功效。已有文献公开了横经席的抗炎镇痛作用，并且验证了其急性与毒性小的特点2。横经席的种植周期长，多数源自于野生采摘3。随着市场需求的增长，横经席药材资源的供给相对紧张。鉴于横经席药材的珍贵，如何进一步开发更多的药用功能、实现横经席药材资源的综合利用，是需要探讨的技术问题。有关横经席的药效学研究并不多见，目前未见有横经席其他药用用途的报道。本文通过建立高血脂斑马鱼模型来开展实验，观察比较横经席根茎、枝叶和种子的提取物对高血脂斑马鱼甘油三脂、胆固
7、醇、血流速度和血管壁厚度的影响，以评价横经席提取物的降血脂功效。1 实验材料与仪器 1.1 实验动物实验动物 黑色素等位基因突变型半透明 Albino 品系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，年龄为受精后 5 天（5 dpf）的斑马鱼用于降血脂功效最大检测浓度（maximum test concentration，MTC）测定及其功效评价。转基因血管绿色荧光斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行，年龄为受精后 5 天（5 dpf）的斑马鱼用于改善血管壁厚度功效评价。以上所述的实验用斑马鱼均饲养于 28 的养鱼用水中（水质：每 1 L 反渗透水中加入 200 mg 速溶海盐，电导率为 450 Scm
8、-1550 Scm-1；pH 为 6.58.5；硬度为总第 24 卷 280 期 大 众 科 技 Vol.24 No.12 2022 年 12 月 Popular Science&Technology December 2022 【收稿日期】2022-09-21【基金项目】梧州市科技计划项目（2022A04021）。【作者简介】蒙永明（1987），男，广西梧州制药（集团）股份有限公司工程师，从事药用材料研究相关工作。【通信作者】郑志远（1967），男，广西梧州制药（集团）股份有限公司高级工程师，从事药物研究相关工作。-120-50 mgL-1100 mgL-1 CaCO3），由杭州环特生物科技
9、股份有限公司养鱼中心繁殖提供，实验动物使用许可证号为SYXK（浙）2022-0004，饲养管理符合国际 AAALAC 认证（认证编号：001458）的要求。1.2 实验仪器、耗材与试剂实验仪器、耗材与试剂 解剖显微镜（SZX7，日本 OLYMPUS 公司）；显微注射仪（IM300，日本 Narishige 公司）；拉针仪（PC-10，日本Narishige 公司）；CCD 相机（VertA1，上海土森视觉科技有限公司）；电动聚焦连续变倍荧光显微镜（AZ100，日本 Nikon公司）；精密电子天平（CP214，美国 OHAUS 公司）；6 孔板（中国 Nest Biotech 公司）；心跳血流分
10、析系统（ZebraBlood 3.4，法国 ViewPoint Life Sciences 公司）；激光共聚焦显微镜（A1R，日本 Nikon 公司）。二甲基亚砜（DMSO，批号 BCCD8942，瑞士 Sigma 公司）；甲基纤维素（批号 B2006074，上海阿拉丁生化科技股份有限公司）；胆固醇探针 CholEsteryl BODIPY542/563 C11（批号 2291600，美国 invitrogen 公司）；油红 O（批号SHBM5455，美国 Sigma 公司）；1.2-丙二醇（批号 20211117，国药集团化学试剂有限公司）；纯蛋黄粉（批号 20200809，浙江艾格生物科技
11、股份有限公司）；D-(+)-葡萄糖（批号20201105，国药集团化学试剂有限公司）。1.3 药物制备药物制备 取横经席根茎、枝叶和种子分别粉碎，各自称取 10 g 所得药粉加入 50 mL 纯化水提取，保持微沸 30 min，过滤，药渣加入 20 mL30 mL 纯化水继续提取，保持微沸 20 min，再次过滤，合并两次提取液，然后加入纯化水定量至 50 mL，即得含量为 0.2 gmL-1（每毫升提取液相当于 0.2 g 生药）的横经席提取物，以此作为样品母液，并于-20 分装储存，使用时稀释。阳性对照药物：阿托伐他汀钙片（以下简称阿托伐他汀钙），白色片剂，批号 202105219C，乐普
12、医疗，阴凉避光储存。用 DMSO 配制成 11.6 mgmL-1母液，-20 分装储存，使用时稀释。2 实验方法 2.1 MTC 测定测定 随机选取5 dpf黑色素等位基因突变型半透明Albino品系斑马鱼于烧杯中，每烧杯 30 尾。分别水溶给予横经席根茎、横经席枝叶和横经席种子提取物高、中、低三种浓度的样品溶液，同时设置正常对照组和模型对照组，每杯容量为 25 mL。除正常对照组外，其余各实验组均水溶给予高脂饲料（纯蛋黄粉+葡萄糖）喂饲斑马鱼，建立斑马鱼高血脂模型。样品与高脂饲料共同处理 15 h（每天共同处理 7.5 h）。在样品处理期间，每天需统计各实验组的斑马鱼死亡数量并及时移除。28
13、 处理 48 h 后，测定横经席样品对高血脂模型斑马鱼的MTC。2.2 降甘油三酯功效评价降甘油三酯功效评价 斑马鱼高血脂模型建立如“2.1”节所述，增加阳性对照阿托伐他汀钙 11.6 gmL-1浓度，样品与高脂饲料共同处理15 h（每天共同处理 7.5 h）。28 处理 48 h 后，给予油红 O进行整体脂肪染色。染色结束后，每个实验组随机选取 10 尾斑马鱼在解剖显微镜下拍照，用 NIS-Elements D 3.20 高级图像处理软件分析并采集数据，分析斑马鱼尾部血管染色强度，以该指标的统计学分析结果评价横经席样品降甘油三酯功效。2.3 降胆固醇功效评价降胆固醇功效评价 斑马鱼高血脂模型
14、建立如“2.1”节所述，增加阳性对照阿托伐他汀钙 11.6 gmL-1浓度，样品与高脂饲料共同处理15 h（每天共同处理 7.5 h）。28 处理 32 h 时，注射胆固醇探针。继续处理 16 h 后，每个实验组随机选取 10 尾斑马鱼在荧光显微镜下拍照，用 NIS-Elements D 3.20 高级图像处理软件分析并采集数据，分析斑马鱼尾部血管胆固醇荧光强度，以该指标的统计学分析结果评价横经席样品降胆固醇功效。2.4 改善高血脂血流功效评价改善高血脂血流功效评价 斑马鱼高血脂模型建立如“2.1”节所述，增加阳性对照阿托伐他汀钙 11.6 gmL-1浓度，样品与高脂饲料共同处理15 h（每天
15、共同处理 7.5 h）。28 处理 48 h 后，每个实验组随机选取10尾斑马鱼置于心跳血流分析系统下录制斑马鱼血流视频，分析统计斑马鱼血流速度，以该指标的统计学分析结果评价横经席样品改善高血脂血流功效。2.5 改善血管壁厚度功效评价改善血管壁厚度功效评价 随机选取 5 dpf 转基因血管绿色荧光斑马鱼于烧杯中，每烧杯 30 尾。分别水溶给予横经席根茎、横经席枝叶和横经席种子高、中、低三种浓度的样品溶液，阳性对照阿托伐他汀钙11.6 gmL-1浓度，同时设置正常对照组和模型对照组，每杯容量为 25 mL。除正常对照组外，其余各实验组均水溶给予高脂饲料，建立斑马鱼高血脂模型。样品与高脂饲料共同处
16、理 15 h（每天共同处理 7.5 h）。28 处理 48 h 后，每个实验组随机选取 3 尾斑马鱼置于激光共聚焦显微镜下拍照，以斑马鱼眼部血管壁厚度定性评价横经席样品改善血管壁厚度功效。2.6 数据处理数据处理 实验数据结果均采用（均数标准差，?SD）表示，运用 SPSS 26.0 软件进行统计学分析，P0.05 表明差异具有统计学意义。3 结果与讨论 3.1 MTC 从表 1 可看出，当横经席根茎提取物和横经席枝叶提取物浓度均为 250 gmL-1时，斑马鱼的表型较模型对照组状态均开始严重。因此在本实验条件下，横经席根茎和横经席枝叶降血脂功效的 MTC 均为 125 gmL-1，横经席种子降血脂功效的 MTC 为 2000 gmL-1。-121-表表 1 横经席样品降血脂功效浓度摸索实验结果（横经席样品降血脂功效浓度摸索实验结果（n=30）组别 浓度（gmL-1）死亡数（尾）死亡率（%）表型 正常对照组/0 0 未见明显异常 模型对照组/0 0 未见明显异常 横经席根茎 31.2 0 0 与模型对照组状态相似 62.5 0 0 与模型对照组状态相似 125 0 0 与模型对照组状态