1、附件 1 I IgMgM 捕捉捕捉 ELISAELISA 法(法(MacELISAMacELISA)检测出血热)检测出血热 IgMIgM 抗体抗体 本试剂盒系采用抗人 链捕获人血清 IgM 抗体,加辣根过氧化物酶病毒抗原标记物,用以检测出血热特异性 IgM 抗体。具有较高的敏感性、特异性和重复性。特别适用于出血热的早期特异性诊断及其它实验性研究。本试剂盒为 96人份/包装。试验材料:试验材料:(1)抗人 IgM 抗体(链):用 pH9.5 的包被液包被酶标板(2)冻干阳性血清/冻干阴性血清 1 支,0.2ml/支,工作浓度为 1:10;(3)冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物 1 支,0.5ml
2、/支,工作浓度为1:20;(4)冻干小牛血清 1 支,1ml/支;(5)浓缩洗液(10 倍浓缩)1 瓶,50ml;(标本稀释液为含 5%小牛血清原倍洗液);(6)A/B 显色液和终止液各 1 瓶。(冻干试剂先用相应量的去离子水溶解,然后临用前根据所需按工作浓度稀释使用,余下的放-20保存)(7)终止液:4N H2SO4(8)酶标仪。检测步骤检测步骤:(1)将待检血清用稀释液 100 倍稀释,加入已包被抗人 链抗体的酶标板一孔中,100l/孔,同时加入已 1:10 稀释的阳性血清/阴性血清对照各一孔,100l/孔,置 37水浴孵育 1 小时。(2)弃去血清,用 PBST 漂洗 5 遍,甩干。(3
3、)将冻干辣根过氧化物酶病毒抗原标记物 1:10 稀释后,加入反应板相应孔内,100l/孔,37水浴孵育 1 小时。(4)弃去酶标抗体,用洗涤液洗涤 6 次,甩干。(5)加显色液:于各反应孔内加 A/B 液各一滴,37,避光 35 分钟。(6)加终止液(4NH2SO4)于每反应孔,一滴/孔。结果判断:结果判断:(1)目测方法:阳性对照孔呈明显蓝色,阴性对照孔呈无色,对照成立;若待检血清孔呈明显淡蓝色或深蓝色(TMB),则标本为出血热 IgM 抗体阳性,反之阴性。(2)酶联免疫检测仪检测:于 450nm(TMB)阳性对照孔 OD 值/阴性对照孔 OD 值,即 P/N2.1,对照成立;若待检血清孔 OD 值与阴性对照孔 OD 比值2.1,则标本为流行性出血热 IgM抗体阳性,反之阴性。(阴性对照孔 OD 值小于 0.05 按 0.05 记,若大于 0.05 按实际数值计算)意义:意义:阳性结果,表明患者新近汉坦病毒感染,用于出血热早期诊断。