1、实验目的：掌握镇痛药的实验法掌握镇痛药的实验法 观察延胡索的镇痛作用观察延胡索的镇痛作用 掌握实验操作手法掌握实验操作手法 掌握常用动物疼痛模型的制备方法掌握常用动物疼痛模型的制备方法 实验原理：1.1.延胡索延胡索能行气活血止痛，其镇痛有效成能行气活血止痛，其镇痛有效成 分是延胡索乙素。热板法是筛选镇痛药的分是延胡索乙素。热板法是筛选镇痛药的经典方法：小白鼠的足部受热板刺激而产经典方法：小白鼠的足部受热板刺激而产生疼痛时，就发生生疼痛时，就发生舔后足舔后足的特殊反应。从的特殊反应。从接触热板到舔后足所需要的时间作为痛阈接触热板到舔后足所需要的时间作为痛阈值，以此为观察指标。值，以此为观察指标
2、。2.2.腹膜有广泛的感觉神经分布，把醋酸等腹膜有广泛的感觉神经分布，把醋酸等 化学刺激物注入腹腔，可使小鼠很快产生化学刺激物注入腹腔，可使小鼠很快产生疼痛反应，表现为腹部两侧内凹、躯体扭疼痛反应，表现为腹部两侧内凹、躯体扭曲和后肢伸展，成为曲和后肢伸展，成为扭体反应扭体反应。实验动物实验动物：雌性雌性小白鼠小白鼠20只只 实验器材实验器材：1ml灌胃灌胃器、器、电子秤、鼠笼、电子秤、鼠笼、温控热板仪、镊子、手套温控热板仪、镊子、手套 实验药品实验药品：延胡索水煎液（延胡索水煎液（0.2ml/10g）、）、生理盐水（生理盐水（0.2ml/10g)、醋酸、苦味酸醋酸、苦味酸 实验方法：A:热板法
3、 B：化学刺激法 热 板 法：1.将温控热板仪调至55 2.筛选并测定正常痛阈筛选并测定正常痛阈：将小鼠放入热板仪内，密切观察小鼠反应，以舔后足为痛觉指标。记录痛阈时间值（从小鼠放入热板镇痛仪到出现舔后足）。每只小鼠测痛阈2次（间隔5min），取其平均值为正常痛阈值（即药前痛阈），记下时间t1。凡在30s内不舔后足或痛阈小于5s的小鼠舍弃，每实验小组筛选合格小鼠20只，并将其随机分成2组，每组都标记好编号1-10.3.给药给药：第一组中给给药组1-5号用延胡索水煎液(0.2ml/10g)进行灌胃，对照组610号用生理盐水(0.2ml/10g)进行灌胃，并记录给药时间。4.测测痛阈变化值痛阈变化
4、值：给药后15min、30min各测一次痛阈，对60s内不出现舔足的小鼠应立即取出，痛阈按60s计算。(记录下痛觉时间t2)数 据 的 记 录 与 处 理 组别 给药前平均痛阈值 t1 t2 t 给药后平均痛阈值 镇痛百分率 t1 t2 t (%)1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 数 据 的 记 录 与 处 理 100%药阈用药前平均痛反应时间平均痛反应时间后痛反应时间用药前用提高百分率痛注意事项：注意事项：室温以室温以15201520为宜，过低则小鼠反应迟为宜，过低则小鼠反应迟钝，过高则过于敏感，而引起跳跃，影钝，过高则过于敏感，而引起跳跃，影响实验的准确性。响实验的准确性。正常小鼠
5、一般放在烧杯后正常小鼠一般放在烧杯后1015s1015s内出现内出现不安，举前肢，舔后足，踢后肢，跳跃不安，举前肢，舔后足，踢后肢，跳跃等现象。这些动作均不作为疼痛指标，等现象。这些动作均不作为疼痛指标，只有舔后足才作为疼痛的指标。只有舔后足才作为疼痛的指标。一般不选用雄鼠，因为雄鼠阴囊可触及一般不选用雄鼠，因为雄鼠阴囊可触及烧杯底部，易呈现敏感反应，影响结果烧杯底部，易呈现敏感反应，影响结果。化 学 刺 激 法 1 1.另一组另一组1 15 5号小白鼠号小白鼠用用延胡延胡索索水煎液水煎液(0.2ml/10g)(0.2ml/10g)进行灌胃进行灌胃，对照组，对照组6 61010号号用用生理盐水
6、生理盐水(0.2ml/10g)(0.2ml/10g)进行灌胃进行灌胃，记录，记录给药时间。给药时间。2 2.给药给药20min20min，各小鼠均腹腔注射醋酸，各小鼠均腹腔注射醋酸0.2ml0.2ml溶液，观察溶液，观察20min20min内各组出现扭体内各组出现扭体鼠数和扭体次数。鼠数和扭体次数。数 据 的 记 录 与 处 理 组别组别 药物剂量药物剂量 (ml)扭体鼠数扭体鼠数 镇痛百分率镇痛百分率 （次）（次）（%）1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 数 据 的 记 录 与 处 理 注意事项：注意事项：1.1.醋酸溶液宜新鲜配制。醋酸溶液宜新鲜配制。2.2.室温不能低于室温不能低于
7、1010摄氏度，否则不易摄氏度，否则不易发生扭体反应。发生扭体反应。3.3.给药组比对照组减少扭体发生率给药组比对照组减少扭体发生率50%50%以上才能认为有镇痛效力。以上才能认为有镇痛效力。4.4.小鼠体重轻，扭体反应发生率低。小鼠体重轻，扭体反应发生率低。延延胡胡索索 罂粟科植物延胡索（罂粟科植物延胡索（Corydalis yanhusuo）的干燥块茎的干燥块茎.味辛、苦，性温。归心、肝、肺经。功效活血、行气味辛、苦，性温。归心、肝、肺经。功效活血、行气、止痛止痛。临床用名有延胡、延胡索、元胡、玄胡索、。临床用名有延胡、延胡索、元胡、玄胡索、醋延胡索。醋延胡索。原植物生于低海拔旷野草地、丘
8、原植物生于低海拔旷野草地、丘地林缘。喜温暖湿润气候，耐旱、地林缘。喜温暖湿润气候，耐旱、怕旱、怕涝、怕强光射，以地势怕旱、怕涝、怕强光射，以地势高燥、向阳、排水良好、富含腐高燥、向阳、排水良好、富含腐殖质的中性或微酸性砂质壤土或殖质的中性或微酸性砂质壤土或壤土最宜生长壤土最宜生长 延胡索的镇痛 延胡索是临床最常用的止痛中药。现已将延胡索是临床最常用的止痛中药。现已将其制成各种剂型，广泛用于各种病症，尤其是其制成各种剂型，广泛用于各种病症，尤其是以疼痛为主的病症。延胡索的醇制浸膏、醋制以疼痛为主的病症。延胡索的醇制浸膏、醋制浸膏、散剂等均有明显镇痛作用。延胡索乙素浸膏、散剂等均有明显镇痛作用。延
9、胡索乙素镇痛作用最强，丑素次之，甲素较弱。镇痛作用最强，丑素次之，甲素较弱。延胡索延胡索乙素为镇痛主要有效成分，其镇痛乙素为镇痛主要有效成分，其镇痛作用较吗啡弱低但优于复方阿司匹林，其效价作用较吗啡弱低但优于复方阿司匹林，其效价为阿片的为阿片的1/101/10，作用持续，作用持续2 2小时。对钝痛的作小时。对钝痛的作用优于锐痛。与吗啡等麻醉性镇痛药相比副作用优于锐痛。与吗啡等麻醉性镇痛药相比副作用少而安全，没有成瘾性。镇痛时对呼吸没有用少而安全，没有成瘾性。镇痛时对呼吸没有明显抑制，也无便秘等副作用。醋制后，使游明显抑制，也无便秘等副作用。醋制后，使游离的生物碱与醋酸结合生成醋酸盐而易溶于水。离的生物碱与醋酸结合生成醋酸盐而易溶于水。使得醋制延胡索饮片煎液中有效成分的溶出率使得醋制延胡索饮片煎液中有效成分的溶出率显著提高，从而增强了止痛效果显著提高，从而增强了止痛效果。因此，延胡因此，延胡索治疗诸痛证，当以醋制为宜索治疗诸痛证，当以醋制为宜
