1、医学微生物学实验医学微生物学实验 微生物学教研室 2011年4月 实验内容 一一、细菌分布实验细菌分布实验 空气中细菌的检查（操作）空气中细菌的检查（操作）皮肤、日常物品细菌的检查（操作）皮肤、日常物品细菌的检查（操作）二二、细菌分离接种技术细菌分离接种技术（操作操作）平板划线接种法；斜面培养基接种法平板划线接种法；斜面培养基接种法 液体培养基接种法；半固体穿刺接种法液体培养基接种法；半固体穿刺接种法 三三、细菌在培养基上生长现象细菌在培养基上生长现象（示教示教）目的要求 认识细菌在外界的分布规律 掌握细菌分离培养基本技术 认识细菌在不同培养基中的生长现象 一、细菌的分布实验一、细菌的分布实验
2、（1）空气细菌检查）空气细菌检查 材料：培养基，普通琼脂平皿（2）皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查）皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查 材料：培养基，无菌生理盐水，75%酒精棉球，2.5%碘酒棉球，无菌棉棒（3）自来水中的细菌检查）自来水中的细菌检查 材料：培养基，无菌棉棒，酒精灯 1.1.空气中细菌的检查空气中细菌的检查(操作操作,4,4块块/室室)取三块琼脂平板，将取三块琼脂平板，将2 2个打开皿盖个打开皿盖 分别置于不同的环境分别置于不同的环境1530min1530min后，后，盖好皿盖。另外盖好皿盖。另外1 1个不启盖作为对个不启盖作为对 照。置照。置3737培养培养1824h182
3、4h。材料：材料：普通琼脂平板普通琼脂平板 方法：方法：结果：结果：计数菌落数，观察菌落数的差异。计数菌落数，观察菌落数的差异。2 2、皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查方法、皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查方法 在在1个平皿底部做好标记，分为个平皿底部做好标记，分为消毒前消毒前与与消毒后消毒后两个区域。两个区域。取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，在管壁上挤干水在管壁上挤干水后擦拭皮肤或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿后擦拭皮肤或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，消毒前区域，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。作来回划线，注意勿划破琼脂表面。将
4、将皮肤区域或物品皮肤区域或物品用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的平皿区域。毒后的平皿区域。平皿平皿37、24h培养后取出观察表面有无细菌生长，比培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。结果：结果：计数菌落数计数菌落数 371824h 消毒前 消毒后 自来水中的细菌检查 在在1个平皿底部做好标记。个平皿底部做好标记。用酒精灯对水管口灭菌，拧开水管开关放水用酒精灯对水管口灭菌，拧开水管开关放水15S。取一支
5、无菌棉签蘸取自来水，将该棉签涂布于标有消毒取一支无菌棉签蘸取自来水，将该棉签涂布于标有消毒前的无菌琼脂平皿表面，前的无菌琼脂平皿表面，作来回划线，注意勿划破琼脂作来回划线，注意勿划破琼脂表面。表面。将平皿于将平皿于37、24h培养后取出观察平皿表面有无细菌培养后取出观察平皿表面有无细菌生长，描述菌落特征。生长，描述菌落特征。1.半固體培養基接種法（操作）半固體培養基接種法（操作）2.斜面培養基接種法斜面培養基接種法 3.液體培養基接種法液體培養基接種法 細菌的接種法細菌的接種法（一）分離培養（一）分離培養 1.平板分離劃線接種法（操作）平板分離劃線接種法（操作）（二）純培養（二）純培養 接种环
6、（上）和接种针（下）接种环（上）和接种针（下）柄约22cm 25mm 绝缘柄 约7.5cm 金属柄约14.5cm 58cm 安装环(针)的螺口(约8mm)无菌操作无菌操作 无菌操作无菌操作 Aseptic area 10-20cm 外焰外焰 焰芯焰芯 内焰内焰 菌液采取法（一）平板划线接种法（分离培养法）（一）平板划线接种法（分离培养法）连续划线法 分段划线法 IV II I 1/5 I 1/10 Rotate 90 Flame loop Rotate 90 Rotate 90 III 1/4 Flame loop（一）平板划线接种法（分离培养法）（一）平板划线接种法（分离培养法）培养结果培养
7、结果 1 3 2 注意事项：注意事项：1.1.区之间接种区之间接种 要灭菌要灭菌 2.2.用力适当，不要划破用力适当，不要划破 琼脂表面琼脂表面 3.3.注意无菌操作注意无菌操作 （二）液体培养基接种法（二）液体培养基接种法（二）液体培养基接种法（二）液体培养基接种法（三）半固体穿刺接种法（三）半固体穿刺接种法 用途：观察细菌动力，保存菌种。斜面培养基接种法斜面培养基接种法（操作）（操作）用途：常用于扩大纯种细菌及实验室保存菌种。斜面培养基接种法斜面培养基接种法 液体培养基接种法液体培养基接种法 半固体培养基接种法（操作）半固体培养基接种法（操作）方法：穿刺接种方法：穿刺接种 结果：沿穿刺线生
8、长结果：沿穿刺线生长动力动力-扩散生长扩散生长动力动力+三、细菌在培养基上生长现象（示教）三、细菌在培养基上生长现象（示教）沉淀沉淀成链生长成链生长 浑浊浑浊均匀分散生长均匀分散生长 菌膜菌膜表面生长（需氧菌）表面生长（需氧菌）1.固体固体 2.半固体半固体 3.液体液体 菌落菌落 菌苔菌苔 动力动力+动力动力-固体培养基生长现象固体培养基生长现象 液体培养基中生长现象液体培养基中生长现象 沉淀生长沉淀生长 混浊生长混浊生长 表面生长表面生长 半固体培养基中生长现象半固体培养基中生长现象 有鞭毛 动力+无鞭毛 动力 沿刺线生长 混浊生长 培养基培养基 生长现象生长现象 用途用途 固体平板固体平板 固体斜面固体斜面 液体液体 半固体半固体 细菌在培养基上生长现象细菌在培养基上生长现象 实验报告实验报告 记录细菌分布实验实验结果 记录细菌在各种培养基上的生长现象
