1、下丘脑孤啡肽参与电针调整去卵巢下丘脑孤啡肽参与电针调整去卵巢大鼠大鼠LHLH异常释放的神经内分泌机制异常释放的神经内分泌机制 江苏省中医院内分泌科江苏省中医院内分泌科 安安 晓晓 飞飞 论文汇报论文汇报 OFQ对下丘脑对下丘脑GnRH和垂和垂体体LH释放的药理作用释放的药理作用（3-1）孤啡肽（孤啡肽（OFQ）19951995年年 下丘脑下丘脑 孤儿受体孤儿受体(ORL1)内源性配体内源性配体 EOP家族新成员，结构的同源性家族新成员，结构的同源性 痛觉的调制痛觉的调制 多种生理功能活动多种生理功能活动 神经内分泌？神经内分泌？1998 1998 PRL GH 研究背景研究背景 下丘脑下丘脑
2、卵巢卵巢 垂体垂体 GnRHGnRH FSH LH E2 P HPOA OFQ及其受体分布及其受体分布 GnRHGnRH调控部位调控部位 （MBH )MPO（内侧视前区）（内侧视前区）VMH（腹内侧核）（腹内侧核）ARC（弓状核）（弓状核）下丘脑下丘脑OFQ与与GnRH释放的调节有关系吗？释放的调节有关系吗？EOP系统的比较系统的比较 1998年电生理膜片钳年电生理膜片钳 临床疗效和动物实验临床疗效和动物实验 针灸和血针灸和血b-内啡肽内啡肽 围绝经期妇女雌激素替代治疗围绝经期妇女雌激素替代治疗 电针调整去卵巢大鼠电针调整去卵巢大鼠HPOA异常功能异常功能 问题问题 OFQ?GnRH-LH-E
3、2 研究方法研究方法 实验动物实验动物 去卵巢大鼠去卵巢大鼠 实验方法实验方法 icv injection in vitro incubation RIA ICC RT-PCR Western blot The dose response curves for the effect of OFQ on plasma LH levels of OVX rats (bP0.05 vs control)实验分组实验分组 Control组组 （ACSF，10 l,icv）OFQ组组 (20nmolOFQ，10 l,icv)NC13+OFQ组组(20nmol NC13+20nmolOFQ,icv)NC1
4、3组组 (20nmol NC13，10 l,icv)OFQ ORL1 LH ORL1受体的选择性受体拮抗剂受体的选择性受体拮抗剂 Nphe1NC(1-13)NH2（NC13）?Effect of pretreatment with NC13 on the decrease of plasma LH level induced by OFQ (bP0.05 vs control)M:Marker A:hippocampus B:pituitary C:hypothalamus RT-PCR analysis for the expression of ORL1 receptor 问题问题 OFQ
5、对垂体对垂体LH释放是否直接作用？释放是否直接作用？Effect of OFQ on the LH release from pituitary fragments in vitro Western blot analysis for the expression of ORL1 receptor A hypothalamus B pituitary C hippocampus The dose response curves for the effect of OFQ on GnRH release in POA of hypothalamus in PPP OFQ对垂体对垂体LH释放释放（
6、间接作用）（间接作用）是否通过是否通过GnRH？OFQ GnRH OFQ LH 40min 2h OFQ LH?GnRH 直接观察直接观察OFQ抑制抑制LH 分分泌过程中泌过程中GnRH的变化的变化 GnRH 神经元在脑内的分布神经元在脑内的分布 The different subtypes of GnRH-IR neurons(800)A13:spins subtype B13:smooth subtype Effect of OFQ on the number of GnRH-IR neurons of OVX rats（bP0.05 vs control）大鼠下丘脑区冠状切面概观（大鼠下
7、丘脑区冠状切面概观（10）下丘脑神经解剖和正中隆起下丘脑神经解剖和正中隆起GnRH阳性纤维阳性纤维 Effect of NC13 and OFQ on GnRH-IR fibers in ME (800)The relative density analysis for GnRH-IR fibers in ME hypothalamus (bP0.05 vs control)Co-localization of ORL1 mRNA in GnRH-IR neurons in rat hypothalamus.(ORL1 green;GnRH red and double labeled cel
8、ls yellow)OFQ has no significant effect on the release of NE and DA from medial basal hypothalamus of rats(HPLC)国外研究国外研究 OFQOFQ可抑制神经细胞可抑制神经细胞GluGlu的释放的释放（in vitro and in vivo)GluGlu是调节是调节GnRHGnRH释放兴奋性神经递质（释放兴奋性神经递质（NMDA and KA)NMDA and KA)调控调控GnRH释放的因素释放的因素(+NE,DA,Glu)(-NPY?)NMDA受体的选择性受体拮抗剂受体的选择性受体拮
9、抗剂 MK-801 （0.2mg/kg,sc）实验分组实验分组 Control组组 （ACSF，icv）OFQ组组 (200nmolOFQ，icv)MK801+OFQ组组(0.2mg/kg,sc+200nmolOFQ,icv)MK801组组 (0.2mg/kg,sc)NMDA Effect of pretreatment with MK801 on the decrease of plasma LH levels induced by OFQ (bP0.05 vs control.eP0.05 vs OFQ group)The dose response study for the effec
10、t of NC13 on plasma LH levels of OVX rats (bP0.05 vs control)小小 结结 下丘脑下丘脑OFQ可能通过可能通过ORL1 受体介导受体介导抑制抑制GnRH的释放，从而减少垂体的释放，从而减少垂体LH的的分泌，使血分泌，使血LH水平降低。水平降低。NMDA受体受体也可能部分介导了该作用。也可能部分介导了该作用。提示提示OFQ可可能参与了对能参与了对GnRH和和LH释放的生理调节释放的生理调节作用，下丘脑可能存在作用，下丘脑可能存在OFQ-Glu-GnRH神经调节通路神经调节通路。思考？思考？OFQ可抑制可抑制GnRH和和LH的释放的的释放的
11、药理和生药理和生理作用（理作用（OFQ和和NC13有潜在的治疗作用）。有潜在的治疗作用）。OFQ及其受体及其受体ORL1可能为调整更年期综可能为调整更年期综合症和性早熟神经内分泌异常提供等新的药合症和性早熟神经内分泌异常提供等新的药物治疗靶点物治疗靶点。（丹参酮）（丹参酮）下丘脑下丘脑OFQmRNA及其蛋白水平可以作为及其蛋白水平可以作为筛选调节筛选调节GnRH分泌中西药物的探针分泌中西药物的探针。发表论文发表论文 Involvement of Nociceptin/Orphanin FQ in release of hypothalamic GnRH mediated by ORL1 receptor in ovariectomized rats Acta Pharmacologica Sinica(SCI,IF=1.125)2005 Sep,26(9):10391044