1、云南桑树病菌初步鉴定及其对云南桑树病菌初步鉴定及其对咪酰胺的敏感性测定咪酰胺的敏感性测定 答答 辩辩 人：陈文智人：陈文智 指导教师：杜指导教师：杜 飞飞 20122012年年6 6月月1212日日 园林园艺学院园林园艺学院 本科论文答辩本科论文答辩 汇报提纲汇报提纲 研究背景研究背景 结论与讨论结论与讨论 研究目的研究目的 研究内容研究内容 结果与分析结果与分析 研究背景：研究背景：在很多蚕区，桑树容易发生桑在很多蚕区，桑树容易发生桑树叶斑病，影响桑树的生长发育，桑叶老化树叶斑病，影响桑树的生长发育，桑叶老化脱落，造成桑叶减产，叶质下降，蚕儿食下脱落，造成桑叶减产，叶质下降，蚕儿食下病叶后，
2、吸收不到有利于蚕儿生长发育所需病叶后，吸收不到有利于蚕儿生长发育所需的营养，会降低蚕儿抗病的能力，影响蚕茧的营养，会降低蚕儿抗病的能力，影响蚕茧的产量和质量。的产量和质量。研究目的：研究目的：采用采用咪酰胺不同浓度咪酰胺不同浓度对桑树对桑树病菌的病菌的抑制率和抑制率和EC50研究，为提高桑树的研究，为提高桑树的产量和质量提供理论依据。产量和质量提供理论依据。研究内容：研究内容：以云南保山、曲靖两地区带以云南保山、曲靖两地区带有叶斑病的桑叶为材料，采用有叶斑病的桑叶为材料，采用菌落直径法菌落直径法，对杀菌剂咪酰胺的对杀菌剂咪酰胺的EC50进行测定。算出咪进行测定。算出咪酰胺对病原菌的酰胺对病原菌
3、的敏感性敏感性。带病桑叶带病桑叶 试验技术路线图试验技术路线图 植物保护学院何永红植物保护学院何永红老师提供编号为老师提供编号为SHBSHB的的病原菌病原菌 病原菌分离病原菌分离 病原菌活化病原菌活化 病原菌纯化病原菌纯化 单孢分离单孢分离 鉴定鉴定 形态鉴定形态鉴定 分子鉴定分子鉴定 农药测定农药测定 曲靖曲靖、保山保山、采集新采集新鲜带病桑叶鲜带病桑叶 5 5%NaCloNaClo处理处理 常温培养常温培养3 35 5天天 显微镜下显微镜下 常温培养常温培养35天天 菌株编号菌株编号 名称名称 采集地点采集地点 分离部位分离部位 病斑形状病斑形状 病斑颜色病斑颜色 1 1 保保2 2-2
4、2 保山保山 叶片叶片 斑点状斑点状 黑褐色黑褐色 2 2 曲曲4 4-1 1-1 1 曲靖曲靖 枝条枝条 斑点状斑点状 黑褐色黑褐色 3 3 曲曲6 6-2 2-1 1 曲靖曲靖 叶片叶片 条状条状 黑褐色黑褐色 4 4 曲曲5 5-1 1-1 1 曲靖曲靖 叶片叶片 斑点状斑点状 黑褐色黑褐色 5 5 曲曲5 5-1 1-2 2 曲靖曲靖 叶片叶片 斑点状斑点状 黑褐色黑褐色 6 6 曲曲2 2-2 2-2 2 曲靖曲靖 叶片叶片 斑点状斑点状 黑褐色黑褐色 7 7 曲曲2 2-1 1-2 2 曲靖曲靖 枝条枝条 斑点状斑点状 黑褐色黑褐色 8 8 曲曲5 5-2 2-1 1 曲靖曲靖 叶
5、片叶片 条状条状 黑褐色黑褐色 9 9 曲曲3 3-1 1-1 1 曲靖曲靖 叶片叶片 斑点状斑点状 黑褐色黑褐色 供试菌株分别从保山、曲靖采样得到。从桑树的叶片和枝条部位分离可得病原菌，病斑部有条状和斑点状，病斑颜色都为黑褐色。表表1 桑树病菌采集地点、分离部位和病症桑树病菌采集地点、分离部位和病症 编号 名称 正面形态 背面形态 孢子堆 1 保2-2 粉红色 丝状 粉红色 黑色 较少 2 曲4-1-1 白色 丝状 白色 黑色 丰富 3 曲6-2-1 米白色 有轮纹 絮状 桔黄色 有轮纹 黑色 丰富 4 曲5-1-1 米白色 有轮纹 丝状 白色 黑色 丰富 5 曲5-1-2 白色 丝状 桔黄
6、色 有轮纹 黑色 较少 6 曲2-2-2 白色 有轮纹 丝状 黑黄相间 有轮纹 黑色 丰富 7 曲2-1-2 黑白相间 有轮纹 絮状 黑黄相间 有轮纹 黑色 丰富 8 曲5-2-1 黑白相间 有轮纹 丝状 黑黄相间 黑色 丰富 9 曲3-1-1 黑白相间 有轮纹 丝状 黑黄相间 有轮纹 黑色 丰富 表表2 9种菌株在种菌株在PDA平板上的形态特征平板上的形态特征 A AB BA A、菌株在、菌株在PDAPDA平板上的正面形态平板上的正面形态 B B、菌株在、菌株在PDAPDA平板上的背面形态平板上的背面形态 图图1 菌株在菌株在PDA平板上的形态平板上的形态 序号 采样地点 孢子形状 孢子颜色
7、 孢子长（um）孢子宽（um）1 保山 孢子很小椭圆形 近无色，成堆时绿色 1.642.30 0.841.38 2 曲靖 纺锤形、长椭圆形或卵形 无色 长：914 2.54 3、8、9 曲靖 棒状中间4色胞同色，有尾和须。黑褐色 本长：11.8315.11 须长：5.439.84 尾长：2.024.93 2.303.63 4 曲靖 长卵形或倒棍棒形 榄褐色 孢子痕长：1448 孢子长：33147 孢子痕宽：613；孢子宽：933 5 曲靖 镰刀形或梭性 无色 9.5515.19 1.892.69 6 曲靖 长卵形、椭圆形或纺锤形 深蓝色或深紫色 1625 4.56 7 曲靖 小型孢子椭圆形或卵
8、形，大孢子椭圆形至长卵形 无色 小孢型子5.310.5 大型孢子7.517 小型孢子2.85 大型孢子2.55.5 表表3 桑树病害孢子形态桑树病害孢子形态 观察结果表明（表观察结果表明（表3 3和图和图2 2）1 1号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为亚木霉亚木霉（Trichoderma koningiiTrichoderma koningii），2 2号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为桑幹枯病（桑幹枯病（Phomopsis Phomopsis spsp）,3,3、8 8、9 9号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为拟盘多毛孢（拟盘多毛孢（PestalotiopsisPestalotiopsis），5
9、5号号菌株初步鉴定为菌株初步鉴定为禾赤霉菌（禾赤霉菌（Gibberella zeaeGibberella zeae），4 4号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为甘蓝甘蓝长尾交链孢霉（长尾交链孢霉（Alternaria brassicaeAlternaria brassicae），5 5号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为禾赤霉菌禾赤霉菌（Gibberella zeaeGibberella zeae），6 6号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为桑牙枯病（桑牙枯病（Fusarium Fusarium cerealiscerealis），7 7号菌株初步鉴定为号菌株初步鉴定为蔓枯病菌（蔓枯病菌（Didymell
10、a bryoniaeDidymella bryoniae）。A、3号菌株孢子形态 B、1号菌株孢子形态 C、5号菌株孢子形态 A C B A C B 形态学鉴定结果形态学鉴定结果 图图2 桑树病害孢子形态桑树病害孢子形态 分子鉴定结果：分子鉴定结果：本试验中分离的本试验中分离的9 9个菌株与从个菌株与从GeneBankGeneBank比对结比对结果表明，果表明，保保2 2-2 2、曲、曲4 4-1 1-1 1、曲、曲6 6-2 2-1 1、曲、曲5 5-1 1-1 1、曲曲5 5-1 1-2 2、曲、曲2 2-2 2-2 2、曲、曲2 2-1 1-2 2、曲、曲5 5-2 2-1 1、曲、曲3
11、 3-1 1-1 1号菌株是号菌株是亚木霉亚木霉 、桑干枯菌、桑干枯菌 、细极链格孢、细极链格孢 、甘蓝长尾交链孢霉甘蓝长尾交链孢霉 、禾赤霉菌、禾赤霉菌 、桑牙枯菌、桑牙枯菌 、蔓枯病菌蔓枯病菌 、细极链格孢、细极链格孢 、天竺葵链格孢、天竺葵链格孢 。菌种菌种 AccessionAccession MaxMax identident DescriptionDescription GenebankGenebank比对结果比对结果 保保2 2-2 2 AF218790.1AF218790.1 99%99%Trichoderma koningiiTrichoderma koningii 亚木霉亚
12、木霉 曲曲4 4-1 1-1 1 AB302247.1AB302247.1 99%99%Phomopsis spPhomopsis sp 桑干枯菌桑干枯菌 曲曲6 6-2 2-1 1 HM467832.1HM467832.1 99%99%Alternaria Alternaria tenuissimatenuissima 细极链格孢细极链格孢 曲曲5 5-1 1-1 1 JF439449.1JF439449.1 99%99%Alternaria brassicaeAlternaria brassicae 甘蓝长尾交链孢霉甘蓝长尾交链孢霉 曲曲5 5-1 1-2 2 HQ671191.1HQ67
13、1191.1 99%99%Gibberella zeaeGibberella zeae 禾赤霉菌禾赤霉菌 曲曲2 2-2 2-2 2 GU584950.1GU584950.1 99%99%Fusarium cerealisFusarium cerealis 桑牙枯菌桑牙枯菌 曲曲2 2-1 1-2 2 EU167573.1EU167573.1 99%99%Didymella bryoniaeDidymella bryoniae 蔓枯病菌蔓枯病菌 曲曲5 5-2 2-1 1 JQ417902.1JQ417902.1 100%100%AlternariaAlternaria tenuissimat
14、enuissima 细极链格孢细极链格孢 曲曲3 3-1 1-1 1 JF422727.1JF422727.1 99%99%Alternaria porriAlternaria porri 天竺葵链格孢天竺葵链格孢 表表4 分离菌株在分离菌株在Genebank比对结果比对结果 菌株菌株 抑制率抑制率 浓度浓度10ug/m10ug/ml l 浓度浓度30ug/m30ug/ml l 浓度浓度50ug/m50ug/ml l 浓度浓度100ug/ml100ug/ml 浓度浓度150ug/ml150ug/ml 保保2 2-2 2 0.50710.5071 0.66140.6614 0.70390.703
15、9 0.66930.6693 0.6220.622 曲曲4 4-1 1-1 1 0.30940.3094 0.25880.2588 0.22710.2271 0.30350.3035 0.50240.5024 曲曲6 6-2 2-1 1 0.55660.5566 0.72110.7211 0.70390.7039 0.29610.2961 0.80130.8013 曲曲5 5-1 1-1 1 0.52030.5203 0.66440.6644 0.77560.7756 0.84240.8424 0.85250.8525 曲曲5 5-1 1-2 2 0.4950.495 0.63830.6383
16、 0.71670.7167 0.79670.7967 0.80830.8083 曲曲2 2-2 2-2 2 0.50.5 0.55560.5556 0.59520.5952 0.73810.7381 0.8810.881 曲曲2 2-1 1-2 2 -0.3650.365 0.19570.1957 0.47830.4783 0.44780.4478 0.66090.6609 曲曲5 5-2 2-1 1 0.19650.1965 0.05880.0588 0.28590.2859 0.44710.4471 0.51410.5141 曲曲3 3-1 1-1 1 0.27650.2765 0.25880.2588 0.30240.3024 0.30590.3059 0.44710.4471 表表5 桑树病菌对咪酰胺的抑制率桑树病菌对咪酰胺的抑制率 实验表明咪酰胺对桑树病菌的抑制率较强，在咪酰胺浓度为实验表明咪酰胺对桑树病菌的抑制率较强，在咪酰胺浓度为10ug/ml，30ug/ml，50ug/ml，100ug/ml，150ug/ml的的PDA平平板上培养的桑树病菌抑制都较明显。板上培养的桑树病
