1、I C S6 7.0 5 0C C SC5 3中华人民共和国出入境检验检疫行业标准S N/T5 4 4 02 0 2 2 出口食品中双炔酰菌胺、噻唑菌胺、吲唑磺菌胺等多种酰胺类杀菌剂残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法D e t e r m i n a t i o n o f m u l t i p l e a m i d e f u n g i c i d e s i n c l u d i n g m a n d i p r o p a m i d,e t h a b o x a m,a m i s u l b r o m e t c i n f o o d f o r e x p o r
2、tL C-M S/M S m e t h o d2 0 2 2-0 3-1 4发布2 0 2 2-1 0-0 1实施中华人民共和国海关总署发 布以正式出版文本为准以正式出版文本为准前言本 文件按照 G B/T 1.12 0 2 0 标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则 要求进行编制。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署提出并归口。本文件起草单位:中华人民共和国杭州海关技术中心。本文件主要起草人:祝子铜、谢文、雷美康、姜芝英、候建波、叶有标、章应俊。S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准以正
3、式出版文本为准出口食品中双炔酰菌胺、噻唑菌胺、吲唑磺菌胺等多种酰胺类杀菌剂残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法1 范围本文件规定了出口食品中双炔酰菌胺、噻唑菌胺、吲唑磺菌胺、硅噻菌胺、吡噻菌胺残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本文件适用于葡萄、白菜、芹菜、黄瓜、番茄、草莓、花生、猪肉中双炔酰菌胺、噻唑菌胺、吲唑磺菌胺、硅噻菌胺、吡噻菌胺残留量的定量测定和确证。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。G B/T 6 6 8 2 分析实
4、验室用水规格和试验方法3 术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4 方法提要试样中残留的双炔酰菌胺、噻唑菌胺、吲唑磺菌胺、硅噻菌胺、吡噻菌胺经1%乙酸乙腈溶液均质提取后,采用基质分散固相萃取净化,液相色谱-质谱/质谱测定,外标法定量。5 试剂和材料除特殊说明外,所有试剂均为分析纯,水为符合G B/T 6 6 8 2规定的一级水。5.1 乙腈:色谱纯。5.2 甲醇:色谱纯。5.3 甲酸:色谱纯。5.4 1%乙酸乙腈溶液:取1.0 m L乙酸,用乙腈稀释并定容至1 0 0 m L。5.5 0.1 5%甲酸溶液:取1.5 m L甲酸,用水稀释并定容至1 0 0 0 m L。5.6 标准物质:双炔
5、酰菌胺、噻唑菌胺、吲唑磺菌胺、硅噻菌胺、吡噻菌胺,纯度均大于9 8.0%,5种酰胺类化合物的中文名称、英文名称、C A S号、分子式和分子量参见附录A。5.7 标准储备溶液:分别准确称取适量的标准物质(5.6),用乙腈分别配制成浓度为1 0 0 0 g/m L标1S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准准储备液,于-1 8 避光保存。5.8 混合标准中间液:分别准确移取适量的标准储备溶液(5.7),用乙腈稀释配制成浓度为1 0 g/m L的混合标准中间液,于-1 8 避光保存。5.9 基质标准工作液:准确移取混合标准中间液适量(5.8),用空白样品基质溶液配制成浓度为1.0 n
6、 g/m L、2.0 n g/m L、5.0 n g/m L、1 0.0 n g/m L、2 0.0 n g/m L、4 0.0 n g/m L、6 0.0 n g/m L的基质标准工作液,现用现配。5.1 0 基质分散固相萃取剂:4 g无水硫酸镁,1 g氯化钠,1 g柠檬酸钠和0.5 g柠檬酸氢二钠。5.1 1 基质分散固相净化剂:1 5 0 m g无水硫酸镁,2 5 m g N-丙基乙二胺,7 5 m g石墨化碳黑。5.1 2 微孔滤膜:0.2 2 m,有机滤膜。6 仪器和设备6.1 液相色谱-质谱/质谱仪:配电喷雾离子源(E S I)。6.2 分析天平:感量为0.0 0 0 1 g和0.
7、0 1 g。6.3 离心机:转速大于等于8 0 0 0 r/m i n。6.4 均质机。6.5 涡旋混合器。6.6 离心管:5 0 m L聚四氟乙烯离心管。7 样品制备与保存取代表性样品部分约 5 0 0 g,将其可食部分先切碎,经多功能食品搅拌机充分捣碎均匀,试样均分为两份,装入洁净容器,密封,并标明标记,于-1 8 以下冷冻存放。在制样过程中,应防止样品污染或发生残留物含量的变化。8 分析步骤8.1 提取8.1.1 蔬菜、水果称取1 0 g试样(精确到0.0 1 g)于5 0 m L离心管中,加入2 0 m L 1%乙酸乙腈溶液,用均质机以9 0 0 0 r/m i n均质1 m i n,
8、加入基质分散固相萃取剂(5.1 0),涡旋1 m i n,以8 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,上清液待净化。8.1.2 肉制品、坚果类称取5 g试样(精确到0.0 1 g)于5 0 m L离心管中,加入1 5 m L 1%乙酸乙腈溶液,用均质机以9 0 0 0 r/m i n均质1 m i n,以8 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,上清液转移至2 5 m L比色管中,再加入1 0 m L 1%乙酸乙腈溶液至残渣中,涡旋1 m i n,以8 0 0 0 r/m i n离心5 m i n,上清液转移至2 5 m L比色管中,用1%乙酸乙腈定容至2 5 m L,待净化。
9、8.2 净化取2 m L待净化液至含有基质分散固相净化剂(5.1 1)的离心管中,涡旋1 m i n,以8 0 0 0 r/m i n离心5 m i n。取0.5 m L上清液,加入0.5 m L水,涡旋1 m i n,过0.2 2 m滤膜,供液相色谱-质谱/质谱仪2S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准测定。8.3 测定8.3.1 液相色谱条件如下:a)色谱柱:A c c u c o r e X L C1 8柱,4.6 mm1 5 0 mm(内径),粒度4.0 m,或相当者;b)流动相:A,甲醇;B,0.1 5%甲酸水溶液,梯度洗脱程序见表1;表 1 梯度洗脱条件时间/m
10、i n0.1 5%甲酸水溶液/%甲醇/%流速/(m L/m i n)05 5.04 5.00.41.05 5.04 5.00.43.02 0.08 0.00.48.05.09 5.00.41 2.05.09 5.00.41 3.05 5.04 5.00.41 7.05 5.04 5.00.4 c)流速:0.4 m L/m i n;d)柱温:4 0;e)进样量:1 0 L。8.3.2 质谱条件如下:a)离子源:电喷雾离子源;b)扫描方式:正离子扫描;c)检测方式:多反应监测模式;d)其他参考质谱条件参见附录B。8.3.3 定性测定按照上述测定样品和基质标准工作液,样品中待测物质的保留时间与基质标
11、准工作液的保留时间偏差在2.5%之内;定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标准工作液的相对丰度一致,相对丰度偏差不超过表2规定的范围,则可判定为样品中存在相应的待测物。表2 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/%5 02 05 01 02 01 0允许的相对偏差/%2 02 53 05 08.3.4 定量测定根据样液中被测物的含量情况,选取响应值相近的基质标准工作液进行色谱分析。基质标准工作液和样液中待测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。3S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准在上述仪器条件下,5种酰胺类杀菌剂的参考保留时间参见表B.1,5种酰胺类标准溶液多反
12、应监测(MRM)色谱图参见附录C。8.3.5 空白试验除不加试样外,均按上述操作步骤进行。9 结果计算和表述用色谱数据处理软件或按式(1)计算试样中药物的残留含量。计算结果需扣除空白值:Xi=ciVm(1)式中:Xi 试样中药物残留量,单位为微克每千克(g/k g);ci 从标准曲线中测得的药物浓度,单位为纳克每毫升(n g/m L);V 样液最终定容体积,单位为毫升(m L);m 最终样液代表的试样质量,单位为克(g)。1 0 方法的定量限和回收率1 0.1 定量限本方法中双炔酰菌胺、噻唑菌胺、吲唑磺菌胺、硅噻菌胺、吡噻菌胺定量限均为1 0.0 g/k g。1 0.2 回收率5种酰胺类杀菌剂
13、在葡萄、白菜、芹菜、黄瓜、番茄、草莓、花生、猪肉中的回收率的实验数据参见附录D。4S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准附 录 A(资料性)标准物质的基本信息表A.1 酰胺类标准物质的基本信息序号中文名称英文名称C A S号分子式分子量1噻唑菌胺e t h a b o x a m1 6 2 6 5 0-7 7-3C1 4H1 6N4O S23 2 0.4 32双炔酰菌胺m a n d i p r o p a m i d3 7 4 7 2 6-6 2-2C2 3H2 2C l NO44 1 1.8 83吡噻菌胺p e n t h i o p y r a d1 8 3 6 7 5
14、-8 2-3C1 6H2 0F3N3O S3 5 9.4 14硅噻菌胺s i l t h i o p h a m1 7 5 2 1 7-2 0-6C1 3H2 1NO S S i2 6 7.4 65吲唑磺菌胺a m i s u l b r o m3 4 8 6 3 5-8 7-0C1 3H1 3B r F N5O4S24 6 6.3 15S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准附 录 B(资料性)质谱参考条件1)质谱参考条件如下:a)电喷雾电压:3 0 0 0 V;b)鞘气压力:3 5 0 0 k p a(2 0 a r b);c)毛细管温度:2 7 5;d)干燥气压力:1 4
15、 0 0 k p a(8 a r b);e)干燥气温度:2 0;f)其他质谱参数参见表B.1。表B.1 5种酰胺类杀菌剂保留时间、定性离子对、定量离子对、去簇电压和碰撞气能量化合物保留时间/m i n离子对/(m/z)去簇电压/V碰撞能量/V噻唑菌胺6.6 13 2 1.0/1 8 3.0*3 2 1.0/2 0 0.09 62 22 6双炔酰菌胺7.3 84 1 2.0/3 2 8.0*4 1 2.0/1 2 4.98 81 43 5吡噻菌胺8.3 83 6 0.0/1 7 6.9*3 6 0.0/2 7 5.98 23 51 4硅噻菌胺8.4 92 6 8.0/1 3 8.9*2 6 8.
16、0/7 3.08 21 93 2吲唑磺菌胺9.5 14 6 6.0/2 2 6.7*4 6 6.0/1 4 8.18 12 24 6 *为定量离子对。1)非商业性声明:附录B所列质谱条件是在T S Q V a n t a g e质谱仪上完成的,此处列出试验用仪器型号仅是为了提供参考,并不涉及商业目的,鼓励标准使用者尝试采用不同厂家或型号的仪器。6S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准附 录 C(资料性)标准物质的多反应监测色谱图图C.1 5种酰胺类杀菌剂标准溶液的多反应监测色谱图(1.0 n g/m L)7S N/T5 4 4 02 0 2 2以正式出版文本为准附 录 D(资料性)添加回收试验数据表D.1 葡萄中5种酰胺类杀菌剂回收率范围化合物添加水平/(g/k g)回收率范围/%相对标准偏差/%噻唑菌胺1 09 8.01 0 2.01.72 08 6.09 7.04.61 0 01 0 2.71 0 7.01.65 0 0 08 0.08 9.64.5双炔酰菌胺1 09 4.01 0 5.04.92 01 0 4.01 1 5.53.71 0 01 1 4.41 2