1、 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House.All rights reserved.http:/CK56在乳腺导管内增生性病变中的表达及意义3陈定宝,沈丹华3 3,虞有智,王 颖,宋秋静,阚 秀(北京大学 人民医院病理科,北京 100044)摘要 目的 探讨CK56在乳腺导管内增生性病变(IDPL)中的表达情况及鉴别诊断意义,讨论Boecker提出的乳腺干细胞理论的应用价值。方法 根据WHO(2003)乳腺肿瘤分类标准对101例IDPL进行分类,大部分病例均含有1种以上病变。应用免疫组化进行CK56、CK18、SM
2、A染色,观察其在不同类型病变及正常乳腺组织中的表达。结果 观察普通性导管增生(UDH)74处、柱状细胞病变(CCL)74处、非典型性导管增生(ADH)49处及导管原位癌(DCIS)28处,共225处病灶;并观察33处正常乳腺组织。随着乳腺IDPL级别的增高,CK56的表达逐渐丢失,表达部位也不相同。在正常乳腺组织和UDH中,阳性细胞主要位于基膜侧和近腔缘侧,UDH腺腔中的阳性细胞排列呈弥漫性、拼花状或马赛克状;ADH阳性细胞主要位于基膜侧,腺腔内可见少量散在的阳性细胞;而低级别DCIS腺腔内阳性细胞则完全消失,CCL腺腔内也见不到阳性细胞。结论 乳腺组织中存在着干细胞,CK56的表达部位、数目
3、和方式的不同有助于乳腺IDPL的鉴别诊断。关键词 乳腺;导管内增生性病变;CK56;免疫组化中图分类号R655.8文献标识码A文章编号1007-8096(2008)05-0386-04Expression of CK56 in introductal proliferative lesions of breastCHEN Din 2bo,SHEN Dn2hu,Y U Y ou2zhi,et al.(Department of Pathology,Peking University Peoples Hospital,Beijin100044,China)Abstract:ObjectiveT o
4、 study the expression of CK56 and its value in differential diagnosis of introductal proliferative lesionsof the breast,and to discuss the hypothetical progenitor(adult stem cell)concept proposed byBoecker.Methods101 casesofintraductal proliferative lesion(IDPL)were selected and classified according
5、 to WHO histologic classification of breast tumors(2003),most of which had more than one lesion.The immunohistochemical stainingof CK56,CK18 and SMA was performed inall IDPL and normal breast tissues.ResultsT otally 225 foci of usual ductal hyperplasia(UDH,74 foci),columnar cell lesion(CCL,74foci),a
6、typical ductal hyperplasia(ADH,49foci),and ductal carcinoma in situ(DCIS,28foci)and 33foci of normalbreast tissue were observed.The expression of CK56 was lost as the grade of IDPL increasing.The sites of expression were alsodifferent.The positive cellswere mainly luminal and basal in normal breast
7、tissue and UDH,the patternsof which appeared diffuseor mosaic;whereas in ADH they were basal cells,onlyfew of luminal cells were positive.None of positive cells were detected inluminal cellsof low grade of DCIS,neither were CCL.ConclusionsThe stem cells do exist in the breast,whose differentiationan
8、d clonal pattern are different in different IDPL.The sites,number and pattern of CK56 immunostaining are useful fordifferential diagnosis of IDPL of the breast.Key words:Breast;Intraductal proliferative lesion;CK56;Immunohistochemistry3基金项目:北京大学人民医院研究发展基金(P870);3 3通讯作者。长期以来,人们一直认为乳腺组织中存在着两种细胞,一种是腺上皮
9、细胞,另一种是肌上皮细胞,并以此解释乳腺病变的渐进性发展过程,即良性增生 非典型增生 原位癌 浸润性癌。但这种模式存在明显的缺陷,难以解释病变的异质性,如普通性导管增生中增生细胞的多样性。近年来研究表明,乳腺组织中存在着干细胞1-3,其中以Boecker3提出的乳腺干细胞理论最具有代表性。他认为干细胞经过中间型细胞进一步分化为终末腺上皮细胞和肌上皮细胞,不同阶段的细胞,其免疫表型亦不相同,基本解释了不同病变的异质性(图1)。乳腺导管内增生性病变(intraductal proliferative683J Diag Pathol,October 2008,Vol.15,No.5 1994-201
10、0 China Academic Journal Electronic Publishing House.All rights reserved.http:/lesion,IDPL)包括普通型导管 增 生(usual ductalhyperplasia,UDH)、柱 状 细 胞 病 变(columnar celllesion,CCL,包括柱状细胞变、柱状细胞增生和扁平上皮不典型性)、非典型导管增生(atypical ductalhyperplasia,ADH)和导管原位癌(ductal carcinoma insitu,DCIS)。其中UDH、ADH和DCIS进展为浸润性癌的危险性逐渐增加,三
11、者之间的鉴别有时较为困难,尤其是旺炽型UDH与ADH、ADH(特别是重度非典型增生)与低级别DCIS之间,临床上对这些病变的处理不尽相同,因此鉴别诊断具有重要意义。本研究旨在通过实验讨论乳腺干细胞的存在,并探讨CK56在IDPL中的表达及意义。1 材料与方法111材料 收集北京人民医院20032005年存档的乳腺IDPL病理标本101例,复习所有病例的临床病理资料,其中乳腺增生症或导管内乳头状瘤伴轻2重度非典型增生81例,导管内原位癌20例,大多数组织标本均含有1种以上不同的病变以及正常的乳腺组织,即末端导管小叶单位(terminalduct2lobular unit,TDLU),根据WHO(
12、2003)乳腺肿瘤分类标准对其进行诊断和分类4。112 方法 标本固定于4%中性甲醛溶液,石蜡包埋,常规切片,HE染色。免疫组化采用EnVision两步法。鼠单克隆一抗为CK56(D516B4)、CK18(CD10)、SMA(IA4),所有抗体及试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术有限公司。阳性对照为正常乳腺组织,PBS代替一抗作阴性对照。113 结果判定 CK56、CK18、SMA阳性部位为胞质,判断结果采用半定量方法,阳性细胞 5%为(+),5%为(-)。所有病例均观察近腔缘侧和基膜侧两类细胞的表达方式。114 统计学分析 计数资料采用2检验。2 结果225处病灶及33处正常乳腺组织中UDH
13、74处,CCL 74处(柱状细胞变31、柱状细胞增生26、扁平上皮不典型性17),ADH 49处,DCIS 28处(低级别14,中间型11,高级别3)。211 各种标记物的表达 CK56:正常乳腺组织、UDH、ADH、DCIS基膜侧细胞阳性,正常乳腺组织、UDH、ADH近腔缘侧可见阳性细胞,其中以UDH阳性细胞数较多(9312%),排列呈弥漫性、拼花状或马赛克状(图2A,2B);而ADH中则阳性细胞数较少且散在(3818%)(图3A,3B);所有DCIS病灶腺腔内则均无阳性细胞(图4A,4B)。CK56在UDH、ADH、DCIS的表达组间两两比较均差异极显著(P0101)。CCL腺腔内也见不到
14、阳性细胞。CK18:阳性细胞均位于腺腔内,正常乳腺组织TDLU中腺腔侧细胞多呈阳性表达,UDH中阳性细胞排列呈拼花状,CCL、ADH、DCIS则弥漫阳性。SMA:IDPL的基底膜和近基膜侧细胞均呈阳性,正常乳腺组织和UDH的腺腔内可见散在的阳性细胞,CCL、ADH、DCIS腺腔内则见不到阳性细胞。212 各种抗体的表达 见表1。表1 抗体在正常乳腺组织和乳腺IDPL中的表达组别nCK56+CK18+SMA+近腔缘侧(%)基膜侧近腔缘侧基膜侧近腔缘侧基膜侧正常乳腺组织3331(94.0)33330033UDH7469(93.2)371740074CCL740(0)31420042ADH4919(
15、38.8)342490049DCIS280(0)3172000203UDH与ADH、UDH与DCIS、ADH与DCIS间两两比较,2依次为42196、70111、10170,均P0.01。3 讨论 人类乳腺组织含有2种不同的上皮细胞:腺腔内层的腺上皮细胞和外层的肌上皮细胞,前者表达CK81819,后者表达SMA。过去一般认为乳腺肿瘤均来源于腺上皮细胞,而乳腺癌中肌上皮细胞减少或消失,并以此来鉴别是否有浸润或癌变。1998年,K ordon等1通过对移植的单个乳腺细胞的研究,以及近年Lakhani等2对乳腺肌上皮细胞的分子研究,提示鼠和人的乳腺组织中均存在着一种干细胞(stem cell)。Bo
16、ecker等3的研究表明,乳腺腺上皮783诊断病理学杂志2008年10月第15卷第5期 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House.All rights reserved.http:/和肌上皮细胞具有共同的祖细胞(progenitor cell),即定向干细胞(committed stem cell)。认为在正常乳腺组织中,这种表达CK5的祖细胞可分化为腺上皮细胞和肌上皮细胞,两种细胞分别表达CK81819和SMA。此外,在分化过程中还存在着一种过渡细胞,即腺上皮细胞和肌上皮细胞的前体细胞。因此,他们认为正常乳腺组织存在以下5种细胞成分:定向干细胞(祖细胞)(CK5+);腺上皮前体细胞(CK5+CK81819+);腺上皮终末细胞(CK81819+);肌上皮前体细胞(CK56+SMA+);肌上皮终末细胞(SMA+)。在干细胞的分化过程中,起始表达CK56的定向干细胞逐渐获得CK81819和SMA的表达,并逐渐丢失CK56的表达。该模型有助于解释和区分不同类型导管内上皮增生(如UDH、导管小叶原位癌和浸润癌)。这