1、ICS67.050CCS X 04GB中华人民共和国国家标准GB23200.118-2021食品安全国家标准植物源性食品中单氰胺残留量的测定液相色谱-质谱联用法National food safety standard-Determination of cyanamide residues in foods of plant origin-Liquid chromatography tandem mass spectrometry method2021-03-03发布2021-09-03实施中华人民共和国国家卫生健康委员会中华人民共和国农业农村部发布国家市场监督管理总局GB23200.118-
2、2021食品安全国家标准植物源性食品中单氰胺残留量的测定液相色谱-质谱联用法1范围本文件规定了植物源性食品中单氰胺残留量的液相色谱质谱联用检测方法。本文件适用于植物源性食品中单氰胺残留量的测定。2规范性引用文件PUBI下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB2763-2021食品安全国家标准食品中农药最大残留限量GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中的单氰胺用水和丙酮等溶剂提取，再经固相材料分散净化处理，净化液与丹磺酰氯(dans
3、ylchloride)反应后生成的衍生物经液相色谱质谱联用法检测，外标法定量4试剂和材料刀工除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯水为GB/T6682规定的一级水4.1试剂4.1.1乙腈(CHCN.CAS号：75-058)：色谱纯4.1.2丙酮(CHCOCH,CAS号：67-64-1)：色谱纯4.1.3碳酸钠(Na COCAS号：49719-8)4.1.4碳酸氢钠(NaHCOCAS号：14455-8)。4.1.5丹磺酰氯(CHCINO_S.CAS号：605-65-2)：纯度98.0%，2018保存。4.2溶液配制4.2.1碳酸钠溶液(0.2 mol/L):称取 0.53 g碳酸钠用水溶解混匀并
4、定容至25mL。4.2.2碳酸氢钠水溶液(0.2 mol/L):称取1.68 g碳酸氢钠，用水溶解混匀并定容至100 mL。4.2.3碳酸钠-碳酸氢钠溶液(4：46.体积比)：吸取4 mL碳酸钠溶液(4.2.1)，加入46mL碳酸氢钠溶液(4.2.2)，混合均匀。4.2.4丹磺酰氯丙酮溶液(5.0g/L):称取0.5g丹磺酰氯，用丙酮溶解混匀并定容至100 mL。4.2.5甲酸溶液(0.1%)：吸取100L甲酸，加水混匀定容至100mL。4.3标准品单氰胺(CN2H2,CAS号：420-04-2)标准品：纯度98.0%。4.4标准溶液配制4.4.1单氰胺标准储备溶液(100 mg/L):准确称
5、取单氰胺标准品10 mg(精确至0.1mg)于50mL烧杯中，用丙酮溶解后转移到100mL容量瓶中，并用丙酮定容。放置于-18冰箱，有效期1个月。4.4.2单氰胺标准工作液(10mg/L):吸取5.0 mL单氰胺标准储备溶液于50mL容量瓶中，用丙酮定容。放置于18冰箱，有效期2周3周。1GB 23200.118-20214.5材料4.5.1多壁碳纳米管(MWCNTs):粒径为10 nm20 nm;颗粒物长度为5 m15 m;比表面积为(22525)m2/g。4.5.2膜：0.22m,有。5仪器和设备5.1液相色谱-质谱联用仪：配有电喷雾离子源(ESI)。5.2分析天平：感量0.0001g、感
6、量0.01g5.3组织捣碎仪。5.4离心：转不低于10000r/min。5.5涡旋振荡器。5.6恒温水浴锅。6试样的制备和储存样品测定部位按照GB2763-2021中附录A的规定执行。食用菌、热带和亚热带水果（皮可食）随机取样1kg,水生蔬菜、茎菜类蔬菜、豆类蔬菜、核果类水果、热带和亚热带水果（皮不可食）随机取样2kg,瓜类蔬菜和水果取4个6个个体（取样量不少于1kg),其他蔬菜和水果随机取样3kg。对于个体较小的样品，取样后全部处理；对于个体较大的基本均匀样品，可在对称轴或对称面上分割或切成小块后处理；对于细长、扁平或组分含量在各部分有差异的样品，可在不同部位切取小片或截成小段后处理；取后的
7、样品将其切碎，充分混匀，用四分法取一部分或全部用组织捣碎机匀浆后，放入聚乙烯瓶中。干制蔬菜、水果和食用菌随机取样500g,粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。谷类随机取样500g,粉碎后使其全部可通过425m的标准网筛，放入聚乙烯瓶或袋中。油料、茶叶、坚果和香辛料（调味料）随机取样500g,粉碎后充分混匀，放入聚乙烯瓶或袋中。植物油类搅拌均匀，放入聚乙烯瓶中。试样于一18条件下保存。7分析步骤7.1提取7.1.1蔬菜、水果类称取10g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，参见附表A.1补水，然后视基质不同加入10mL30 mL丙酮(4.1.2)，不同基质有机提取溶剂用量见表A.1,涡旋振
8、荡5min,超声10 min后，以4000r/min离心5min,待净化。7.1.2谷物、坚果、油料作物、植物油类称取5g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，见表A.1补水，静置30min后，然后视基质不同加入10mL20mL丙酮，不同基质有机提取溶剂用量见表A.1,涡旋振荡5min,超声10min后，以4000r/min离心5min,待净化。7.1.3香辛料（调味料）、茶叶类称取2g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，见表A.1补水，静置30min后，然后加入8mL乙腈(4.1.1)，涡旋振荡5min,超声10min后，以4000r/min离心5min,待净化。7.1.4植物
9、油称取5g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，见表A.1补水，然后视基质不同加入20mL丙酮，不同基质有机提取溶剂用量见表A.1,涡旋振荡5min,超声10min后，以4000r/min离心5min,待净2GB23200.118-2021化。7.1.5食用菌类称取10g(精确至0.01g)试样于50mL离心管中，见表A.1补水，然后加入8mL乙腈(4.1.1)，涡旋振荡5min,超声10min后，以4000r/min离心5min,待净化。7.2净化7.2.1蔬菜、水果、坚果、谷物类吸取1mL提取液于含5mg多壁碳纳米管(4.5.1)的1.5mL离心管中，涡旋1min后，以10000r/
10、min离心1min,取上清液过0.22m有机系滤膜(4.5.2)于2mL离心管中，待衍生化。注：特殊干扰严重基质例如韭菜，需采用10mg多壁碳纳米管(4.5.1)。7.2.2植物油、油料作物类吸取1mL提取液直接过0.22m有机系滤膜(4.5.2)于2mL离心管中，待衍生化。7.2.3香辛料（调味料）、茶叶类准确吸取2mL提取液于5mL具塞离心管中，加入2mL正已烷，涡旋振荡3min,弃去正已烷层，重复净化一次，取乙腈层1mL于含10mg多壁碳纳米管(4.5.1)的1.5mL离心管中，涡旋1min,以10000r/min离心1 min,取上清液过0.22gm有机系滤膜(4.5.2)于2mL离心
11、管中，待衍生化。7.2.4食用菌类准确吸取2mL提取液直接于5mL离心管中，加入2mL正已烷，涡旋振荡3min,弃去正已烷层，取乙腈层1mL于含10mg多壁碳纳米管(4.5.1)的1.5mL离心管中，涡旋1min,以10000r/min离心1min,取上清液过0.22m有机系滤膜(4.5.2)于2mL离心管中，待衍生化。7.3衍生化取0.5mL净化后的提取液于2mL离心管中，加入0.5mL碳酸钠-碳酸氢钠混合溶液(4.2.3)，混匀后再加入0.5mL丹磺酰氯丙酮溶液(4.2.4)，涡旋1min,于50水浴中衍生1h,衍生后以10000r/min离心1min,取上清液过0.22m有机系滤膜(4.
12、5.2)，供检测。除样品外，单氰胺基质匹配标准溶液也应按此方法同时进行衍生化。7.4仪器参考条件7.4.1液相色谱参考条件a)色谱柱：C1s,100mm2.1mm,粒径1.9um;b)流动相：乙腈-甲酸溶液=50：50（体积比），等度洗脱；c)流速：0.2 mL/min;d)柱温：室温；e)进样体积：10L;)运行时间：4min。注：如液相色谱不是超高效液相色谱，也可配置普通规格Cs色谱柱，150mm3.0mm,粒径5m,或相当者，运行时间根据出峰情况进行调整。7.4.2质谱参考条件a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：负离子扫描；c)喷雾电压：3000V;d)毛细管温度：350；e)气化温度：300；气：N2,206.8 kPa;g)辅助气：N2,3L/min;h)碰撞气：氩气，0.2 Pa;i)检测方式：多反应监测(MRM),多反应监测条件见表1。3